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《广州中医药大学》 2007年
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从正交拆方及化学特征谱追踪助孕3号方物质基础的研究

许惠珍  
【摘要】: 目的本课题归纳这十多年“助孕3号方”实验及临床的平台,通过正交拆方深化研究肾虚黄体抑制流产动物模型在“助孕3号方”影响下对自然流产的防治作用,探讨该复方中补。肾方及健脾方对全方作用的贡献程度与优选剂量配比,分析重要药效成分与主要药效学结果的联系。采用水提取液乙醇沉淀法将“助孕3号方”分离成两个化学部位,通过化学结构的特性作含量测定与药效学追踪有效物质的集中部分,将正交实验中各方指标与方中的物质含量进行相关分析,初步确定有效物质其峰群的时间相。 实验及临床的研究概况“助孕3号方”针对流产多个环节进行整体治疗的实验研究,主要在药物对内分泌、免疫耐受、子宫平滑肌兴奋性、蜕膜细胞因子,细胞因子受体与基因表达调控等方面的影响展开。“助孕3号方”的安胎机理与调节母体内分泌功能,提高雌二醇、孕酮等激素水平,增加子宫蜕膜PRL-R、PR、ER表达、降低离体子宫兴奋性抑制子宫收缩作用、提高封闭抗体等有关,并能纠正早孕先兆流产患者Th_1、Th_2型细胞因子平衡的偏移,使蜕膜Th_1/Th_2平衡偏向Th_2型。通过对拟除虫菊酯农药染毒模型生殖毒性的干预,阐明“助孕3号方”对细胞因子受体与Cx43基因表达调控作用。从多角度之流产模型反复验证,以米非司酮(RU486)造成黄体抑制流产模型,流产率达到83%;以核苷酸还原酶抑制剂羟基脲造成妊娠期肾虚模型,流产率为60%;缩宫素合针灸模型,流产率为93%;在妊娠期肾虚、脾虚造模的基础上建立黄体抑制模型,从而造成肾虚黄体抑制模型和脾虚黄体抑制模型,属于病证结合模型,以利血平造成妊娠期脾虚模型,流产率为53.85%,以羟基脲造成妊娠期肾虚模型,其流产率均达到86%,该首创病证结合模型经鉴定为国内外领先水平。这些多角度造模验证,体现出“助孕3号方”研究先进性和可靠性。临床从多层次去观察剂型药效学、疗效性及安全性评价,表明了“助孕3号方”防治流产的作用。 实验方法及结果 1.助孕3号方对孕鼠流产率正交拆方方法及研究结果 运用正交设计对“助孕3号方”进行拆方研究,确定影响因子和水平数,按照正交表L_9(3~2)的设计,实验重复两次,观察“助孕3号方”对肾虚黄体抑制流产动物模型的影响。 流产率结果表明,补肾方对全方降低流产率的贡献度最大(P<0.01),健脾方的贡献度次之(P<0.01),说明补。肾方对全方降低流产率中起主要作用,健脾方的作用次之,两者表现出明显的协同作用(P<0.05)。 孕激素水平结果表明,补肾组方和补脾组方对全方提高流产大鼠孕激素水平的贡献度相近(P<0.01),说明补肾方和补脾方在全方提高肾虚黄体流产动物的孕激素水平中均起主要作用。 雌二醇水平结果表明,补肾方对全方提高流产大鼠雌二醇水平的贡献度最大,健脾方的贡献度次之,说明补肾方对全方提高肾虚黄体抑制流产动物的雌二醇水平中起主要作用(P<0.01),健脾方的作用次之(P<0.05),两者表现出明显的协同作用。 从流产率、孕激素和雌二醇水平结果均表明“助孕3号方”以补肾为主导、健脾为次,这与罗元恺教授指出“胎孕的形成,主要在于先天之肾气,而长养胎元,则在于母体后天脾胃所生化之气血。因此肾虚不固,脾失摄养为胎动不安之发病关键。”的理论一致。 病理形态学检测结果表明,模型组流产率明显高于用药组(P<0.01),9方中Ⅰ水平(方1至方3)的流产率相对大,二水平(方4至方6)的流产率已下降,三水平(方7至方9)的流产率最低;其结果与流产率、孕激素及雌二醇正交拆方一致,均表明A383防治流产作用最大。 综合分析流产率,孕激素水平和雌二醇水平,贡献度进行加权结果表明,补肾方在全方中起主要作用,健脾方作用次之,补肾方和健脾方之间具有明显的协同作用。这与罗老指出“胎有欲堕之兆,急需补肾健脾、固摄胎元法治之。”和《傅青主女科》“补先后二天之脾与肾,正所以固胞胎之气与血,脾肾可不均补乎!”的理论相符。 2.助孕3号方正交实验结果可靠性的验证方法及结果 正交设计结果结合综合分析,得出优选方。研究优选方及原方对肾虚黄体抑制流产动物模型的影响,以验证正交实验结果的可靠性。 实验结果表明,优选方及原方具有明显的抑制动物流产、提高实验动物的孕激素水平和雌二醇水平,说明正交实验结果是可靠的。 3.助孕3号方化学部位的分离及药效追踪 采用乙醇对“助孕3号优选方”提取液进行沉淀,分成醇溶液部分及沉淀物部分。采用肾虚黄体抑制流产动物模型对复方的有效物质进行药效追踪,以确定助孕3号方有效物质的集中部位。 实验结果表明,“助孕3号优选方”水提液的乙醇溶解部分及沉淀部分均具有明显的抑制肾虚黄体抑制流产动物模型的流产率,提高流产动物的孕激素水平和雌二醇水平,说明“助孕3号优选方”水提液的乙醇溶解部分及沉淀部分均为有效成分的集中部位。 4.运用相关分析手段,初步确定助孕3号方的有效物质 方法复方水提液乙醇溶解部分:正交设计9个拆方水提液,经大孔树脂处理后,液相进样,采用梯度洗脱的方法测定进样物质的峰面积,与正交设计的药效学指标进行相关性相关性分析。沉淀部分:采用药典方法测定沉淀部分的多糖含量,与正交设计的药效学指标进行相关性分析。 结果相关度分析结果表明,2.93min、3.75min、14.79min、27.48min、35.35min、45.5min、56.33min、89.90min、94.43min、112.1min、134.89min的时间峰以及多糖的相关度大于0.7,可能是助孕3号方起效物质。 5.助孕3号方相关分析结果的间接验证 方法运用肾虚黄体抑制流产动物模型,验证“助孕3号优化方”的有效物质集中部分及剩余物质部分的药效,以验证相关分析结果的可靠性。 结果实验结果表明,有效物质集中部分具有明显降低流产率的作用,而剩余物质的作用较弱,在一定程度上验证了通过相关分析寻找复方有效物质的方法在一定程度上是可行的和可靠的。 结论本研究成功地应用了正交设计研究了“助孕3号方”的组成,复方补肾方和健脾方之间的配伍规律。实验结果表明两个组成复方在多个指标中的相互作用。正交实验结果对于“助孕3号方”在临床的配伍使用及剂量的掌握具有一定的指导意义。本研究还成功运用了数学手段相关分析寻找“助孕3号方”的有效物质结构峰群的时间相,制定化学图谱标准,为日后进一步分离有效成分物质提供了初步基础。同时本研究说明“助孕3号方”能通过作用于不同靶点而达到降低肾虚黄体抑制动物的流产率。
【学位授予单位】:广州中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R289

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10 杨荣平;补骨质缓释片的药学研究[D];成都中医药大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘昱磊;助孕3号方治疗自然流产的实验研究和临床观察[D];广州中医药大学;2001年
2 张翔;基于BSC的商业银行业务流程再造的执行体系及实证研究[D];东华大学;2005年
3 李德冠;聚乳酸微球制备及人参皂甙Rg_3微囊研究[D];吉林大学;2005年
4 范芳芳;紫草脂肪乳液注射剂的研制[D];石河子大学;2005年
5 甄文栋;山东省城市酸沉降状况及成因研究[D];山东大学;2005年
6 林娜;小麦新品种川农16品质性状杂种优势研究[D];四川农业大学;2005年
7 安玉莲;产业集群与区域竞争力关系研究[D];中国海洋大学;2005年
8 卢瑜佳;学习型组织维度及其对企业绩效影响的研究[D];大连理工大学;2006年
9 蔡振华;洪水频率组合模型及工程应用研究[D];武汉大学;2005年
10 何建军;岩质边坡生态防护技术研究[D];中南大学;2005年
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