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《广州中医药大学》 2007年
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牛珀至宝微丸对内毒素休克相关基因表达调控的影响

杜少辉  
【摘要】: 1、研究目的 牛珀至宝微丸临床治疗感染性休克疗效显著,一氧化氮(NO)及其相关基因在内毒素休克中对血压调节、脏器损伤与修复起重要作用。为探讨牛珀至宝微丸治疗感染性休克的机理是否与一氧化氮及其相关基因相关,本研究从整体水平、细胞、信号转导与基因调控各个层次对牛珀至宝微丸调控一氧化氮及其相关基因进行研究。 2、研究内容、方法 本实验分在体实验与离体实验二部分。 整体实验主要观察牛珀至宝微丸调控NO对内毒素休克血压、脏器损伤及修复的影响。用静脉注射脂多糖内毒素(LPS)1.5mg/kg、腹腔注射D-氨基半乳糖(D-GaLN)100mg/kg造成内毒素休克模型,用牛珀至宝微丸和一氧化氮合酶抑制剂氨基胍(AG)作干预处理,用BL-410生理仪监测血压,用OlympusAU2700型全自动生化分析仪进行肝功能检测,用HE染色观察各脏器的病理形态,用硝酸还原酶法检测血浆NO浓度,同位素标记法测组织匀浆一氧化氮合酶(NOS)活性,免疫组化、Western blot方法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在各脏器组织内的表达,用Van Gieson法染色检测胶原纤维在肺组织内的表达,免疫组化方法检测肺组织高迁移蛋白(HMGB_1)、转化生长因子(TGF-β_1)及其受体的表达,并用激光共聚焦扫描显微镜进一步观察高迁移率族蛋白(HMGB_1)的表达。 离体实验从细胞信号转导与基因调控水平观察牛珀至宝微丸动物血清对LPS刺激RAW264.7iNOS基因转录调控的影响。用硝酸还原酶法检测测定蛋白激酶C(PKC)抑制剂对LPS诱导的NO生成作用,用PKC活性测定法研究LPS对PKC的激活作用;用基因重组技术构建iNOS荧光素酶报告基因载体;用基因转染及报告基因检测等方法研究牛珀至宝微丸调控LPS刺激RAW264.7细胞对iNOS启动子活性的诱导作用及其与PKC的关系,以明确牛珀至宝微丸对LPS刺激RAW264.7细胞iNOS启动子活性的诱导作用及PKC的影响。 3、研究结果 牛珀至宝微丸对内毒素休克与NO影响结果显示:LPS注射即时血压迅速下降成稳定的低血压,AG有显著的升压作用,用药30min后血压上升接近正常水平,至240min甚至高于原基础血压;牛珀至宝微丸血压回升稳定而缓慢,AG+牛珀至宝微丸有升压作用,但并未叠加,而是使升压作用缓和。LPS组NO浓度持续上升,AG可明显使NO浓度下降迅速而且稳定,注射后30min即回复至正常水平,240min后仍有继续下降趋势。牛珀至宝微丸组NO缓慢上升,其上升幅度高于LPS组而低于正常组。提示牛珀至宝微丸可使内毒素休克鼠血浆NO浓度缓慢下降,抑制NO的过量生成。AG+牛珀至宝微丸的作用叠加无显著意义。iNOS蛋白活性检测结果显示:LPS可致iNOS活性显著增强,AG可抑制iNOS,牛珀至宝微丸可抑制iNOS活性,AG+牛珀至宝微丸其作用有增强趋势。iNOS Western Blotting结果显示:正常组iNOS条带缺如,LPS组iNOS强阳性表达,AG组iNOS表达较弱,牛珀至宝微丸iNOS表达也较弱,但不如AG组明显,AG+牛珀至宝微丸其作用有增强趋势。 牛珀至宝微丸对内毒素休克各脏器损伤的形态、功能影响与iNOS关系结果显示:AG对内毒素性肝损伤血清ALT、AST的浓度变化无影响,牛珀至宝微丸则可以明显改善以上肝功能指标及肝脏病理损坏,并能减少肝细胞、枯否氏细胞、内皮细胞的iNOS表达。内毒素休克心脏iNOS阳性细胞分布于心脏外膜与心肌,牛珀至宝微丸能明显降低内毒素所致iNOS表达,并能改善内毒素休克的心脏损害。内毒素休克脑iNOS阳性细胞分布于大脑皮质、纹状体、脑干、小脑等,牛珀至宝微丸能明显降低内毒素脑iNOS表达,并能改善内毒素休克脑损害。内毒素休克肾组织iNOS表达增强,牛珀至宝微丸能明显降低内毒素肾iNOS表达,并能改善内毒素休克肾损害。 牛珀至宝微丸对内毒素休克脏器损伤修复与NOS表达关系结果显示:牛珀至宝微丸降低肺组织iNOS活性,使肺内iNOS表达减弱、而且同时能使eNOS表达增强,肺损伤减轻。对内毒素急性肺损伤的修复表明,内毒素肺损伤肺组织胶原纤维染色显著增强,牛珀至宝微丸能减轻肺损伤,并能减弱肺组织胶原纤维染色。内毒素肺损伤与修复的相关因子结果显示:牛珀至宝微丸可增强内毒素休克晚期关键核因子高迁移蛋白(HMGB_1)的表达,增强肺组织转化生长因子-β_1及其受体表达而不产生纤维化。 离体实验从细胞信号转导与基因调控水平研究结果显示:牛珀至宝微丸可负调节LPS刺激RAW264.7细胞引起的PKC磷酸化激活和膜移位,并可延长PKC抑制剂H7下调NO作用时间。荧光素酶报告基因实验结果显示,牛珀至宝微丸可抑制LPS刺激诱导的iNOS启动子的转录活性,并可增强H7和钙离子通道阻滞剂维拉帕米的作用。牛珀至宝微丸抑制LPS刺激RAW264.7细胞所致的NO生成增加,其机制之一是量效与时间两方面抑制PKC激活和细胞内钙增加,从而影响iNOS启动子的转录活性。 4、研究结论 AG过快、无限制的升压可能对机体不利。牛珀至宝微丸治疗内毒素休克与NO途径相关,但不同于单纯的一氧化氮合酶抑制剂,升压稳定而缓慢,可能更有利于机体恢复,这也说明牛珀至宝微丸有平稳的升压作用不只是单纯的NO作用途径,而且存在某种稳定NO浓度的机制。牛珀至宝微丸治疗内毒素休克各脏器损伤与减少iNOS表达相关,与一氧化氮合酶抑制剂不同的是能使eNOS表达增强;对于内毒素损伤与修复表明,牛珀至宝微丸其机理可能与增强纤维化因子TGF-β_1及其受体表达相关,能增强内毒素休克晚期关键核因子HMGB_1的表达,其损伤与修复之间可能是通过核因子HMGB_1而发生作用。鉴于iNOS的表达主要取决于基因转录水平,研究表明牛珀至宝微丸抑制iNOS启动子转录活性,细胞信号研究表明牛珀至宝微丸可增强PKC抑制剂H7下调NO的作用。本研究的最终结果表明:牛珀至宝微丸对内毒素休克NO影响是一个独特的整体调节机制,而且其靶点主要在细胞核。
【学位授予单位】:广州中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R278

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【参考文献】
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1 李军,孙梅,吴玉斌,杜秀华,李革;内毒素诱导新生大鼠肝损伤及地塞米松的保护作用[J];中国当代儿科杂志;2002年01期
2 冯英凯,杨庆华,徐剑铖,钱桂生;炎症介质与内毒素肺损伤[J];国外医学(呼吸系统分册);2004年05期
3 徐佳,刘志锋,姜勇;高迁移率族蛋白与真核基因表达调控[J];生物化学与生物物理进展;2005年05期
4 王翔,王晓军,罗向东,杨宗城,黎鳌,吴泽志,蔡绍皙;内毒素直接损伤血管内皮细胞的细胞生物力学机理[J];生物物理学报;1999年04期
5 肖湘文;周建林;周畅;;高迁移率族蛋白[J];细胞生物学杂志;2006年04期
6 刘艳梅,张君岚,王殿华,凌亦凌,黄善生;外源性一氧化氮抗内毒素致大鼠肺微血管高通透性的作用及机制研究[J];中国病理生理杂志;2000年10期
7 李生伟,吴传新,石毓君,刘长安;内毒素上调肝细胞表达CD14基因和蛋白的实验研究[J];中华肝脏病杂志;2001年02期
8 宋冰冰,孙新艳,王俊科,盛卓人,崔涌;诱导性一氧化氮合酶抑制药对感染性休克鼠肝、肺组织学改变的影响[J];中华麻醉学杂志;1999年09期
9 李兴旺,蒋荣猛,郭嘉祯;糖皮质激素治疗重症急性呼吸综合征初探[J];中华内科杂志;2003年06期
10 郭振辉,邹霞英,樊满齐;一氧化氮吸入治疗急性肺损伤的作用机制[J];中华实验外科杂志;2001年06期
【共引文献】
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1 冀芦沙;郭尚敬;;拟南芥高迁移率族蛋白B(HMGB)族基因的克隆及表达分析[J];安徽农业科学;2010年35期
2 胡建鹏,吕磊,王键;气虚血瘀证局灶性脑缺血再灌注大鼠血浆及脑组织cAMP、cGMP含量动态研究[J];安徽中医学院学报;2004年01期
3 李显勇;李燕雏;尹卫华;张凌燕;;“仿生内控”治疗晚期癌症的临床应用报告[J];癌症进展;2008年03期
4 李娟;叶华;郭磊;于晓丽;叶菜英;张德昌;;羧胺三唑在肿瘤中的抗炎作用[J];癌症进展;2008年04期
5 郑香香,李超,刘丽,杨海涛,胡瑜锋,叶云;牛磺酸对蟾蜍坐骨神经干兴奋性的调节作用[J];蚌埠医学院学报;2005年03期
6 任翠爱,张茂宏,徐从高,张锑;MDS病人血浆IL-10的检测及临床意义[J];青岛大学医学院学报;2002年01期
7 黄嘉凌,卫菁,段朝晖,闽军,黄健,罗小红,吴立志,刘然义,黄必军,李焱,曾益新,黄文林;95例SARS患者细胞免疫功能抑制的特点及其原因[J];病毒学报;2005年05期
8 冯炜权,冯美云,谢敏豪,冯连世;当前运动生化与营养的几个问题——运动生物化学动态之四[J];北京体育大学学报;2001年01期
9 侯显涛;陈武;朱莉娜;姜代勋;穆祥;;清热中药对大鼠肺及其微血管内皮细胞磷酸二酯酶活性的影响[J];北京农学院学报;2008年02期
10 夏志;汪清祥;黄涛;舒宗礼;李俊;;一氧化氮和一氧化氮合酶与运动训练[J];首都体育学院学报;2009年01期
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1 王和枚;丁日高;袁本利;阮金秀;;内源性一氧化氮与全氟异丁烯急性吸入性肺损伤[A];第五届全国生物医学体视学学术会议、第八届全军军事病理学学术会议、第四届全军定量病理学学术会议论文汇编[C];2002年
2 钟南山;;传染性非典型肺炎诊疗方案[A];第一次全国中西医结合传染病学术会议论文汇编[C];2006年
3 李赛美;王志高;何敏;;加味桃核承气汤及其不同配伍组方及提取方法大鼠含药血清对糖尿病血管平滑肌细胞周期及凋亡的影响[A];仲景医学求真(续一)——中华中医药学会第十五届仲景学说学术研讨会论文集[C];2007年
4 李赛美;王志高;凌家杰;何敏;;加味桃核承气不同配伍组方对胰岛素诱导的血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响[A];仲景医学求真(续一)——中华中医药学会第十五届仲景学说学术研讨会论文集[C];2007年
5 黄瑜;陈永平;许烂漫;黄卡特;高峰;王晓东;;脂多糖受体CD14通过核因子-κB途径参与大鼠急性肝功能衰竭的动态观察[A];第十次浙江省中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2008年
6 黎波;马超英;;万友生甘温除热法治疗脓毒症(败血症)经验简介[A];第十三次全国中西医结合虚证与老年医学学术研讨会论文集[C];2013年
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1 贺常亮;治疗鸡大肠杆菌病的中药方剂筛选及其作用机理研究[D];吉林大学;2011年
2 陈鹏;肺癌组织中HMGN5基因的表达及其在肺癌发病中作用机制的研究[D];吉林大学;2011年
3 罗大有;健脾软肝方抗肝纤维化机理的研究[D];广州中医药大学;2011年
4 王桂琴;核心蛋白聚糖DECORIN在肝纤维化形成机制中的作用[D];第二军医大学;2000年
5 易杰;脾虚证(脾气虚证、脾阳虚证、脾阴虚证)大鼠肝、脾、肾PKC活性和亚型变化及补益脾胃方药调节作用的实验研究[D];辽宁中医学院;2001年
6 李昂;健骨二仙丸防治骨质疏松机理及一氧化氮调控机制研究[D];广州中医药大学;2001年
7 耿茜;扩张型心肌病和心律失常心肌组织和心电重构的研究[D];南京医科大学;2001年
8 王自章;农杆菌介导海藻糖合酶基因遗传转化甘蔗研究[D];福建农林大学;2001年
9 陈念永;毫米波细胞生物效应及抗肿瘤研究[D];电子科技大学;2001年
10 杨龙;过钒酸钠抑制辐射诱导造血细胞凋亡作用机制的研究[D];第三军医大学;2001年
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1 费晶晶;两个家蚕FKBP12基因的研究[D];浙江理工大学;2010年
2 赵燕;家蚕HMGA蛋白的原核表达与功能研究[D];浙江理工大学;2010年
3 马华兵;HMGB1、RAGE和VEGF在食管鳞状细胞癌的表达和意义[D];郑州大学;2010年
4 刘云云;川芎嗪诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为神经细胞的信号转导机制[D];甘肃农业大学;2010年
5 蒋狄;电针刺激对家兔排尿期膀胱压力峰值影响的观察[D];成都中医药大学;2010年
6 史志勇;葡萄籽原花青素抗人胰腺癌细胞的实验研究[D];山西医科大学;2011年
7 吕金昌;强化钙和维生素D的燕麦饮品对儿童体格发育的影响[D];吉林大学;2011年
8 王玮琳;蓝莓提取物对酒精性肝损伤干预作用研究[D];吉林大学;2011年
9 杨木强;高渗盐/羟乙基淀粉溶液伍用己酮可可碱对重度失血性休克大鼠早期复苏肺保护作用研究[D];兰州大学;2011年
10 曾悦翔;利多卡因对LPS诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞水通道蛋白5表达的影响[D];中南大学;2011年
【二级参考文献】
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1 江光明,万兰清,马超英,耿耘,吴伟,罗正曜,唐利立,徐志文;开闭与固脱法抗大鼠肠系膜上动脉结扎所致休克的实验研究[J];中国医药学报;1994年01期
2 王晓军,罗向东,梁光萍,罗勤,杨宗城;内毒素、烫伤血清对培养的大鼠心脏微血管内皮细胞间连接的影响[J];第三军医大学学报;1998年02期
3 王北婴;中药治疗流行性出血热的临床研究治疗原则[J];中国医药学报;1988年03期
4 万兰清;;休克的中医治疗[J];江西中医药;1990年05期
5 凌亦凌,黄善生,王乐丰,张君岚,万梅,郝荣利;八肽胆囊收缩素抗内毒素休克的实验研究[J];生理学报;1996年04期
6 王翔,吴泽志,宋关斌,王红兵,龙勉,蔡绍皙;HXO体系对红细胞膜蛋白巯基修饰及膜粘弹性的影响[J];生物物理学报;1998年02期
7 吴希美;一氧化氮与肝细胞氧化应激[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);1997年03期
8 王万铁,徐正怠,林丽娜,李东;心肌缺血再灌注损伤时 MAP 与 MDA 的相关性分析[J];温州医学院学报;1997年02期
9 刘林英,孙滨,彭善云,吕宝璋;内毒素性急性肺损伤大鼠白细胞介素-6含量改变[J];中国病理生理杂志;1997年06期
10 张君岚,刘艳梅,王殿华,凌亦凌,黄善生;IL-10抗内毒素气管内滴注致急性肺损伤作用的实验研究[J];中国病理生理杂志;2000年04期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 方兆麟;;纳洛酮需有循环中儿茶酚胺方能减轻内毒素休克的心血管抑制[J];国外医学.创伤与外科基本问题分册;1988年04期
2 张利利;赵自刚;牛春雨;张静;;淋浆对内毒素休克大鼠微循环障碍的干预作用[J];中国应用生理学杂志;2011年01期
3 赵自刚;牛春雨;张静;张利利;侯亚利;张玉平;;外源正常淋浆对内毒素休克大鼠多器官损伤的作用与机制[J];微循环学杂志;2011年02期
4 罗正曜,尢家騄,孔桂英,武裕今,金律明;内毒素休克发生机制的实验研究(微聚物形成在内毒素休克发生中的意义)[J];湖南医学院学报;1982年01期
5 余庆,周正芳,谢民;微量鲎试验对于诊断内毒素毒血症的意义[J];第二军医大学学报;1984年02期
6 姚咏明;施志国;田惠民;王正国;;内毒素在多系统器官功能衰竭中的作用[J];国外医学.创伤与外科基本问题分册;1990年02期
7 陈发郁;内毒素休克狗心脏β-受体的变化[J];北京医科大学学报;1991年02期
8 段文卓;宫海民;;内毒素导致休克的作用机制探讨[J];中国病理生理杂志;1997年02期
9 胥彩林,姚咏明,于燕,盛志勇;生物喋呤对内毒素休克大鼠肺组织核因子-κB活化的影响及意义[J];中华急诊医学杂志;2003年10期
10 胥彩林;姚咏明;于燕;王松柏;;核因子-κB抑制剂对内毒素休克大鼠高迁移率族蛋白B1表达的影响及机制[J];感染.炎症.修复;2003年03期
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1 冯刚;蒋建;惠小平;喻中城;史以珏;;一氧化氮与内毒素休克关系的实验研究[A];中华医学会急诊医学学会第六次全国急诊医学学术会议论文汇编[C];1996年
2 赵明哲;;内毒素休克磷酸化蛋白质组学分析[A];中国病理生理学会受体和信号转导专业委员会暨消化专业委员会联合学术会议论文汇编[C];2008年
3 张耀宗;赵鹤龄;;不同药物对内毒素休克大鼠肾组织诱导型一氧化氮合酶、线粒体活性及血清胱抑素C的影响[A];第三届重症医学大会论文汇编[C];2009年
4 张静;;正常淋浆对内毒素休克大鼠微循环障碍的干预作用[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年
5 王涛;;内毒素休克大鼠肠粘膜免疫功能的改变及意义[A];第三届重症医学大会论文汇编[C];2009年
6 梁家林;李涛;杨光明;徐竞;贺教江;陈垦;刘良明;;白介素-1 β 介导内毒素休克后α_1肾上腺素能受体失敏的作用[A];第八届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2011年
7 王小亭;刘大为;杨荣利;柴文昭;隆云;崔娜;石岩;周翔;张青;;心肌细胞凋亡与线粒体能量代谢在内毒素休克犬心功能不全时的作用[A];第三届重症医学大会论文汇编[C];2009年
8 曾皋;孙蓬然;刘安雷;刘洁;郭树彬;;内毒素休克小鼠脂钙蛋白2及其相关细胞因子的表达[A];中华医学会急诊医学分会第十六次全国急诊医学学术年会论文集[C];2013年
9 刘大为;王小亭;杨荣利;;内毒素休克犬的肾脏血流动力学变化[A];第三届重症医学大会论文汇编[C];2009年
10 姚咏明;于燕;彭志齐;施志国;盛志勇;;杀菌/通透性增加蛋白对内毒素休克时微循环灌注与生物喋呤诱生的影响[A];中华医学会急诊医学分会复苏、灾害、中毒专业联合学术交流会资料汇编[C];1999年
中国重要报纸全文数据库 前2条
1 杜少辉;徐志伟;陈东风;牛珀至宝微丸能减轻内毒素休克肺损[N];中国医药报;2005年
2 记者 吕择;臭豆腐也能吃死人?[N];北京科技报;2014年
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1 崔晓辉;硫化氢在大鼠内毒素休克发生发展中的作用及其对一氧化氮和一氧化碳的影响[D];河北医科大学;2007年
2 郭祥瑞;心理应激对髓系抑制性细胞和内毒素休克的影响及初步机理探讨[D];吉林大学;2012年
3 赵裕光;胸腺素β4治疗内毒素休克的实验研究[D];重庆医科大学;2005年
4 王一梅;不同剂量血液滤过对内毒素休克猪炎症状态和免疫功能的影响和机制[D];复旦大学;2008年
5 陈腾祥;内毒素休克小鼠肝脏核蛋白质组学研究[D];第一军医大学;2007年
6 刘菲;不同潮气量机械通气对失血性和内毒素休克兔多器官损伤的影响[D];中国医科大学;2006年
7 杜少辉;牛珀至宝微丸对内毒素休克相关基因表达调控的影响[D];广州中医药大学;2007年
8 高峰;CCK-8对LPS诱导ECV-304 iNOS表达的调节作用及其信号转导机制的研究[D];河北医科大学;2006年
9 胡振杰;不同容量血液滤过对内毒素休克继发MODS早期干预的基础与临床研究[D];河北医科大学;2004年
10 王志;内毒素休克大鼠脑损伤的分子机制及人参二醇组皂苷对其影响的实验研究[D];吉林大学;2005年
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1 杨林;以氨基酸为配基的聚偏氟乙烯中空纤维膜对人血中内毒素去除的研究[D];浙江大学;2008年
2 李娜;内毒素休克时肺与体循环压力变化及毒蕈碱M受体对肺、体血管的调节作用[D];中国医科大学;2009年
3 赵明哲;内毒素休克小鼠肝脏细胞质磷酸化蛋白质组学的研究[D];东北林业大学;2009年
4 袁利华;内毒素休克小鼠肝脏血管特异性结合肽的体内筛选及鉴定[D];南方医科大学;2008年
5 胡水旺;内毒素休克小鼠肝脏线粒体差异蛋白质组的鉴定[D];南方医科大学;2008年
6 陶炳东;多巴胺对内毒素休克犬肺动脉压力的影响[D];中国医科大学;2009年
7 李静;乙酸钠对内毒素休克的保护作用及抗炎机制的研究[D];河北大学;2011年
8 应楹;α-黑素细胞刺激素新型类似物对内毒素休克小鼠的保护作用[D];第二军医大学;2005年
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