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《广州中医药大学》 2002年
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猪苓多糖抗膀胱癌的作用机制研究

黄建华  
【摘要】: 本文主要研究猪苓多糖对膀胱癌细胞的直接作用,包括对膀胱癌细胞体外增殖、细胞凋亡、细胞周期、癌细胞内Ca~(2+)浓度以及p53、H-ras基因表达的影响。也研究了猪苓多糖对小鼠胸腺细胞凋亡过程的影响。 方法:本文以体外培养的人膀胱癌T24细胞株作为研究材料。①利用MTT比色法研究猪苓多糖对T24细胞的增殖抑制作用,绘制生长曲线,计算半数抑制浓度IC_(50)值(实验1)。②采用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡(实验2,实验3)。③采用流式细胞仪观察药物作用后T24细胞的细胞周期变化(实验2)。④利用荧光标记的Ca~(2+)探针,激光共聚焦显微镜定量检测加药后一定时限内细胞内Ca~(2+)浓度的动态变化(实验4)。⑤利用免疫荧光方法,激光共聚焦技术定量检测p53、H-ras基因表达的变化(实验5)。统计分析采用PEMS Version 2.1软件完成,实验1、实验2、实验3的数据用成组数据多样本两两比较的秩和检验,实验4、实验5的数据用两样本均数的比较t检验。 结果:①低浓度猪苓多糖(≤400μg/ml)时,对膀胱癌T24细胞的生长不产生明显影响,随着浓度的增高,猪苓多糖能抑制T24细胞的增殖,其IC_(50)值为7.60mg/ml,药物作用效能比为1.53。②猪苓多糖10μg/ml,100μg/ml,200μg/ml,1mg/ml,2mg/ml作用人膀胱癌T24细胞24,48小时后,琼脂糖凝胶电泳未见DNA ladder,仅见基因组DNA条带,流式细胞仪检测猪苓多糖各浓度凋亡率与对照组比较差异无显著性(P>0.05);作用T24细胞24小时,对T24细胞周期分布没有明显影响,作用48小时后,使G1期细胞减少,S期细胞堆积,G2期细胞减少。③猪苓多糖10μg/ml,100μg/ml,200μg/ml,1mg/ml,2mg/ml浓度作用小鼠胸腺细胞24小时后,琼脂糖凝胶电泳未见DNA ladder,仅见基因组DNA条带。流式细胞仪检测猪苓多糖各浓度凋亡率与对照组比较差异无显著性(P>0.05);对地塞米松诱导的胸腺细胞凋亡具有抑制作用,使胸腺细胞的凋亡率下降,随着浓度升高,下降越明显。④猪苓多糖低剂量(0.2μg/ml)使T24细胞内钙先降低,然后回到正常水平,高剂量(>1μg/ml)使T24细胞内钙升高,最后维持在高钙水平上。猪苓多糖主要促进细胞核内Ca~(2+)升高,细胞浆Ca~(2+)无明显改变。⑤猪苓多糖显著增加p53蛋白表达,24小时表达达最高,呈弥漫性地分布,随后逐渐下降,对照组在24小时表达很弱,48小时表达最强;猪苓多糖对H-ras基因蛋白表达无明显影响。 结论:①猪苓多糖能抑制人膀胱癌T24细胞的增殖,并且对WI-38细胞 硕士学位论文:猪谷多糖抗膀棚癌的作用机制研究·摘要 抑制作用较小。②猪菩多糖不能引起人膀眺癌T24细胞DNA的片段化,推断 猪芬多糖不能诱导人膀眈癌T24细胞的凋亡。对T24细胞细胞周期分布有一定 影响,能将T24细胞阻滞在S期。③猪苔多糖不能诱导胸腺细胞凋亡。对地 塞米松诱导的小鼠胸腺细胞凋亡具有抑制作用,推测其抑制作用机制是干扰了 地塞米松介导的细胞信号传导过程。④猪菩多糖可引起 T24细胞内 Ca‘”水平 的显著变化,而且这种变化主要表现在细胞核内,提示猪菩多糖参与了人膀 眈癌T24细胞信号传导过程并参与将信息传入核内。⑤猪菩多糖对T24细胞 n53基因蛋白表达有一定的凋节作用。对H*as基因蛋白表达无明显影响。
【学位授予单位】:广州中医药大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:R273

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【参考文献】
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