收藏本站
《华南师范大学》 2002年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

花生抗黄曲霉(Aspergillus flavus Link)侵染和产毒机制以及抗性遗传规律的研究

梁炫强  
【摘要】: 培育抗黄曲霉品种是解决花生黄曲霉毒素污染最有效、最经济和最安全的方法,而明确抗性品种的抗性机制以及它的遗传规律是培育抗黄曲霉品种所必需的前提条件。 本文通过1)比较抗-感黄曲霉品种种子所固有的抗性组分的差异;2)比较抗-感种子感染A.flavus后所诱导的防卫反应的差异;3)分析抗性和感病品种杂交后代抗性的表现,探讨花生抗黄曲霉侵染和产毒的机制和抗性的遗传规律。 结果表明: 一、种皮的蜡质和角质层,以及种子所含有抗菌蛋白是花生抗黄曲霉侵染和产毒所固有的抗性机制。 1、种皮破损的花生种子黄曲霉毒素含量显著高于种皮完整的种子,表明花生种皮在抗黄曲霉侵染和产毒方面起着重要的屏障作用。用氯仿去除种皮蜡质、KOH或角质酶去除种皮角质层后均能显著提高种子黄曲霉感染率和黄曲霉毒素含量。同时去除种皮蜡质和角质层的种子与种皮破损种子的黄曲霉感染率和毒素含量差异不显著,表明种皮的抗性成份主要是蜡质和角质层。种皮蜡质含量测定和种皮表面扫描电镜观察表明,种皮表面蜡质的含量和角质层的厚度与品种的抗性有关。抗性品种种皮蜡质含量显著高于感病品种,且其表面覆盖蜡质的面积较感病品种广。种皮蜡质提取物在体外抑菌效果不显著,说明蜡质的抗性作用主要是物理性阻止黄曲霉菌的穿透。 2、不同pH值缓冲液提取蛋白抑菌试验表明花生种子pH2.8缓冲液提取蛋白中含有能抑制黄曲霉生长的有效蛋白组份。抗-感品种pH2.8缓冲液提取蛋白质的PAGE电泳图谱没有明显差异,而SDS-PAGE电泳图谱显示所有抗性品种38kDa蛋白的相对含量均比感病品种高。通过硫酸铵分级沉淀、分子筛和离子交换柱层析方法,从pH2.8缓冲液提取蛋白中分离纯化出在体外能显著地抑制A.flavus孢子萌发和菌丝生长的26.3kDa和14.2kDa蛋白。经肽质量指纹谱分析和蛋白质数据库检索,表明26.3kDa和14.2kDa蛋白可能是目前尚未发现的新蛋白质。 3、通过丙酮分级沉淀和DEAE-Sephadex A50离子交换柱,从花生种子醋酸提取液中分离纯化的具有胰蛋白酶抑制剂活性的胰蛋白酶抑制剂。SDS-PAGE电泳图谱显示,纯化的胰蛋白酶抑制剂是以二聚体形式存在,分子量分别为17.1和10.3kDa,纯化的胰蛋白酶抑制剂在体外能显著地抑制A.flavus孢子的萌发和菌丝的生长,表明胰蛋白抑制剂是花生种子抗黄曲霉的有效成分。种子胰蛋白抑制剂含量的多少、活性的高低与品种抗黄曲霉侵染的能力有关。5个抗性品种胰蛋白抑制剂的含量和活性均高于感病品种,且抗性品种胰蛋白抑制剂粗提液体外抑菌效果也较感病品种显著,表明花生种子胰蛋白抑制剂含量和活性可作为花生抗黄曲霉侵染的标记性状之一。 二、花生对黄曲霉入侵作出的主动防卫反应是多方面的,各种防下反应 具有时序性、协同性和多样性,而且在花生抗黄曲霉伎染利产迈中发拼巫要 的作川。受贝曲霉侵染后,抗-感品种防卫反应之间存在明显的斧异。 l、受黄曲霉感染后,抗-感花生种于过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶 (PO)和苯丙氨酸解氨酶(PA L)活性以及木质素含量等均发生显义变化。 接种后POD活性随感染大数增加而增加,但抗病品种比感病品种POD活性 增幅人,接种后1~3d抗性品种PPO t性达峰值,而感病品种d才达峰 值。抗性品种PAL活性在栓种后M活性急增,并达峰值,而感病品种在4—sd 才达峰值。按种后种于木质素的含量陋着黄曲霉由侵染时间延K而增加,但 抗病品种按种5-7d木质素的增K速率和累积量明显高丁感病品种。由丁PAL 和叩D等酶活性的提高,加速了苯丙烷衍生物如木质索的人挝合成,从而加 强防御黄曲霉侵染的能力。 2、花生对茧曲霉的抗性与其受侵染后膜质过氧化的动态变化有X。受 黄曲霉侵染后,5个抗性品种的脂氧合酶活性升高的速度快丁感病品种,且 活性氧爆发较早且量人。抗性品种受侵染后屿$1;Ho;产生速度较快,并有 两个高峰拙,第二个高峰期量人且持续时间较K,而感病品种产生速度权慢, 且仅在接种后45d有一个高峰期。相反,感染后抗性品种活性氧消除酶CAT PJ SOD活性变化不明显,而感病品种在感染后 id急剧升高并达峰值。由丁 脂氧合酶活性提高和活性氧爆发的甲且量多,但体内的 SOD*ICATffi性没有 变化,未能消除累积的活性氧,从而使抗性品种膜质过氧发生较甲且积度高, 表皮细胞发生及时性的过敏性反应坏死,抵御黄曲霉的穿透,达到抗黄曲霉 侵染的目的。 3、白黎芦醇是花生植保素中的一种。人土活力的花生种十不能产生白 基芦醇。受黄曲霉侵染后种子白黎卢醇产生的速度与抗性有关。抗性品种在 受侵染后3d人量累积,含量提高30倍,就达到峰值。而感病品种则要在侵 染后4d才达到此水平。放线菌素酮和放线菌素D处理后按种试验表明,种 子本身含有合成白螫芦‘醇的mRNA,当受外源Aj7Uv。。侵染时能檄活与合成 白黎芦醇相关酶的活性,合成大量白葵芦醇。但种十体山与一黎卢醇合成有 关的mRNA的数量似乎不多。 4、花生种子受黄曲霉侵染后可诱导产生相应的病程相关蛋白(PR-蛋 白),抗性品种PR-蛋白产生的速度较感病品种早,而且产生的m-蛋白
【学位授予单位】:华南师范大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:S435.652

手机知网App
【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 王辉;青枯菌接种后花生抗感2个品种中几种防御性酶活性的变化[D];中南民族大学;2011年
2 孙晶晶;生态经济型作物花生和土壤中黄曲霉生防菌的筛选研究[D];辽宁工程技术大学;2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 周淼平,陆维忠;植物几丁质酶及其在抗真菌基因工程中的应用[J];江苏农业学报;1998年03期
2 秦引萍;彭友良;;脂氧合酶的侵染诱导在植物抗病反应中的可能作用[J];农业生物技术学报;1995年04期
3 周桂元,梁炫强;花生种子抗黄曲霉侵染性状遗传控制的研究[J];花生学报;2001年03期
4 傅爱根,罗广华,王爱国;活性氧在植物抗病反应中的作用(综述)[J];热带亚热带植物学报;2000年01期
5 王京兰,万晶宏,罗凌,熊少祥,王光辉,贺福初,钱小红;蛋白质组研究中肽质量指纹谱鉴定方法的建立及应用[J];生物化学与生物物理学报;2000年04期
6 王义琴,张利明,李文彬,孙勇如;植物病原相关蛋白研究进展[J];生物工程进展;2000年05期
7 曾艳,赵南明,刘进元;几丁质酶与植物防卫反应[J];生物工程进展;1997年04期
8 陈三凤,刘德虎,李季伦;植物几丁质酶的结构、基因及其表达[J];生物工程进展;1998年02期
9 蓝海燕,陈正华;葡聚糖酶及其在植物中的发育调节和防卫反应[J];生物技术通报;1998年04期
10 邓德祥,盖钧镒,秦泰辰,卞云龙,印志同,徐明良;玉米对黄曲霉菌抗性的遗传控制[J];作物学报;2000年06期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 韩琳娜,崔德才;β-1,3-葡聚糖酶及其抗病机制与应用研究进展[J];山东农业科学;2004年04期
2 陈高;闫彩霞;李春娟;张廷婷;单世华;;黄曲霉侵染前后花生过氧化物酶与过氧化氢酶活性变化的研究[J];山东农业科学;2009年03期
3 孟龄;濮绍京;赵波;万平;曲延英;;小豆F_(2∶3)世代籽粒色泽性状遗传分析[J];安徽农学通报;2007年22期
4 李晓兵,吴爽;稻瘟病抗性的生理生化机制[J];安徽农业科学;2002年04期
5 薛莲,檀根甲;采后苹果果实轮纹病的研究进展[J];安徽农业科学;2004年06期
6 李宝柱;段玉玺;陈立杰;;大豆抗病相关蛋白研究进展[J];安徽农业科学;2006年09期
7 余承忠;王志勇;江淑平;万开军;;褐斑病胁迫下内生真菌感染对高羊茅叶内酶活性的影响[J];安徽农业科学;2006年12期
8 刘卫群;李浩;;差异蛋白质组学在植物研究中的应用[J];安徽农业科学;2006年17期
9 张丽霞;张国强;;大蒜蛋白酶抑制剂的分离纯化与部分性质研究[J];安徽农业科学;2006年18期
10 吴仲;阎瑞香;刘兴华;;水稻几丁质酶的表达及其酶学基本性质[J];安徽农业科学;2007年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 高同春;王梅;段劲生;孙明娜;张勇;;食品中真菌毒素的研究进展[A];食品安全的理论与实践——安徽食品安全博士科技论坛论文集[C];2005年
2 盖钧镒;章元明;;植物数量性状遗传体系检测的试验方法讨论[A];21世纪作物科技与生产发展学术讨论会论文集[C];2002年
3 毛爱军;王永健;耿三省;冯兰香;;水杨酸诱导辣椒抗疫病作用及有关生化机制的研究[A];中国园艺学会第十届会员代表大会暨学术讨论会论文集[C];2005年
4 陈钰辉;刘富中;连勇;;蔬菜枯萎病研究进展[A];中国茄子大会暨学术研讨会论文集[C];2008年
5 刘慧芹;刘慧平;韩巨才;王建明;;番茄不同品种经叶霉病菌毒素处理后SOD、POD、MDA及相对电导率的变化[A];第十九届全国植保信息交流暨农药械交易会论文集[C];2003年
6 杨晓娟;曾亚文;普晓英;杨树明;杜娟;申时全;赵常美;凌青;;水稻孕穗期耐冷性近等基因系耐冷性遗传分析[A];云南省作物学会2004—2006年优秀论文选集[C];2006年
7 浦冠勤;殷培峰;曲晓华;;植物蛋白酶抑制剂抗虫作用的研究进展[A];中国蚕学会第五次全国桑保学术研讨会论文集[C];2004年
8 张文娟;李聪;王步云;;几丁质酶与苜蓿抗病性研究[A];中国草学会牧草育种委员会第七届代表大会论文集[C];2009年
9 万平平;王清海;黄玉杰;齐勇;丁爱云;;土壤拮抗链霉菌R_(15)β-1,3-葡聚糖酶的纯化与性质[A];首届全国农业环境科学学术研讨会论文集[C];2005年
10 张国良;;硅对水稻接种纹枯病菌后保护酶活性的影响[A];中国青年农业科学学术年报[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 姜天甲;主要食用菌采后品质劣变机理及调控技术研究[D];浙江大学;2010年
2 杨艳丽;外源茉莉酸影响马铃薯对晚疫病抗性的初步研究[D];湖南农业大学;2010年
3 于莹;利用羊草EST文库克隆耐盐碱相关基因[D];吉林大学;2011年
4 台莲梅;马铃薯早疫病菌多样性和侵染过程及品种抗病机制研究[D];黑龙江八一农垦大学;2011年
5 刘春兴;森林生物灾害管理与法制研究[D];北京林业大学;2011年
6 司万童;人工湿地构建及其对污染的黄河灌溉水处理效应[D];兰州大学;2011年
7 蔡英卿;龙眼体胚发生过程中SERK等胚性相关基因的克隆与表达分析[D];福建农林大学;2011年
8 贾俊英;西芹种子浸提液对黄瓜枯萎病菌化感作用及其机理的研究[D];内蒙古农业大学;2011年
9 刘岩;物理及酶法改善热压榨花生粕蛋白功能特性的研究[D];华南理工大学;2011年
10 曾兴;144份玉米自交系纹枯病抗性相关性状的关联分析[D];四川农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 徐红明;小麦抗白粉病相关基因的克隆与分析[D];郑州大学;2010年
2 关西贞;小麦抗白粉病近等基因系的差异蛋白质组学研究[D];山东农业大学;2010年
3 王婧;不同类型种子吸湿解吸规律及其活力降低过程中的生理生化特性变化[D];山东农业大学;2010年
4 张红双;不同养殖环境生物应激因素对肉鸡免疫功能的影响[D];山东农业大学;2010年
5 张淑燕;扁桃流胶病愈合剂的研制及其对抗性生化指标的影响[D];山东农业大学;2010年
6 张曙光;中国林蛙皮肤丝氨酸蛋白酶抑制剂RCSPI2的基因克隆和原核表达[D];辽宁师范大学;2010年
7 马健;施钾对高品质棉生理特性及产量品质的影响[D];安徽农业大学;2010年
8 孙健玲;半夏的快繁及诱导子对其愈伤组织总生物碱积累的影响[D];安徽农业大学;2010年
9 魏国;两种植物NPR1基因的克隆及其对杨树转化的研究[D];安徽农业大学;2010年
10 孙新荣;半夏主要病害及其对寄主保护酶活性影响[D];甘肃农业大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王光亮,于金友,石玉萍,刘香明;植物病害生物防治研究进展[J];山东农业科学;2004年04期
2 朱圣杰,丁克坚,檀根甲;植物细菌性青枯病的生物防治研究进展[J];安徽农业科学;2003年04期
3 龚慧明;;磁场处理对蚕豆种子活力及幼苗过氧化氢酶·过氧化物酶活性的影响[J];安徽农业科学;2007年22期
4 郑燕文;;豇豆CAT活性的研究[J];安徽农业科学;2010年05期
5 江昌俊,余有本;苯丙氨酸解氨酶的研究进展(综述)[J];安徽农业大学学报;2001年04期
6 荣瑞芬;郭堃;厉重先;李丽云;李祖明;;紫外照射诱导采后番茄苯丙氨酸解氨酶的分离纯化[J];北方园艺;2007年12期
7 刘鸿年;刘发敏;;茶鲜叶苯丙氨酸解氨酶的提取及其活性测定[J];中国茶叶;1989年01期
8 王俊刚,陈国仓,张承烈;水分胁迫对2种生态型芦苇(Phragmites communis)的可溶性蛋白含量、SOD、POD、CAT活性的影响[J];西北植物学报;2002年03期
9 郭新梅;陈耀锋;李春莲;任慧莉;;禾谷镰刀菌粗毒素对不同小麦品种幼苗MDA含量和SOD、PAL活性的影响[J];西北植物学报;2007年01期
10 袁宗胜,胡方平,洪永聪,蔡学清;花生品种(系)对青枯菌的抗性鉴定[J];福建农林大学学报(自然科学版);2002年02期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 暴增海;杨文兰;马桂珍;;冀东地区花生收获前地下部黄曲霉菌的分离鉴定[A];中国菌物学会第三届会员代表大会暨全国第六届菌物学学术讨论会论文集[C];2003年
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 胡娜;基因芯片技术在黄曲霉毒素生物合成相关基因检测中的应用研究[D];南昌大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 雷永;花生对黄曲霉菌侵染抗性的分子标记[D];中国农业科学院;2004年
2 许艳丽;产黄曲霉毒素菌株的检测方法及产毒条件的研究[D];中国海洋大学;2008年
3 田立荣;花生黄曲霉产毒抗性的遗传重组潜力及抗性机理研究[D];中国农业科学院;2009年
【二级引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 郭静佩;花生品种对黄曲霉菌的抗性鉴定和抗侵染机制研究[D];河南师范大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 袁章虎,曲健木;棉花抗菱蔫病机理研究进展[J];河北农业大学学报;1994年01期
2 李光星;花生抗黄曲霉侵染研究初报[J];福建农业科技;1989年06期
3 李盾,王振中,林孔勋;花生体内几种酶的活性与抗锈病性的关系[J];华南农业大学学报;1991年03期
4 莫惠栋;;胚乳性状的双列模型及其分析[J];江苏农学院学报;1988年03期
5 邓德祥,陶利珍,秦泰辰,徐明良,卞云龙;玉米对黄曲霉菌的抗性遗传[J];江苏农学院学报;1996年03期
6 邓德祥,蒋思霞,秦泰辰,卞云龙,徐明良;玉米对黄曲霉菌田间抗性遗传[J];江苏农学院学报;1997年03期
7 杨家书;吴畏;常迺滔;高增贵;李弋;;远中5号小麦及其变异系对秆锈病抗性机制初探[J];辽宁农业科学;1992年01期
8 宋晓轩;郭金城;张久绪;潘学标;李为;;棉株感染枯萎病后主要生理代谢变化的研究[J];棉花学报;1992年02期
9 周桂元,梁炫强,李一聪,李少雄,黎穗临;抗感黄曲霉侵染花生主要农艺性状的遗传分析[J];花生科技;1999年S1期
10 赵志强;花生中黄曲霉毒素的预防与去除[J];花生科技;1995年02期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 ;建立花生种子队 加速实现良种化[J];广西农业科学;1975年02期
2 余露;;“康宽+优拌”花生创高产[J];农药市场信息;2011年17期
3 黄星炯;;花生的收获与贮藏[J];辽宁农业科学;1965年05期
4 夏清华;保持花生种子生活力的方法[J];种子;1996年03期
5 戴小红;;花生高产栽培技术[J];福建农业;2009年04期
6 杨军;;花生种不宜早剥壳[J];新农业;2010年04期
7 韩明珠;;努力发展金县的花生生产[J];辽宁农业科学;1982年02期
8 赵国恒;;怎样贮藏好花生种子[J];种子世界;1990年10期
9 汪新福,陆挺,周宏余,朱光华,丁晓纪;低能V~+注入花生种子的深度研究[J];原子能科学技术;2002年06期
10 金建猛;任丽;谷建中;范君龙;刘向阳;;影响花生种子安全贮藏的原因与对策[J];种子科技;2007年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王通;谢纯政;李万福;梁炫强;李玲;;花生种子吸涨诱导蛋白质与抗黄曲霉关系的研究[A];全国“植物生物技术及其产业化”研讨会论文摘要集[C];2007年
2 任彦;梁山;宾金华;;花生蛋白酶抑制剂基因的时空表达[A];第六届中国植物逆境生理学与分子生物学学术研讨会论文摘要汇编[C];2010年
3 王兴军;夏晗;万书波;毕玉平;;我国花生生物技术研究进展[A];2010中国作物学会学术年会论文摘要集[C];2010年
4 王二虎;李树新;孙欣;霍继超;李庆;陈光华;;开封市花生产量与气象因素的关联度分析[A];第28届中国气象学会年会——S11气象与现代农业[C];2011年
5 张廷婷;闫彩霞;郑奕雄;单世华;李春娟;刘宇;周西;;花生抗黄曲霉相关基因的克隆与表达[A];中国作物学会50周年庆祝会暨2011年学术年会论文集[C];2011年
6 陈永灿;顾彩菊;朱丽慧;关佳佳;周震祥;马晓平;黄启忠;孟和;;北京油鸡5趾性状观察及遗传规律杂交分析[A];中国家禽科学研究进展——第十四次全国家禽科学学术讨论会论文集[C];2009年
7 王晓祥;;梨不同品种抗寒力遗传的评价[A];中国园艺学会第十届会员代表大会暨学术讨论会论文集[C];2005年
8 王蕾;秦智伟;辛明;;酸浆属植物遗传育种研究进展[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
9 朱国立;;我国蓖麻杂优利用研究现状及展望[A];全面建设小康社会:中国科技工作者的历史责任——中国科协2003年学术年会论文集(下)[C];2003年
10 邱东峰;;水稻无花粉型核不育系特优占S育性特征研究[A];中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编(2004-2008)[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 山东省鄄城县农业局 贾友江;花生留种四环节[N];河北科技报;2011年
2 定州市农牧局 王虎;花生种子咋贮藏[N];河北科技报;2007年
3 王虎;定州花生种子开市早[N];河北科技报;2008年
4 杞采;河南杞县 花生种子纳入政采[N];政府采购信息报;2009年
5 王虎;花生种子提前剥壳要不得[N];农民日报;2005年
6 王虎;花生种子不能提前剥壳[N];保定日报;2006年
7 小虎;花生种子缺口大 来年价格必走高[N];保定日报;2007年
8 保定定州市农业信息中心 王虎;开市早 价格高 供需两旺[N];河北农民报;2008年
9 定州市农业信息中心 王虎;明年花生种子供应吃紧[N];河北科技报;2007年
10 周宏美;怎样贮藏花生[N];中国特产报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 梁炫强;花生抗黄曲霉(Aspergillus flavus Link)侵染和产毒机制以及抗性遗传规律的研究[D];华南师范大学;2002年
2 张宾;大豆胰蛋白酶抑制剂的制备、理化性质和抗黄曲霉作用[D];中国海洋大学;2010年
3 文方德;花生种子蛋白酶抑制剂及其与脱水耐性及活力的关系研究[D];中山大学;1997年
4 陈继兰;鸡肉肌苷酸和肌内脂肪含量遗传规律及相关候选基因的研究[D];中国农业大学;2004年
5 全先庆;花生金属硫蛋白基因的克隆及AhMT2α基因的功能鉴定[D];山东师范大学;2007年
6 邓启云;超级杂交水稻形态性状特征及其遗传规律的研究[D];湖南农业大学;2000年
7 王雪;大豆抗胞囊线虫机制及与抗性相关的差异蛋白质组学研究[D];沈阳农业大学;2009年
8 林多;番茄低温耐受性机理及遗传规律的研究[D];沈阳农业大学;2000年
9 闫世江;黄瓜耐低温性的遗传及生理生化特性的研究[D];沈阳农业大学;2008年
10 孟昭东;玉米结实习性遗传规律及其在育种中的应用[D];山东农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈湘瑜;花生组织特异表达抗黄曲霉相关基因的载体构建[D];福建农林大学;2010年
2 赵永莉;花生果、种皮特异表达基因的鉴定及其启动子的克隆[D];福建农林大学;2008年
3 张国林;花生果种皮特异表达基因及其启动子克隆[D];福建农林大学;2009年
4 田立荣;花生黄曲霉产毒抗性的遗传重组潜力及抗性机理研究[D];中国农业科学院;2009年
5 贺立红;茉莉酸甲酯对花生种子黄曲霉抗性的影响[D];华南师范大学;2002年
6 魏丽奇;花生酰基载体蛋白基因的克隆与功能分析[D];山东师范大学;2009年
7 远方;大豆抗胞囊线虫3号生理小种的抗性机制研究[D];沈阳农业大学;2001年
8 孙兵;花生抗黄曲霉相关基因的分离与表达[D];东北农业大学;2009年
9 陈晨;用AFLP技术筛选淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关分子标记[D];南京医科大学;2012年
10 国艳梅;黄瓜苦味遗传规律研究及AFLP分子标记[D];东北农业大学;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026