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《广州中医药大学》 2008年
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妇炎康灌肠剂的质量控制及其药效、药动学研究

陈小新  
【摘要】: 研究背景及目的意义 慢性盆腔炎(Chronic Pelvic Inflammatory Disease,CPID)是指女性内生殖器官及其周围的结缔组织、盆腔腹膜发生的慢性炎症性疾病,多为急性盆腔炎未长久治疗或患者体质较差病程迁延所致,但亦可无急性盆腔炎症病史,包括慢性子宫内膜炎,慢性输卵管炎、卵巢炎,慢性盆腔结缔组织炎。因其病情反复、缠绵难愈,严重影响了患者身心健康和家庭生活,同时也造成家庭与社会负担。慢性盆腔炎的防治已日益为人们所重视,成为医学界瞩目的课题。 在慢性盆腔炎的治疗上,现代医学基本没有好的治疗方法,主要以物理治疗、肾上腺皮质激素及手术治疗为主,而中医药则显示出自己的特色。中药灌肠治疗慢性盆腔炎是临床上行之有效的方法之一,一方面是因为直肠与子宫、附件相邻,彼此静脉丛交互吻合,直肠吸收充分,中药吸收总量比口服给药吸收总量高,生物利用度增加,药物经直肠粘膜吸收后,除发挥全身治疗作用外,更重要的是能发挥局部用药效应,使药物直接渗透至病变部位,从而能较长时间地维持有效药物浓度,促进局部血液循环,使增生纤维组织软化,利于炎症病灶的吸收;另一方面将药物加热到39-40℃局部注入,又有利于加速局部血液循环,使局部组织营养得到改善。 “妇炎康”是吉林省中医研究院妇科研究所集数十年临床用药经验开发而成的慢性盆腔炎治疗药物,具有活血化瘀,软坚散结,清热解毒,消炎止痛之功效。临床应用表明,与妇炎康片口服相比,妇炎康片灌肠给药治疗慢性盆腔炎呈现起效快、疗程短、复发率低等优点。本课题前期研究结果表明,原妇炎康片中主要有效成分盐酸小檗碱、丹酚酸B和芍药苷含量低下,其理论转移率均低于10%。而本课题的研究对象——妇炎康灌肠剂,为多种先进提取浓缩技术研制而成,其主要有效成分含量均显著提高,实际转移率均远高于原剂型。为了更好地评价及控制该制剂的质量,本课题采用TLC定性鉴别、RP—HPLC/DAD多指标定量控制结合指纹图谱分析方法进行质量控制方法的研究;为了阐明该制剂给药途径确定的意义及依据,进行了本制剂治疗慢性盆腔炎的相关药效学及药代动力学研究。 研究内容及结果 一、妇炎康灌肠剂的质量控制研究 1、本研究采用薄层色谱法对制剂中的赤芍、丹参、黄柏、延胡索、苦参、莪术、香附等7味中药进行了定性鉴别,结果表明所建立的TLC分析方法简便、斑点清晰、重现性好,可以对该方中七味中药进行有效的鉴别。 2、采用RP-HPLC/DAD方法建立了同步测定盐酸小檗碱、丹酚酸B含量的方法,色谱条件为:Kromasil C_(18)色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);乙腈—0.04mol/L KH_2PO_4(含0.1%H_3PO_4)梯度洗脱;柱温:30℃;检测器:DAD;检测波长:230nm;流速:1.0ml/min;盐酸小檗碱和丹酚酸B分别在0.0924~2.3100μg和0.1000~2.5000μg范围内线性关系良好,线性相关系数r均为0.9999,盐酸小檗碱高、中、低3个浓度平均加样回收率(n=3)分别为100.40%,99.51%,99.15%,RSD分别为0.59%,0.67%,1.02%;丹酚酸B高、中、低3个浓度平均加样回收率(n=3)分别为101.52%,99.32%,98.68%,RSD分别为0.60%,0.92%,1.00%。 3、建立了芍药苷含量的测定方法,Kromasil C_(18)色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈:0.04mol/L KH_2PO_4(含0.1%H_3PO_4)=15:85;柱温:30℃;检测器:DAD;检测波长:230nm;流速:1.0ml/min。芍药苷在0.4992~6.24μg范围内线性关系良好,r=0.9998,芍药苷高、中、低3个浓度平均加样回收率分别为99.94%,98.97%,98.23%,RSD分别为0.15%,0.28%,0.38%。 结果表明,所建立的定量分析方法为妇炎康灌肠剂中多种主要有效成分的检测提供了科学依据,而且为该制剂的质量评价奠定了基础。 二、妇炎康灌肠指纹图谱分析方法的研究 本研究建立了妇炎康灌肠剂主要成分的高效液相色谱指纹图谱。通过对不同流动相、检测波长、色谱柱及柱温的考察,最终确定了妇炎康灌肠剂高效液相色谱指纹图谱的测定条件为:Kromasil C_(18)(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱为固定相,乙腈—0.04mol/L KH_2PO_4(含0.1%H_3PO_4)梯度洗脱,柱温:30℃,检测波长:230nm。在此条件下确定了13个共有峰共同组成的妇炎康灌肠剂内在物质的指纹图谱,并通过成药、药材、标准物质对照品的对比研究,确定了赤芍、土茯苓、丹参、黄柏和延胡索的专属性吸收峰。该方法体现了中药指纹图谱建立的系统性、特征性和稳定性原则,将妇炎康灌肠剂的质量控制提高到整体量化的高度,为复方制剂的指纹图谱研究提供了范例。 三、妇炎康灌肠剂初步药效学研究 初步探讨妇炎康灌肠剂治疗慢性盆腔炎的相关药效学作用:采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验、大鼠棉球肉芽肿实验及蛋清致大鼠足跖肿胀实验,考察了妇炎康灌肠剂的抗炎作用;采用醋酸致小鼠扭体实验考察了妇炎康灌肠剂的镇痛作用;采用小鼠碳粒廓清实验考察了妇炎康灌肠剂免疫调节作用;采用大鼠急性血瘀模型考察了妇炎康灌肠剂的活血化瘀作用。结果表明,妇炎康灌肠剂高、中剂量能够显著减轻二甲苯所致小鼠耳廓肿胀程度;妇炎康灌肠剂高、中、低剂量均能显著抑制大鼠棉球肉芽肿;妇炎康灌肠剂高、中、低剂量均能显著抑制蛋清致大鼠足跖肿胀;妇炎康灌肠剂高剂量组能够显著减少醋酸致小鼠扭体次数;妇炎康灌肠剂高、中、低剂量组均能提高小鼠廓清指数和吞噬指数,但无显著性;妇炎康灌肠剂高、中、低剂量组均能显著改善急性血瘀模型大鼠血液流变性。 初步药效学实验结果提示,与妇炎康片相比,妇炎康灌肠剂具有显著的抗炎、活血化瘀、镇痛及一定的增强免疫作用。 四、妇炎康灌肠剂灌肠与灌胃两种不同给药途径的药动学研究 1、采用反相高效液相色谱法测定大鼠血浆中盐酸小檗碱浓度,血浆样品以乙腈沉淀蛋白萃取。色谱分析条件为:色谱柱:Kromasil C_(18)柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙睛-0.04mol/L KH_2PO_4(含0.1%H_3PO_4)(v∶v=32∶68);检测波长:265nm;流速:1.0 mL/min;柱温:35℃; 结果表明,生物样品的内源性物质不干扰样品的检测,经方法学确证,盐酸小檗碱血浆浓度在0.01788~3.576μg/mL(r=0.9996)范围内线性关系良好,方法的日内精密度为1.28~2.36%,日间精密度为2.26~5.31%,方法的回收率为90.10~100.35%,最低检测限为5.96ng/mL。该方法具有操作简单、重现好的特点,可用于盐酸小檗碱相关制剂的药代动力学研究。 应用上述盐酸小檗碱血浆浓度HPLC定量方法,研究了妇炎康灌肠剂单剂量(4.73mg/kg,以盐酸小檗碱含量计)灌肠与灌胃给药,其有效成分盐酸小檗碱在大鼠体内的药动学行为,预实验中能够在Wistar大鼠血浆中检测到盐酸小檗碱,但实验动物改为SD大鼠后,灌肠与灌胃给药后的大鼠血浆中均未能检测到盐酸小檗碱,推测盐酸小檗碱的吸收可能存在种属差异,其药动学行为有待进一步研究。 2、采用反相高效液相色谱法测定兔血浆中芍药苷的浓度,血浆样品以乙酸乙酯萃取。色谱分析条件为:色谱柱:Kromasil C_(18)柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙睛-水(v∶v=16∶84);检测波长:230nm;流速:1.0 mL/min;柱温:30℃; 结果表明,生物样品的内源性物质不干扰样品的检测,经方法学确证,芍药苷血浆浓度在0.195~24.96μg/mL(r=0.9999)范围内线性关系良好,方法的日内精密度为1.06~1.96%,日间精密度为1.82~4.87%,方法的回收率为88.86~99.83%,最低检测限为0.05μg/mL。该方法具有操作简单、重现好的特点,可用于芍药苷相关制剂的药代动力学研究。 应用上述芍药苷血浆浓度HPLC定量方法,研究了妇炎康灌肠剂单剂量(5.91mg/kg,以芍药苷含量计)灌肠与灌胃给药,其有效成分芍药苷在兔体内的药动学行为,结果如下: 灌胃给药后,兔血浆中未能检出芍药苷。甚至当剂量增至17.73mg/kg时,灌胃给药后只有少数取血点的血浆能检出芍药苷,但含量很小,大多在定量限之下,因此未能得到口服给药的相关药动学参数。 灌肠给药后,芍药苷在兔体内血药经时过程符合一室开放模型,其相关药代动力学参数为:ke为0.94381/h,ka为3.19091/h,t_(1/2)(ka)为0.2172h,t_(1/2)(ke)为0.7344h,T(peak)为0.5421h,C(max)为5.2397μg/mL,AUC为9.2602(μg/mL)*h,CL/F(s)为0.6382mg/kg/h/(μg/mL),V/F(c)为0.6762(mg/kg)/(μg/mL)。 结果表明,灌肠给药芍药苷的吸收效果要显著优于灌胃给药。 结论 1、本研究建立的TLC鉴别方法、RP-HPLC/DAD多指标定量控制方法以及指纹图谱分析方法均可用于该制剂质量标准的系统控制; 2、本研究结合慢性盆腔炎相关的抗炎、镇痛、免疫和血液流变学实验,将妇炎康灌肠剂和原剂型妇炎康片进行了对比,结果表明妇炎康灌肠具有较明显的抗炎、改变血液流变性作用以及一定的镇痛、调节免疫作用,其效果均强于妇炎康片。 3、药动学研究结果表明,该制剂灌肠给药,其有效成分芍药苷是能够被快速吸收入血,达到相当的血药浓度,并且血药浓度能够维持一定的时间。结合相关文献,推测直肠给药可能部分或全部避免了芍药苷被胃肠道破坏和肝脏的首过代谢以及小肠上皮细胞P-糖蛋白的外排作用、小肠刷状缘上水解酶的作用,从而在相同给药剂量下可获得较灌胃给药高很多的血药浓度。研究结果证实,该制剂选择灌肠给药途径是合理的,优于口服给药途径。本研究为该制剂给药途径的确定提供了科学的依据,并大胆提出改变给药途径是提高一些药物生物利用度的有效方法之一,同时改变给药途径可能是提高中药疗效的有效手段。 综上所述,本研究采用指纹图谱结合多指标成分定性、定量分析的中药质控手段,再结合该制剂主治病症慢性盆腔炎相关模型药效学以及药代动力学研究,体内体外全方位、科学地评价了妇炎康灌肠剂,为其开发成治疗慢性盆腔炎的有效制剂打下了夯实的基础,具有重要的应用价值。
【学位授予单位】:广州中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R287

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6 张样柏;北沙参药材质量控制及评价技术研究[D];中国海洋大学;2007年
7 湛琦;川赤芍总苷制备工艺与质量控制研究[D];成都中医药大学;2007年
8 王颖;桔梗质量控制关键技术与质量评价体系的研究[D];山东中医药大学;2008年
9 黄再芳;有效部位制备及质量控制方法研究[D];浙江大学;2006年
10 王月辉;马钱子、甘草药材HPLC指纹图谱的研究[D];天津大学;2006年
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