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《广州中医药大学》 2007年
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延胡索碱及延胡索复方抗冠心病室性心律失常的实验与临床研究

李荣  
【摘要】: 研究背景 当今,冠心病已成为人类三大死亡原因之一,我国冠心病的发病率正逐年上升。冠心病的基本病理生理就是心肌缺血,要挽救缺血心肌就必须及时、有效地恢复缺血心肌的再灌注。但是缺血心肌在恢复血流灌注后,往往引起缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion iniury,IRI)。如何防治心肌缺血再灌注损伤已成为心脏病学基础应用研究中的一个重要领域。 1986年Murry等发现缺血预处理可减轻IRI,但由于缺血预处理本身是一种损伤性因素,很难在临床推广应用,因此寻找安全有效的药物作为药物预处理手段防治IRI具有重要的现实意义。1988年,美国著名的CAST试验结果表明:抗心律失常药物有潜在致心律失常作用的危险性。这种危险性给发展中药预处理防治IRI,特别是抗再灌注心律失常带来了机遇和挑战。 近来在心血管疾病的防治研究中,特别是在治疗缺血性心脏病和抗心律失常方面,许多复方都选用了延胡索。延胡索是一种活血化瘀中药,现代药理研究表明,其具有增加冠脉流量、扩张血管、改善心肌营养性血流量及抗心律失常等作用。但是应用延胡索碱预处理抗心肌缺血再灌注损伤的实验研究及运用延胡索复方桃仁红花煎治疗冠心病室性心律失常的临床研究却未见报道。本课题即打算在此领域作些有益的探索。 实验研究 【目的】 通过动物实验,比较药物预处理与缺血预处理对心肌缺血再灌注损伤的作用效果,评价延胡索碱预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其药理作用机制。 【方法与内容】 采用SD大鼠,随机分为6组:假手术组、模型组、缺血预处理组、延胡索碱低、中、高剂量组。建立大鼠心肌缺血再灌注模型,运用膜片钳技术、流式细胞仪技术、免疫组化、电镜酶细胞化学和分子生物学等方法,从整体、细胞乃至分子基因水平探讨延胡索碱预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其药理作用机制。实验共分为六个部分。实验一:观察延胡索碱预处理对大鼠心肌缺血再灌注心律失常的影响。实验二:观察延胡索碱预处理对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响。实验三:观察延胡索碱预处理对缺血再灌注心肌Ca~(2+)-ATPase及Na~+-K~+-ATPase活性的影响。实验四:观察延胡索碱预处理对单个心肌细胞膜上L-型钙通道动力学的影响。实验五:观察延胡索碱预处理对缺血再灌注心肌细胞内游离Ca~(2+)浓度的影响。实验六:观察延胡索碱预处理对缺血再灌注心肌梗死范围的影响。 【结果】 1.室性心律失常发生率比较:延胡索碱中、高剂量组的室速(VT)和室颤(VF)的发生率显著降低,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),延胡索碱低剂量组上述指标变化无统计学意义(P>0.05);与缺血预处理组比较,延胡索碱中、高剂量组的VT和VF的发生率变化无统计学意义(P>0.05)。各组对室性早博(VPB)发生率的影响,差异无统计学意义(P>0.05)。 2.心律失常发生时间比较:延胡索碱低、中、高剂量组的心律失常出现时间明显推迟、持续时间明显缩短,与模型组比较差异有显著性(P<0.01)。与缺血预处理组比较,延胡索碱预处理虽也能推迟心律失常出现时间、缩短心律失常持续时间,但作用较之减弱(P<0.01)。 3.ST段抬高程度比较:在心肌缺血30min,再灌注20min和60min时间点时,假手术组ST段抬高程度无明显改变,模型组ST段则明显抬高;与模型组比较,缺血预处理组和延胡索碱预处理各剂量组ST段抬高幅度虽有所降低,但差异无显著性(P>0.05)。心率变化比较:与模型组比较,延胡索碱低、中、高剂量组,以及缺血预处理组均能明显减慢心率,差异有显著性(P<0.01);与缺血预处理组比较,延胡索低、中剂量组减慢心率的作用较之减弱(P<0.01),延胡索碱高剂量组则较之增强(P<0.05)。 4.原位末端标记法(TUNEL)检测大鼠心肌细胞凋亡结果:假手术组心肌仅偶见细胞凋亡发生,模型组可见大量胞核呈深浅不一棕褐色的凋亡心肌细胞,心肌细胞凋亡指数明显高于假手术组(P<0.01);缺血预处理组和延胡索碱高、中、低剂量组凋亡心肌细胞和心肌细胞凋亡指数均较模型组明显减少(P<0.01);而缺血预处理组和延胡索碱高剂量组间差异无显著性(P>0.05)。 5.心肌细胞bcl-2基因蛋白表达变化:与假手术组比较,抑凋亡基因bcl-2在缺血再灌注后表达明显减少,心肌细胞bcl-2蛋白阳性表达指数(PEI)明显低于假手术组(P<0.01);缺血预处理及用药后bcl-2表达增高,缺血预处理组和延胡索碱高、中、低剂量组bcl-2蛋白阳性表达指数(PEI)均较模型组组明显增高(P<0.05)。而缺血预处理组和延胡索碱高剂量组比较,差异无显著性(P>0.05)。 6.心肌细胞Fas基因蛋白表达变化:假手术组极少数心肌细胞Fas基因蛋白表达阳性;与假手术组比较,缺血再灌注后Fas基因蛋白表达明显加强,心肌细胞Fas蛋白阳性表达指数(PEI)明显高于假手术组(P<0.01);缺血预处理组和延胡索碱高、中、低剂量组Fas蛋白阳性表达指数(PEI)均较模型组明显减少(P<0.05);而缺血预处理组和延胡索碱高剂量组比较,差异无显著性(P>0.05)。 7.心肌细胞Na~+,K~+-ATP酶活力分析:与假手术组比较,心肌缺血再灌注损伤后,心肌细胞Na~+,K~+-ATP酶活力显著下降(P<0.01)。与模型组比较,除低剂量组(P>0.05)外,缺血预处理组和延胡索碱中、高剂量组的心肌细胞Na~+-K~+-ATP酶活力都明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);与缺血预处理组比较,延胡索碱中、高剂量组心肌细胞Na~+-K~+-ATP酶活力差异无显著性(P>0.05)。 8.心肌细胞Ca~(2+)-ATP酶活力分析:与假手术组比较,心肌缺血再灌注损伤后,心肌细胞Ca~(2+)-ATP酶活力显著下降(P<0.01)。与模型组比较,除低、中剂量组(P>0.05)外,缺血预处理组和延胡索碱高剂量组的心肌细胞Ca~(2+)-ATP酶活力都明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与缺血预处理组比较,延胡索碱高剂量组心肌细胞Ca~(2+)-ATP酶活力差异无显著性(P>0.05)。 9.单个心肌细胞膜上L-型钙通道动力学变化 (1)L-型钙离子通道平均开放概率比较: 与假手术组比较,模型组L-型钙离子通道平均开放概率明显提高(P<0.01);与模型组比较,缺血预处理组和延胡索碱高、中、低剂量组心肌细胞的L-型钙离子通道平均开放概率明显降低(P<0.01);而且缺血预处理组与延胡索碱高、中、低剂量组比较,无统计学差异(P<0.05)。 (2)L-型钙离子通道平均开放时间比较: 与假手术组比较,模型组心肌细胞L-型钙离子通道平均开放时间明显缩短(P<0.05);与模型组比较,缺血预处理组和延胡索碱高、中、低剂量组平均开放时间无显著性差异(P>0.05)。 (3)L-型钙离子通道平均电流幅值比较: 与假手术组比较,模型组平均电流幅值明显增高(P<0.05);与模型组比较,延胡索碱低、中剂量组可减弱L-型钙通道平均电流幅度值(P<0.05),但缺血预处理组和延胡索碱高剂量组反而增强L-型钙通道电流幅度值(P<0.05)。 10.心肌细胞内钙离子浓度比较:与假手术组比较,模型组心肌细胞内平均钙离子荧光强度明显增强(P<0.01);与模型组比较,缺血预处理组与延胡索碱高、中、低剂量组平均钙离子荧光强度减弱,差异有统计学意义(P<0.01);缺血预处理与延胡索碱高剂量组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。 11.心肌缺血、梗死面积比较 (1)心肌缺血面积比较:与模型组比较,除低剂量组(P>0.05)外,其余各组心肌缺血面积均有减少(P<0.01或P<0.05);与缺血预处理组比较,除低剂量组(P<0.05)外,延胡索碱高、中剂量组心肌缺血面积与其相当,差异无显著性(P>0.05)。 (2)心肌梗死面积比较:与模型组比较,缺血预处理组和延胡索碱高、中、低剂量组梗死面积均缩小(P<0.05);与缺血预处理组比较,除低剂量组(P<0.01)外,延胡索碱高、中剂量组心肌梗死面积与其相当,差异无显著性(P>0.05)。 【结论】 1.对大鼠心肌缺血再灌注室性心律失常而言,延胡索碱预处理不仅可推迟其出现时间,缩短其持续时间,而且还可降低室速(VT)和室颤(VF)的发生率,减慢大鼠心肌缺血再灌注损伤后心率的增快。说明延胡索碱预处理具有抗大鼠心肌缺血再灌注室性心律失常的作用。 2.延胡索碱预处理可通过上调缺血再灌注心肌抑凋亡基因bcl-2的蛋白表达和下调促凋亡基因Fas的蛋白表达,从而抑制心肌细胞凋亡的发生,保护心肌细胞免受缺血及缺血再灌注的损伤,从而保护心脏功能,具有类似于缺血预处理的内源性抗凋亡保护机制。 3.延胡索碱预处理能显著提高心肌细胞Na~+-K~+-ATPase、Ca~(2+)-ATPase活性,通过肌浆网Ca~(2+)-ATP酶(肌浆网钙泵)、Na~+-Ca~(2+)交换体系、肌膜Ca~(2+)-ATPas等途径将细胞内Ca~(2+)运出细胞外,从而减轻心肌细胞内钙离子浓度和钙超载,起到保护心肌细胞的作用。 4.延胡索碱预处理可降低心肌细胞膜上L-型钙通道平均开放概率,并显著减弱心肌细胞膜上L-型钙通道平均电流幅度值,从而阻断心肌细胞膜L-型钙通道开放,减少“外钙内流”、“内钙释放”,降低心肌细胞内游离钙离子的浓度,避免了细胞内钙离子超载,发挥保护心肌细胞的作用。 5.延胡索碱预处理与经典缺血预处理一样,可显著缩小大鼠心肌缺血再灌注的心肌梗死面积,对缺血再灌注心肌损伤有保护作用。 临床研究 【目的】 观察延胡索复方桃仁红花煎对冠心病频发室性早博患者的临床疗效。 【方法与内容】 采用前瞻性试验性设计方案。遵循随机、对照、单盲原则进行研究。将60例冠心病频发室性早博患者按为1∶1随机分为试验组与对照组。试验组采用冠心病西医基础治疗加上延胡索复方桃仁红花煎治疗,对照组仅采用单纯西医基础治疗,不用中医中药治疗。通过观察治疗前后室性早博次数的变化以及中医证候、症状的改变,比较试验组与对照组二者间的临床疗效。 【结果】 1.治疗后两组患者室性早搏疗效比较:试验组总有效率85%,对照组75%,P>0.05,差异无统计学意义,说明两组患者的疗效相当。 2.两组患者治疗前后24h室性早博次数的比较:试验组和对照组治疗前后自身比较,P<0.01,差异有显著统计学意义。两组患者治疗前后24h室性早博次数差值比较,P>0.05,差异无统计学意义。 3.两组患者中医证候疗效比较:试验组总有效率90%,对照组70%,经X~2检验P<0.05,差异有统计学意义。 4.两组患者中医症状积分比较:治疗前后自身比较,差异有统计学意义(P<0.05)。试验组患者治疗前后症状积分差值明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。 5.两组患者中医症状疗效比较:试验组心悸中医症状总有效率为89.7%,对照组为66.7%,两组差异有统计学意义(P<0.05);试验组胸闷中医症状总有效率为76.9%%,对照组为45.8%,两组差异有统计学意义(P<0.05);余各中医症状疗效差异无统计学意义(P>0.05)。 【结论】 通过临床小样本观察,我们发现西医基础治疗结合中药延胡索复方(桃仁红花煎)治疗,在减少冠心病频发室性早搏次数方面与单纯西药治疗疗效相当;但是在改善冠心病频发室性早搏的中医证候及中医症状特别是心悸、胸闷等方面疗效优于单纯西药治疗,而且副作用少,没发现有任何致心律失常作用,值得在临床上推广应用。 结语 1.延胡索碱预处理不仅可推迟大鼠心肌缺血再灌注室性心律失出现时间,缩短其持续时间,而且还可降低室速(VT)和室颤(VF)的发生率,减慢大鼠再灌注损伤后心率的增快。说明延胡索碱预处理有抗大鼠心肌缺血再灌注室性心律失常的作用。 2.延胡索碱预处理可通过上调缺血再灌注心肌抑凋亡基因bcl-2的蛋白表达和下调促凋亡基因Fas的蛋白表达,从而抑制心肌细胞凋亡的发生,保护心肌细胞免受缺血及缺血再灌注的损伤,具有类似于缺血预处理的内源性抗凋亡保护机制。 3.延胡索碱预处理能显著提高心肌细胞Na~+-K~(+-)ATPase、Ca~(2+)-ATPase活性,通过肌浆网Ca~(2+)-ATP酶(肌浆网钙泵)、Na~+-Ca~(2+)交换体系、肌膜Ca~(2+)-ATPas等途径将细胞内Ca~(2+)运出细胞外,从而减轻心肌细胞内钙浓度和钙超载,起到保护心肌细胞的作用。 4.延胡索碱预处理可降低心肌细胞膜上L-型钙通道平均开放概率和平均电流幅值,从而阻断心肌细胞膜L-型钙通道,减少“外钙内流”、“内钙释放”,降低心肌细胞内钙离子的浓度,避免了细胞内钙离子超载,起到保护心肌细胞的作用。 5.延胡索碱预处理与经典缺血预处理一样,可显著缩小心肌缺血再灌注损伤大鼠的心肌梗死面积,对缺血再灌注损伤心肌有保护作用。 6.通过临床观察,我们发现西医基础治疗结合延胡索复方(桃仁红花煎)治疗,在减少冠心病频发室性早搏次数、抗冠心病心律失常方面与单纯西药治疗疗效相当;但是在改善冠心病频发室性早搏的中医证候及中医症状特别是心悸、胸闷等方面疗效优于单纯西药治疗,而且副作用少,没发现有任何致心律失常作用,值得在临床上推广应用。
【学位授予单位】:广州中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R259

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【引证文献】
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7 魏清芳;王嘉林;辛爱玲;程芳;郭润勤;;理胃丸的质量标准研究[J];中药材;2011年07期
8 赵宝明;张志谦;张书信;刘超;酒舒玲;陈伟伟;陈浩漩;葛小栋;;广痛消泡沫气雾剂止血抗炎作用实验研究[J];中华中医药学刊;2011年10期
9 马伯艳;袁良杰;牛雯颖;李丽琦;肖洪彬;;延胡索乙素对老龄大鼠血液粘度及红细胞变形性的影响[J];中医药信息;2011年05期
10 千珂;王荣;张伟东;唐志书;顾宜;王晓娟;;元仁胶囊的质量标准研究[J];中国医药导报;2012年26期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 林力;刘建勋;张颖;李欣志;段昌令;林成仁;李磊;;LC-MS/MS法同时测定犬血浆中四氢巴马汀、脱氢紫堇碱、小檗碱和巴马汀及其在元胡提取物的药代动力学研究应用[A];中华中医药学会中药分析分会第五届学术交流会论文集[C];2012年
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 张志谦;广痛消泡沫气雾剂治疗慢性肛裂的疗效观察和机制研究[D];北京中医药大学;2012年
2 何钟德;延胡索甲、乙素对坐骨神经痛大鼠止痛作用及其抗TRPV-1机理的研究[D];广州中医药大学;2012年
3 陆英;紫锥菊、紫甘薯中活性成分高效制备技术及紫锥菊生物活性研究[D];湖南农业大学;2012年
4 郭常川;中药紫金龙中异紫堇定碱和原阿片碱的药物代谢及动力学研究[D];浙江大学;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 唐敏芳;豹皮樟化学成分分离及其体外抗炎免疫活性筛选研究[D];安徽医科大学;2010年
2 罗美玲;中药联合腹腔镜治疗轻型子宫内膜异位症不孕的临床研究[D];广州中医药大学;2012年
3 刘匀慧;消积颗粒对湿热瘀结型盆腔炎性疾病后遗症临床疗效研究[D];南京中医药大学;2012年
4 董其虎;香附四物汤治疗气滞血瘀型原发性痛经的临床疗效评价及作用机制初探[D];南京中医药大学;2012年
5 贾瑞冬;冬病夏治中药穴位贴敷疗法防治冷哮型支气管哮喘的临床观察[D];南京中医药大学;2012年
6 孙美慧;痛可舒配合中药内异灵1号灌肠治疗子宫内膜异位囊肿的临床观察[D];黑龙江中医药大学;2012年
7 孟颖;益肾痛经汤治疗虚寒型原发性痛经的临床观察[D];黑龙江中医药大学;2012年
8 刘红华;自拟清热祛湿益气方治疗缺血性肠病的临床观察[D];湖北中医药大学;2012年
9 刘强;中药延胡索有效成分的吸收转运机制研究[D];福建中医药大学;2012年
10 李晓娟;少腹逐瘀汤治疗寒凝血瘀型复发性流产的临床观察[D];福建中医药大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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2 陆跃鸣,陈龙,蔡宝昌,马骋,史智阳,李显;异马钱子碱对心肌细胞作用的单钙通道及透射电镜分析[J];安徽中医学院学报;1999年06期
3 刘淑清;中西医结合治疗早搏32例[J];安徽中医学院学报;1998年04期
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5 李瀛;参麦注射液与复方苦参注射液联用治疗室性早搏[J];浙江中医学院学报;2001年04期
6 王敬东;颅通定与黄连素治疗室性早搏的比较[J];北京医学;1998年01期
7 李才,王丽娟,赵志涛;灶状心肌坏死的定量组织学测量——逐区点测量法[J];白求恩医科大学学报;1988年04期
8 睢大员,韩丛成,于晓风,曲绍春;刺五加叶皂苷对高脂血症大鼠血脂代谢的影响及其抗氧化作用[J];吉林大学学报(医学版);2004年01期
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10 姜红玉,睢大员,于晓风,曲绍春,徐华丽,王志才,陈燕萍;刺五加叶皂苷对实验性脑缺血大鼠血液流变学及血小板功能的影响[J];吉林大学学报(医学版);2004年03期
【相似文献】
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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7 李方洁;路志正;高荣林;张瑞麟;;调脾胃法治疗冠心病的理论与临床探讨[A];中医药学术发展大会论文集[C];2005年
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10 严子君;张瑞岩;左君丽;张奇;初少莉;沈卫峰;;大动脉僵硬度对冠心病发病的预测价值[A];中华医学会第11次心血管病学术会议论文摘要集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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10 罗玮敏;益肾活血胶囊治疗冠心病高同型半胱氨酸血症的研究[D];山东大学;2005年
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