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《广州中医药大学》 2009年
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脾气虚证相关基因RPS20在IEC-6细胞的生物功能鉴定

王静  
【摘要】: 研究背景和目的 中医理论认为脾主运化水谷精微和水湿,脾主统血,脾主升清,为气血生化之源、后天之本,脾主思,脾主四肢肌肉,开窍于口,其华在唇等。由此看出,脾的生理功能所涉及的广泛性,决定了它的病理也不会局限于一病一症一脏器。同时,脾与五脏六腑的关系,“内伤脾胃,百病由生”等,说明脾胃损伤会引起很多疾病的发生,脾病会引起很多脏器系统的病变,而很多疾病、脏器病变也会引起脾病的发生。 从脾虚证入手进行脾本质的研究,长期以来一直是中西医结合证本质研究的重要课题。众多学者运用多种现代技术和方法,分别从生化、生理、超微结构等方面进行探讨,近年更有人从神经—内分泌—免疫网络方面来探讨脾虚证的实质,对其进行了各种客观指标的研究,取得了一定的成果。然而,这些研究都只反映了部分已知基因表达产物(受体、酶、细胞因子以及肽类等)的改变,远未揭示证的实质。 基因组及后基因组时代的到来,为从基因水平切入证候的研究提供了新的思路与方法。多数学者认为,基因组学在整体观、阴阳学说、五脏学说、病因学说等方面与中医学具有相似性,中医“证”的内涵即基因表达的改变,因此提出了中医证候基因组学的概念。目前,主要是采用基因芯片技术分析证候的差异基因表达谱,来进行中医证候基因组学的研究,具有代表性的是关于脾虚证、肾阳虚证、虚寒证、心阳虚证、肺虚证等的研究。 我们实验室前期先后对慢性浅表性胃炎脾气虚证者与正常志愿者、慢性浅表性胃炎脾气虚证患者与慢性浅表性胃炎脾胃湿热证患者、溃疡性结肠炎脾气虚证患者与正常志愿者、溃疡性结肠炎脾气虚证患者与溃疡性结肠炎脾胃湿热证患者进行基因表达谱的分析。证实了慢性浅表性胃炎脾气虚证者,具有差异表达基因,其中蛋白合成相关的差异基因大多下调;慢性浅表性胃炎脾气虚证患者与慢性浅表性胃炎湿热证患者比较,相关差异基因也表达下调,这与脾气虚时机体功能抑制,而湿热时机体功能亢进相符合;进行扩大样本量重复分析或进行同证异病分析时,趋势相同。 通过对这些海量数据进行生物信息学的分析整合,我们认为脾气虚证具有蛋白质合成相关基因下调的趋势,其中以核糖体蛋白基因下调比较显著。核糖体蛋白基因是核糖体的重要组成部分,起到组装核糖体,促进蛋白质合成的作用。核糖体蛋白高度保守,但核糖体蛋白基因发生突变或缺失时,可以产生存活且异常的表型。核糖体蛋白基因突变或核糖体蛋白缺失或不恰当的化学修饰,一方面将影响核糖体的功能,降低多肽合成的活性,另一方面会影响RP(ribosomal protein)的生理功能,从而导致各种严重的后果。我们选择重复性表达下调的RPS20(ribosomal protein S20)对其进行生物功能鉴定。实验以大鼠小肠隐窝细胞株(Intestinal crypt cell line,IEC-6)为模型,采用RNAi(RNA interference)技术干扰RPS20,造成RPS20缺失表型,观察对细胞生理功能的影响,以初步探讨脾气虚证相关基因RPS20的生物功能。 研究方法 1.IEC-6细胞生长状况的观察 采用相差显微镜技术观察细胞形态结构;台盼蓝排斥试验检测细胞活力;细胞计数法及MTT比色法绘制IEC-6细胞生长曲线。 2.RNA干扰过程中IEC-6细胞转染条件的优化 以24孔板为例,采用阳离子脂质体转染FAM-siRNA片段进入IEC-6细胞内,通过调整FAM-siRNA和Lipofectamine2000的剂量,分别采用荧光显微镜和流式细胞仪两种仪器检测转染后荧光强度。 3.筛选针对RPS20基因的有效干扰片段 3.1 RT-PCR检测RNAi后IEC-6细胞RPS20 mRNA的表达 设置空白对照组、siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组,6孔板每孔种植8×10~5个细胞,第2日转染时,按照每孔转染总体积2.5mL、20μM浓度的siRNA20μL(即siRNA终浓度160nM)、Lipofectamine2000 4.2μL的条件进行转染,然后采用RT-PCR检测干扰后24h、48h、72h后RPS20 mRNA表达。 3.2荧光定量RT-PCR检测RNAi后IEC-6细胞RPS20 mRNA的表达 设置空白对照组、转染试剂对照组、阴性对照组、siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组,转染条件及方法同3.1,然后采用实时荧光定量RT-PCR检测干扰48h后RPS20mRNA表达。 3.3 Western-Blot检测RNAi后IEC-6细胞RPS20蛋白的表达 设置空白对照组、转染试剂对照组、阴性对照组、siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组,转染条件及方法同3.1,然后采用Western-Blot检测干扰后24h、48h、72h,RPS20蛋白的表达。 4.RNAi后IEC-6细胞形态功能的改变4.1 RNAi后IEC-6细胞形态的变化 转染条件及方法同3.1,设置空白对照组、转染试剂对照组、siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组,采用相差显微镜观察细胞的大体形态; 设置空白对照组、转染试剂对照组、阴性对照组、siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组,采用透射电镜观察干扰RPS20基因48h后,IEC-6细胞超微结构的变化。 4.2 RNAi后对IEC-6细胞迁移能力的影响 设置空白对照组、转染试剂对照组、阴性对照组、siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组,转染条件及方法同3.1,转染后48h划痕法建立细胞迁移模型,划痕24h后,拍照,计算细胞迁移的数目,以观察干扰RPS20后,细胞迁移能力的变化。 4.3 RNAi后IEC-6细胞增殖效率的变化 设置空白对照组、siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组,转染条件及方法同3.1,采用细胞计数法计数干扰后24h、48h、72h IEC-6细胞数目的变化; 设置空白对照组、转染试剂对照组、siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组,96孔板每孔种植2.5×10~4个细胞,第2日转染时,按照每孔转染总体积0.6mL、20pM浓度的siRNA20μL(即siRNA终浓度160nM)、Lipofectamine2000 4.2μL的条件进行转染,MTT法观察干扰RPS20后24h、48h、72h IEC-6细胞增殖效率的变化。 4.4 RNAi后对IEC-6细胞凋亡的影响 设置空白对照组、转染试剂对照组、阴性对照组、siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组,转染条件及方法同2,采用Anexin V—FITC检测方法,观察干扰RPS20 48h后诱导IEC-6细胞凋亡的情况。 结果 1.IEC-6细胞生长状况的观察 引进的IEC-6细胞具有典型的正常肠上皮隐窝细胞的形态特征;具有较高的生存活力;细胞在第3天时进入对数生长期,在第7~10天时达到平台期,之后又继续缓慢增长。 2.RNA干扰过程中IEC-6细胞转染条件的优化 荧光显微镜检测转染效率,以评分进行秩和检验:结果仅有转染试剂或仅有FAM-siRNA,或两者均无的组别,评分均为0;转染试剂加FAM-siRNA组别均有或强或弱的荧光表达。 流式细胞仪检测转染效率,以Lipofectamine2000 1.0μL+FAM-siRNA 160nM组转染效率最高(平均76.3%);而空白对照组约为1%。 3.筛选针对RPS20基因的有效干扰片段 3.1 RT-PCR检测干扰后RPS20 mRNA的表达 在干扰后24h,与空白组比较,siRNA1组RPS20的mRNA表达明显减少,差异具有显著性意义(P<0.05),而siRNA2、siRNA3组都没有明显抑制其表达;在干扰后48h、72h,siRNA1、siRNA2、siRNA3组,都没有明显抑制RPS20 mRNA表达的趋势。 3.2荧光定量RT-PCR检测干扰后RPS20 mRNA的表达 相对于空白对照组来说,siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组三组都在转染48h后成功地干扰了RPS20基因的表达,干扰效率在80%-90%左右。 3.3 Western-Blot检测干扰后RPS20蛋白的表达 与空白对照组比较,干扰后24h,siRNA1、siRNA2组蛋白表达量均降低,且差异具有显著性意义(P<0.028,P<0.049),siRNA3组蛋白表达量也趋向降低,但并不具有显著性差异(P<0.065);与空白对照组比较,干扰后48h,siRNA2、siRNA3组蛋白表达量均降低,且差异具有显著性意义(P<0.028,P<0.006),siRNA1组蛋白表达量也趋向降低,但并不具有显著性差异(P<0.619);与空白对照组比较,干扰后72h,siRNA2、siRNA3组蛋白表达量均降低,且差异具有显著性意义(P<0.019,P<0.015),siRNA1组蛋白表达量也趋向降低,但并不具有显著性差异(P<0.056)。 4.RNAi后IEC-6细胞形态功能的改变 4.1 RNAi后IEC-6细胞形态的变化 相差显微镜下观察,与空白组比较,siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组三组干扰序列细胞数都有所减少,但细胞形态并没有明显改变。透射电镜检测干扰后48h细胞超微结构的变化,发现:空白对照组IEC-6细胞膜、细胞核完整,细胞器丰富;转染试剂对照组及阴性对照组,细胞核都比较完整,有少许空泡及脂肪颗粒;siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组细胞膜不完整,胞浆内有大量空泡出现,溶酶体增加,siRNA2组、siRNA3组空泡内还有疑似高电子致密度内容物的生成;细胞器较少,部分细胞呈现细胞器模糊。 4.2 RNAi后对IEC-6细胞迁移能力的影响 与空白组比较,siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组都能在干扰后48h抑制细胞的迁移(P<0.01,P<0.01,P<0.01)。 4.3 RNAi后IEC-6细胞增殖效率的变化 细胞计数法:与空白对照组比较,转染后24h、48h、72h,siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组都能明显抑制IEC-6细胞生长的数目(P<0.01)。 MTT法:与空白对照组比较,转染后24h,siRNA2组、siRNA3组都能明显地抑制细胞增殖(P<0.05);转染后48h,siRNA2组能抑制细胞的增殖(P<0.05);转染后72h,siRNA2组、siRNA3组能抑制细胞的增殖(P<0.01,P<0.05)。 4.4 RNAi后对IEC-6细胞凋亡的影响 与空白对照组比较,siRNA1组活力细胞减少,差异具有显著性意义(P<0.05);siRNA1组早期凋亡细胞有所增多,但差异没有显著性意义;各组正常死亡细胞及晚期凋亡细胞比较,差异都没有显著性意义。 结论 1.IEC-6细胞生长曲线在第10后,从平台期又进入了缓慢增长阶段,由于在连续培养IEC-6细胞10天后,细胞会呈现分化状态,分析缓慢增长可能与分化有关; 2.本课题设计并合成了3对针对大鼠RPS20的siRNAs,而且都能够有效地抑制IEC-6细胞RPS20mRNA与蛋白的表达,表明了序列的有效性; 3 IEC-6细胞胞浆空泡化,并且迁移、增殖能力受到抑制,但并没有导致细胞早期凋亡的发生,该结果提示干扰RPS20可能影响IEC-6细胞的消化吸收功能和胃肠粘膜损伤修复功能,与前期收集的脾气虚证患者消化吸收功能下降、黏膜损伤修复能力下降等表现相符合。本结果支持由临床研究基因表达谱归纳出的特点,支持脾气虚证本质与RP相关的假说。
【学位授予单位】:广州中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R256.3

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杨维益,梁嵘,文平,季绍良,杨敏;脾气虚证时肌酸磷酸激酶及其同功酶活性变化的临床研究[J];中华中医药杂志;1992年04期
2 杨云,陈小野,郭育芝,孙刚,朱观熙,杨畔农,王安民,傅湘琦,柳和培,王玉萍,李乐红,王昕,向丽华,王乃琪;劳倦和饥饱引起的大鼠脾虚证模型的造型及实验研究[J];中华中医药杂志;1989年02期
3 修宗昌,李德新;脾虚证Ca~(2+)-CaM信号系统的实验研究[J];中国医药学报;2002年12期
4 孙弼纲,刘健;脾虚证分度诊断及病理生理学动态变化研究[J];安徽中医学院学报;1999年05期
5 夏天,李刚,王宗仁,张仲海;脾虚大鼠下丘脑垂体甲状腺轴功能的变化[J];安徽中医学院学报;2001年04期
6 李刚,梁红娟,张贺龙,夏天;脾虚证大鼠各脑区和血清亮氨酸-脑啡肽的变化[J];安徽中医学院学报;2002年02期
7 龚剑峰;朱维铭;刘放南;罗楠;谭力;李宁;黎介寿;;D-木糖吸收试验评价短肠综合征病人的吸收功能[J];肠外与肠内营养;2006年02期
8 杨冬花,李家邦,郑爱华,蒋荣鑫;脾气虚证模型大鼠Th_1/Th_2细胞因子的失衡以及四君子汤的干预作用[J];中国医师杂志;2004年02期
9 史成和,陆松敏 ,聂渝琼,刘建仓 ,龙在云 ,李萍;缺氧复氧对IEC-6肠上皮细胞膜电位的影响及紫芪方的保护作用[J];解放军药学学报;2005年04期
10 刘红春,王红霞,刘旺根;黄芪建中汤抗大鼠脾气虚证实验研究[J];郑州大学学报(医学版);2004年02期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王洪海;谢鸣;;复合病因造模法致脾虚证大鼠模型在免疫系统方面的变化[J];中国实验方剂学杂志;2006年12期
2 张斌,高金亮;健脾化淤对脾虚型慢性萎缩性胃炎大鼠胃肠功能的影响[J];中国中西医结合消化杂志;1995年01期
3 许长照,张瑜瑶;祁白术治疗脾虚证小鼠对消化器官组化和超微结构的影响[J];中国中西医结合消化杂志;2001年05期
4 朱志强,张兰;运动性脾胃虚弱动物模型的实验研究[J];中医药学刊;2002年05期
5 张恩户,赵勤,侯建平,赵燕平;补中益气汤对脾虚发热家兔体温、脑脊液PGE_2和丘脑下部-视前区组织cAMP含量的影响[J];中国中医基础医学杂志;2003年08期
6 黄智芬,黎汉忠,施智严,谭志强,张作军,陈闯,陆永奎;健脾消积口服液结合西药治疗Ⅱ、Ⅲ期肝癌40例的临床观察[J];中国中西医结合杂志;2003年03期
7 吴苏冬,周冬枝;脾虚证本质的研究现状[J];现代中医药;2002年01期
8 魏彦明;四君子汤对家兔脾虚症调整作用的实验研究[J];甘肃农业大学学报;1997年03期
9 杨少锋;关于骨质疏松症与血瘀关系的探讨[J];湖南中医药导报;1996年04期
10 鄢东红,金益强;五脏证候实验指标及病理生理学基础研究述评(I)[J];湖南中医杂志;1995年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 侯风刚;凌昌全;刘庆;贺宪民;;多种方法相结合建立原发性肝癌肝阴虚证量化标准的试验研究[A];第二届国际中西医结合、中医肿瘤学术研讨会论文汇编[C];2004年
2 陈嫈;;急性胃黏膜病变86例临床分析[A];2007年贵州省消化内镜诊疗及消化系疾病学术年会资料汇编[C];2007年
3 陈小野;;脾气虚证动物模型初步规范化的造模方法和思路[A];首届中国中医药实验动物科技交流会论文汇编[C];2002年
4 魏玉霞;乌云·斯日古楞;刘彦民;;蒙药嘎木朱尔合云南白药保留灌肠治疗溃疡性直肠炎64例[A];内蒙古医学院中蒙医学院50周年校庆论文专辑(蒙医蒙药)[C];2006年
5 李章勇;沙洪;赵舒;王妍;王伟;任超世;;生物电阻抗法测量胃排空的研究[A];中国生物医学工程进展——2007中国生物医学工程联合学术年会论文集(下册)[C];2007年
6 王伟;李章勇;贺中华;杨及;王美霞;;基于阻抗法的胃排空检测[A];中国生物医学工程进展——2007中国生物医学工程联合学术年会论文集(下册)[C];2007年
7 李亮;朱庆;;家鸡核糖体蛋白基因RPS13的电子克隆及鉴定[A];中国家禽业——机遇与挑战——第十三次全国家禽学术讨论会论文集[C];2007年
8 舒晓春;朱晓峰;孙立;;糖胃舒胶囊治疗糖尿病性胃轻瘫40例[A];第八次全国中西医结合虚证与老年医学学术研讨会论文集[C];2005年
9 李荣亨;周小莉;;复元胶囊含药血清对软骨细胞增殖与合成代谢的影响[A];全国中西医结合强直性脊柱炎专题研讨会论文汇编[C];2007年
10 王燕斌;杨昭徐;;盐酸小檗碱对大鼠结肠平滑肌肌电和收缩性能的影响[A];全国中医药科研与教学改革研讨会论文集[C];2000年
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1 张申;消痰散结方对裸鼠原位移植人胃癌转移及相关粘附分子的影响[D];第二军医大学;2005年
2 李海霞;血瘀证病位分类与规范化研究[D];中国中医科学院;2006年
3 梅武轩;脾主运化水液与胃粘膜水通道蛋白3、4表达的相关性研究[D];广州中医药大学;2006年
4 马金鹏;糖心通干预糖尿病心血管重构影响糖尿病心脏病发生发展机制的研究[D];山东中医药大学;2005年
5 刘琳娜;大黄多糖对肠上皮细胞损伤的修复作用及其机制研究[D];第四军医大学;2005年
6 陶志广;肺癌脾虚证的预后分析及健脾法治疗肺癌的实验研究[D];广州中医药大学;2005年
7 胡晨霞;肺癌热休克蛋白70-多肽复合物的抗瘤免疫效应研究及其与热证的相关性[D];广州中医药大学;2005年
8 石忠峰;溃疡性结肠炎靶向治疗新药白术黄芪胶囊药学与药理学研究[D];广州中医药大学;2005年
9 隋峰;补脾方药对脾虚大鼠离体胃壁细胞胃泌素受体及受体后信号转导调控作用研究[D];广州中医药大学;2005年
10 李翠娟;中医证本质研究思路的探讨[D];北京中医药大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王丹;半夏泻心汤“辛开苦降”调节胃动力的研究[D];北京中医药大学;2004年
2 董孟杰;胶质瘤表皮生长因子受体显像[D];重庆医科大学;2002年
3 高志胜;红霉素中枢拟胃动素作用及其诱导室旁核c-Fos蛋白表达[D];青岛大学;2001年
4 马新红;健脾止泻散对脾虚泄泻小鼠超氧化物歧化酶、丙二醛影响的实验研究[D];陕西中医学院;2006年
5 尹靖云;脾气虚证、脾胃湿热证与胃动力的关系问题探讨[D];广州中医药大学;2007年
6 李秋芬;中药肾康灵对小儿原发性肾病综合症t-PA和PAI-影响[D];福建中医学院;2007年
7 李志勇;黄芪、茯苓及其对药对脾虚大鼠脑-肠轴VIP的影响与归经的相关性研究[D];山东中医药大学;2005年
8 茹瑞先;益气活血方治疗慢性萎缩性胃炎气虚血瘀证的临床研究[D];山东中医药大学;2005年
9 潘昊;长动的抗肿瘤药效和作用机制研究[D];上海医药工业研究院;2005年
10 肖冰;肝硬化常见中医证候的计量诊断及用药规律研究[D];暨南大学;2005年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 黄金昶,张代钊;恶性肿瘤放射增敏中药的研究[J];癌症进展;2004年06期
2 司维柯,肖桃元,康格非;苦参碱对人肝癌细胞HepG_2的细胞形态影响和相关增殖因素的变化[J];第三军医大学学报;2000年06期
3 郑剑霄;周同冲;徐凯;李柳宁;;石上柏联合放疗治疗鼻咽癌临床观察[J];南方医科大学学报;2006年02期
4 李伟雄,陈应瑞,徐国镇;活血化瘀中药联合放疗治疗鼻咽癌[J];广东医学;2002年01期
5 史建军,邬晓东,刘锦全,邵汛帆,陈冬平;中药增敏散配合放疗治疗鼻咽癌的疗效观察[J];国际医药卫生导报;2004年24期
6 李毓;薏苡仁配合放射治疗晚期鼻咽癌的初步观察[J];华夏医学;1997年01期
7 李毓;薏苡仁配合放射治疗晚期鼻咽癌的远期疗效分析[J];华夏医学;1998年01期
8 侯华新,黎丹戎,黄桂宽,张玮,莫玉珍,宋慧,周劲帆;银杏叶多糖在肿瘤放射、化学治疗中的增敏作用研究[J];广西医科大学学报;2005年01期
9 张勇!050011石家庄市,白杰,王清朝;回生口服液加放疗治疗食管癌的远期疗效观察[J];河北医药;2000年05期
10 吴大鹏;李新明;赵军方;王海斌;赵德强;;β-榄香烯乳对舌鳞癌细胞株Tca-8113体外放射增敏观察[J];肿瘤基础与临床;2006年02期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈家旭,杨维益;中医脾虚证研究的进展[J];中国中医基础医学杂志;1995年03期
2 李燕舞;王汝俊;王建华;;补脾方药对脾虚大鼠壁细胞超微结构的影响[J];中药药理与临床;2006年06期
3 赵建明,赵淑媛;脾虚证红细胞膜流动性改变的临床研究[J];中国中西医结合杂志;1996年06期
4 孙弼纲 ,田长经,沈鹰;中医“脾虚”证本质的临床探讨[J];安徽中医学院学报;1983年03期
5 沈鹰;“生化乏源”动物免疫器官改变的实验研究——营养不良和贫血小白鼠胸腺与脾脏的病理形态学观察[J];安徽中医学院学报;1983年04期
6 孙弼纲,刘健;脾虚证分度诊断及病理生理学动态变化研究[J];安徽中医学院学报;1999年05期
7 夏天,李刚,王宗仁,张仲海;脾虚大鼠下丘脑垂体甲状腺轴功能的变化[J];安徽中医学院学报;2001年04期
8 陈永辉;脾虚证免疫学研究进展[J];安徽中医学院学报;2001年04期
9 陈茹琴,孙弼纲,高尔鑫,沈鹰;不同程度脾虚患者甲状腺功能改变的临床研究[J];安徽中医学院学报;1998年03期
10 葛世丽,李刚,陈伟,楼铁柱,吴德昌;SAGE方法分析永生化BEP2D细胞及α粒子诱发恶性转化BEP2D细胞的基因表达[J];癌症;2001年01期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 陈雷;应用模糊数学中模式识别方法进行脾虚大鼠模型评价研究[D];辽宁中医学院;2004年
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中国期刊全文数据库 前10条
1 刘士敬,杨维益,朱倩;中医产科病证脾气虚证型量化诊断标准研究——附92例本证型诊断因素的回归分析[J];辽宁中医杂志;1997年10期
2 ;脾虚演变过程可客观描述[J];山东中医药大学学报;1999年03期
3 易杰,李德新,林庶如,夏淑杰;脾气虚大鼠脾肝组织蛋白激酶C活性变化的实验研究[J];辽宁中医杂志;2002年06期
4 刘传珍,周丽华,水正;胃肠病脾气虚证三方的临床研究[J];山东中医药大学学报;1995年02期
5 张锐,王联庆,杨颉,王国才;捏脊疗法治疗儿童脾气虚证的效果[J];齐鲁医学杂志;2003年02期
6 李锦毅,谭毅,王玉良;扶正健泰汤对肝癌脾气虚证药效学及细胞周期作用的实验与临床研究[J];中国实验方剂学杂志;1999年06期
7 陈小野;参加脾气虚证发生机理的大动物实验研究工作[J];中国中西医结合杂志;2000年01期
8 孙丰雷;糖尿病时脾气虚证的传统与现代解读[J];辽宁中医杂志;2002年11期
9 任平,黄熙,张航向,黄裕新,杨喜忠,赵保民;脾气虚证患者血浆和组织中SS、Mot、CCK的变化[J];世界华人消化杂志;2004年03期
10 马建伟,郝刚,李江;脾气虚证与血清锌铜镁关系的探讨[J];空军总医院学报;1989年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张辉;于力;朱龙英;万延慧;朱为民;;Hair-pin RNA介导的番茄抗TYLCV效果初步研究[A];庆祝中国园艺学会创建80周年暨第11次全国会员代表大会论文摘要集[C];2009年
2 李艳;严明;;RNA干扰[A];第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(下)[C];2004年
3 闫虎斌;陆智明;;基于RNA干扰的植物抗病毒育种原理及研究进展[A];中国柑橘科技创新与产业发展战略论坛暨中国柑橘学会2007年年会论文集[C];2007年
4 赵午莉;邵荣光;;MR-1基因在白血病K562细胞中的功能研究[A];2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2009年
5 陈始明;陶泽璋;肖伯奎;;RNA干扰hTERT基因抑制Hep-2细胞生长增殖的实验研究[A];湖北省抗癌协会头颈肿瘤专业委员会第四次学术会议资料汇编[C];2005年
6 潘燚;李伟雄;杨素清;曾子君;林映如;郭爱林;;siRNA抑制肺癌细胞DNA-PKcs的表达与放射敏感性的关系[A];中华医学会放射肿瘤治疗学分会六届二次暨中国抗癌协会肿瘤放疗专业委员会二届二次学术会议论文集[C];2009年
7 梁睿;罗庆;金先庆;;快速直视筛选结缔组织生长因子特异RNA干扰序列的研究[A];第八届全国儿童肿瘤学术会议论文汇编[C];2009年
8 韩之波;王晗;任贺;赵辉;刘拥军;韩忠朝;;RNA干扰沉默HIF-1α对人乳腺癌细胞功能的影响[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年
9 王子见;吴秀萍;邓洪宽;刘明远;;RNA干扰技术在动物寄生性线虫研究中的局限性[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会论文集[C];2009年
10 母连志;丁壮;丛彦龙;尹仁福;刘美;王昌庆;李少丽;邱蜜蜜;;靶向新城疫病毒P基因利用RNAi技术抑制其在鸡胚成纤维细胞上的复制[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(下册)[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 徐铮奎;RNA干扰剂即将浮出市面[N];医药经济报;2004年
2 王建华;二十一世纪脾气虚证本质研究重点[N];中国医药报;2000年
3 王建华;二十一世纪脾气虚证本质研究的战略重点[N];中国中医药报;2000年
4 余志平;打开功能基因组学与未来治疗学的大门[N];中国医药报;2004年
5 李彬;今年技术发展呈八大趋势[N];科技日报;2005年
6 本报记者 韦绍锋 邢少文 康义文 康义瑶(实习) 驻地记者 胡勇;生物医药“海归”之惑[N];医药经济报;2004年
7 记者 吴伟农;世界十大科技突破[N];新华每日电讯;2001年
8 胡永生;今年的热门技术[N];科技日报;2004年
9 曹丽君;RNA干扰技术取得突破[N];健康报;2004年
10 记者 何德功 毛磊 宋心德;科学正在使基因为人类服务[N];新华每日电讯;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李恭会;shRNA阻抑前列腺癌细胞雄激素受体和hTERT基因表达的研究[D];浙江大学;2005年
2 魏军民;RNA干扰逆转肿瘤多药耐药的实验研究[D];山东大学;2005年
3 王晓龙;小鼠骨骼肌细胞SelW基因的RNA干扰研究[D];东北林业大学;2006年
4 王静;转化生长因子-β1基因沉默对人涎腺粘液表皮样癌Ms细胞生物学行为的影响[D];第四军医大学;2006年
5 张守峰;狂犬病病毒的RNA干扰研究[D];吉林大学;2007年
6 王鹏雁;口蹄疫病毒干扰RNA转基因小鼠模型的构建[D];石河子大学;2008年
7 王静;脾气虚证相关基因RPS20在IEC-6细胞的生物功能鉴定[D];广州中医药大学;2009年
8 谭兵;RNA干扰在体外、体内抑制TNF-α表达的实验研究[D];广州医学院;2008年
9 倪勤;shRNA表达框的快速制备及其在抗HBV相关研究中的应用[D];浙江大学;2004年
10 杨捷琳;腺样囊性癌高低转移细胞株基因表达差异性及B7-1、XAGE-1b与转移相关性研究[D];复旦大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 黄伟素;水稻穗颈伸长基因EU12的功能验证[D];浙江大学;2006年
2 贾勇圣;红霉素抑制成神经细胞瘤增殖机制的初步研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
3 姚津剑;针对P基因的siRNA对HBV表达影响的实验研究[D];华中科技大学;2007年
4 李涛;抑制乳腺癌耐药蛋白表达逆转肝细胞癌多药耐药[D];重庆医科大学;2009年
5 马耀华;马铃薯PTOM1基因全长cDNA的克隆及其RNAi转基因植株的构建[D];广西大学;2004年
6 王维锋;腺病毒介导的siRNA抑制hTERT增强肝癌化疗敏感性的实验研究[D];第二军医大学;2004年
7 吕青;RNA干扰抑制肿瘤细胞血管内皮生长因子的表达[D];北京中医药大学;2005年
8 杨德华;端粒酶亚单位的siRNA对肝癌的作用[D];华南师范大学;2005年
9 张勇;CLC3基因siRNA表达载体构建及对转染的胃癌细胞的增殖抑制作用[D];第四军医大学;2005年
10 涂宏钢;应用RNA干扰技术对新生隐球菌CNLAC1基因功能的初步研究[D];第二军医大学;2005年
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