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狭基线纹香茶菜中水溶性黄酮的精制工艺研究

赵薇  
【摘要】: 中药溪黄草为民间习用草药,《中药大辞典》等文献记载中药溪黄草的原植物为香茶菜属线纹香茶菜。狭基线纹香茶菜、细花线纹香茶菜以及同属植物溪黄草在民间也作为中药溪黄草入药。本文研究的狭基线纹香茶菜为唇形科香茶菜属植物Ⅰ. lophanthoides var. gerardianus (Bentham)H. Hara的干燥地上部分。 大量的前期研究证明狭基线纹香茶菜的活性部位为水溶性部分,因此本课题主要针对狭基线纹香茶菜的水溶性总黄酮的提取纯化工艺进行系统研究。 文献研究:通过从种质资源与生物学特征、生物形态、鉴别、化学成分、药理活性研究等方面对狭基线纹香茶菜进行综述。同时对黄酮类化合物的研究概况包括概述、提取纯化方法、药理活性研究等方面进行了总结,为进一步设计和实施实验方案提供理论依据。 系统预实验:通过系统预试验对水提取物进行化学鉴别,结果发现狭基线纹香茶菜水提物中含有氨基酸、萜类、黄酮类、酚类等成分。结合本课题对狭基线纹香茶菜药理药效研究结果分析,本文的研究内容主要针对水溶性总黄酮类化合物进行。 化合物的分离:采用大孔树脂与水饱和正丁醇萃取联用制备上柱样品,然后用聚酰胺层析柱分离单体成分,洗脱剂为氯仿:甲醇(100:0-0:100),采用薄层色谱跟踪斑点洗脱情况,指导洗脱剂的变化情况。合并相同斑点样品,浓缩析晶,薄层或高效液相检测,纯度不高或是多个斑点共存样品将用制备液相分离,得到1个化合物,通过理化反应结果和光谱数据(紫外,红外、质谱,核磁共振谱)进行结构解析,鉴定化合物为6-C-吡喃阿拉伯糖基-8-C-吡喃葡萄糖基芹菜素。 水溶性总黄酮提取工艺:对提取时间、溶媒用量、提取次数进行单因素考察,确定单因素水平。采用L9(34)正交设计,考察提取时间、溶媒用量、提取次数三个因素对提取的影响,确定狭基线纹香茶菜最佳的提取条件为:12倍量水,提取3次,每次2.0h。 水溶性总黄酮的纯化工艺:筛选大孔树脂型号(FL1、DN-603、HPD-826. HPD-722、HPD-600五种不同极性的大孔树脂),考察了大孔吸附树脂的静态、动态吸附性能考察,并考察了上柱液浓度、上样流速、泄漏曲线、洗脱溶剂、洗脱用量等因素对水溶性总黄酮富集的影响,确定最佳的富集工艺并进行工艺验证。 HPD-600型大孔树脂最佳工艺参数为:上柱液总黄酮浓度控制在2.27—2.52mg/mL、上样流速2BV/h、上样液体积控制在6BV以内、水洗杂质用量为4BV,洗脱溶剂为60%乙醇、洗脱用量为5BV。HPD-600型大孔吸附树脂柱60%乙醇洗脱液总固物中总黄酮的纯度可达到70.21%,精制度可达到1715.96%。


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