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《广州中医药大学》 2007年
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针刺治疗骨质疏松性骨折的临床与实验研究

蔡桦  
【摘要】: 骨质疏松性骨折是一种随增龄而骨量减少、骨显微结构异常、骨脆性增加、因轻度暴力或非创伤因素导致的骨折,又称脆性骨折,是骨质疏松症最严重的并发症,严重危害老年人群的身心健康,应当引起全社会的高度重视。 一、临床研究针剌治疗骨质疏松性胸腰椎骨折疼痛的疗效评估 (一)目的 以随机对照方式评价针刺治疗骨质疏松性胸腰椎骨折早期腰背痛的短期疗效及安全性。 (二)病人和方法 64位骨质疏松性胸腰椎新鲜骨折病人随机分为二组:A组34人,加电针刺双侧委中及病椎两侧邻近的华佗夹脊穴,qd;B组30人,采用降钙素(50 IU,im,qd)联合钙尔奇D(1片,含碳酸钙1.5g,维生素D 125IU po,qd)。疗程均为2周。采用患者自我VAS评分法及医师体检压痛评分法评价治疗前后的疼痛缓解情况。 (三)结果 治疗2周后,两组患者的自发性腰背痛、活动痛、以及翻身痛的疼痛指数及医师体检压痛评分均较治疗前有显著改善(P<0.01),两组均无严重不良事件发生。 (四)结论 针刺治疗骨质疏松性胸腰椎骨折早期腰背痛的短期疗效良好,与降钙素联合钙剂治疗效果类似。针刺疗法的费用低于降钙素等药物治疗,值得推广。 二、实验研究针刺对去卵巢大鼠骨折模型神经营养因子表达的影响 (一)目的 研究表明,神经营养因子(NTFs)涉及骨形成的调节,但机制不清。绝经后骨质疏松症(PMO)与绝经后雌激素下降有密切关系;而雌激素与NTFs在骨折愈合中的相互作用和关系却未见有研究报导。 本项研究从“整体观”、“肾主骨”及“髓生骨”的中医理论出发,通过建立绝经后骨质疏松性闭合性骨折动物模型、采用免疫组化技术对骨质疏松性骨折骨痂局部NTFs及其受体基因表达的细胞定位和表达模式进行研究,揭示雌激素和NTFs对骨组织的相互作用关系;同时检测针刺疗法对去卵巢大鼠骨折模型骨痂中NTFs及其受体的表达的影响,为防治骨质疏松症提供新的思路和方法。 (二)材料和方法 1.动物分组及制作绝经后骨质疏松症动物模型清洁级健康雌性SD大鼠60只,3月龄,无孕,体重260±12g。将大鼠随机抽样分为4组,A组为正常对照组,B组为模型组,C组为针刺治疗组,D组为尼尔雌醇治疗对照组,各15只。除A组正常对照组为假手术外,其余各组大鼠均作背侧切口卵巢摘除术,以制作绝经后骨质疏松症动物模型。 2.大鼠血清学检查造模前三天及处死前各组大鼠分别采以眼底静脉丛取血,应用放免测定法,分别测定大鼠血清雌二醇(E_2) 3.骨折模型的制作术后3个月,从各组各取1只动物进行DEXA全身扫描,发现B、C、D组全身BMD明显低于A组,证实B、C、D三组的大鼠已发生骨质疏松后,四组动物均在水合氯醛溶液麻醉下,参照文献方法,于左侧股骨中段建立闭合骨折模型,以直径1mm克氏针髓内固定,术后分笼饲养,自由活动,术后肌注青霉素生理盐水(4万单位/ml)抗炎,每日注射1.5ml,连续3d,自由摄水和进食,标准饲料。 4.体重的变化每周称重一次,观察各组大鼠体重的变化。 5.骨折的治疗从骨折后第4天开始。 A组每周每只灌服0.9%生理盐水3ml。 B组每周每只灌服0.9%生理盐水3ml。 C组针刺治疗。针刺穴位:左后肢(骨折侧)的环跳、后三里、阳陵泉、委中。针刺方法:C组各大鼠,准确取穴后,以25mm灭菌毫针直刺,每隔5分钟捻转各针一次,每针捻转25秒,共留针20分钟。每天一次。 D组每只动物予尼尔雌醇溶液0.6.ml/100g体重灌胃(尼尔雌醇浓度:0.2mg/ml)。每周1次。 6.取材在治疗后1、2、3、4周后分四批取材。每周从每组随机抽取2~3只,处死取标本。取左后侧股骨骨折处的骨痂,分为2份,每份约占骨痂块的1/2,尽量切取骨痂块的最大横截面用4%多聚甲醛固定24h,用于进行组织学观察;另一份标本分别各占骨痂块的1/2,以锡纸包裹,亦置于液氮中,用于免疫组织化学检测。 7.项目检测及观察 (1)组织学观察采用HE染色,光镜下观察。 (2)免疫组化染色(SABC法)分别滴加NGF、BDNF、NT3和TrkA、TrkB、TrkC兔抗大鼠多克隆抗体,以二甲基联苯胺(DAB)dimethylbenzidine显色,苏木素(campeachy),轻度复染。阳性显示为棕色。 用HPIAS-1000高清晰彩色病理图文报告分析系统,以人机交互方式测定各切片的灰度值,定量检测切片中NTFs的表达水平。 (3)离体骨密度的测定大鼠处死后,分别取每只大鼠右股骨标本,剔除肌肉等组织。采用QDR-4000型双能X线骨密度仪,变异系数(CV)<1%,进行离体骨骨密度测定。 (三)结果 1.体重B、C、D组去卵巢一个月后,体重增加,与自身去卵巢前相比,有非常显著性差异;处死前各组大鼠体重相比较,A组较低,B、C、D组与A组相比较仍有显著性差异。 2.血清雌二醇水平造模前,B、C、D组大鼠与A组比较,无显著性差异;处死前,B、C、D组大鼠与A组比较,B、C、D组E2水平明显低下,有显著性差异;而B、C组与D组比较,D组E2水平较高,也有显著性差异。 3.骨密度结果各组大鼠离体右股骨BMD结果比较无显著性差异。 4.骨痂HE染色光镜观察结果显示A组、C组和D组的骨折愈合进程快于B组。 5.骨痂中NTFs及其受体表达的免疫组化染色结果各组骨痂均有NGF、BDNF、NT-3和TrkA、TrkB、TrkC表达,表达时间主要在骨折后7d和14d,表达部位主要在新生的骨形成细胞,如成骨细胞、成骨样细胞、肥大软骨细胞、软骨细胞中,破骨细胞以及骨髓组织中的巨噬细胞和多核巨细胞亦有少量阳性染色。 表达水平高低依次是A、C、D、B组。A组与B组之间以及B组与C、D组之间有显著性差异。 (四)结论 1.本实验采用雌性大鼠切除双侧卵巢模拟骨质疏松,结合闭合性骨折的造模方法,形成闭合性骨质疏松性骨折动物模型。该方法具有定位准确、切断方法方便、可靠等优点,手术创伤较小,各组实验动物创伤程度均相同,内固定可靠,因而保持了骨折愈合方式的可比性,且该动物模型的病因病理变化与临床接近,是较理想的骨质疏松性骨折实验研究动物模型。 2.在正常骨骨折和骨质疏松性骨折的骨痂中均有NGF、BDNF、NT3和TrkA、TrkB、TrkC的表达;但骨质疏松性骨折的骨痂中上述因子的表达量减少。 3.血清雌二醇水平能影响骨痂中的NTFs及其受体表达。血清雌二醇水平下降则骨痂中的NTFs及其受体表达越低。雌激素补充疗法能够提高血清雌二醇水平并增加骨痂中的NTFs及其受体表达。 4.针刺治疗不能够提高血清雌二醇水平,却也能在一定程度上缓解去卵巢引起的骨痂中NTFs及其受体表达减少。
【学位授予单位】:广州中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R246.9

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【参考文献】
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