收藏本站
《华南师范大学》 2007年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

利用荧光共振能量转移技术研究蛋白—蛋白的相互作用

裴沂辉  
【摘要】: 凋亡在生物发育和维持正常生理活动过程中起着十分重要的作用。它参与了机体生殖、胚胎发育、免疫等生理过程,也参与了肿瘤、病毒感染等疾病的发生发展过程,并在细胞增殖、分化和衰老起着互补与平衡的作用。自1972年Kerr,Wyllie及Gurrie等提出这一概念以来,人们已逐渐认识到细胞凋亡是属于机体的生理机制和多细胞生物更新正常细胞和清除异常细胞的重要手段。因此对细胞凋亡机制的研究对人体健康和医疗具有极深远的意义。 目前对于凋亡机制的研究普遍认为有两类凋亡通路,一类是由死亡受体介导的细胞凋亡途径。如:外源性的途径是由死亡配体(如FasL、TNF-α、TRAIL)结合到细胞膜相应的死亡受体(如Fas,TNF-RI,TRAIL receptor)。另一类是不经死亡受体途径,由凋亡刺激因子直接作用于细胞内分子引发凋亡。如线粒体介导的内源凋亡途径和内质网介导的内源凋亡途径。 近年来生命科学领域出现了一种崭新技术:荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET),利用这种技术能够定时、定量、定位、无损伤检测活细胞内蛋白质与蛋白质间的相互作用。荧光共振能量转移是指两个荧光发色基团在足够靠近时,当供体分子吸收一定频率的光子后被激发到更高的电子能态,在该电子回到基态前,通过偶极子相互作用,实现了能量向邻近的受体分子转移(即发生能量共振转移)。近年来发展出了GFP多种突变体,通过引入各种点突变使发光基团的激发光谱和发射光谱均发生变化,而发出不同颜色的荧光,有黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein,YFP),青色荧光蛋白(cyan fluorescent protein,CFP)等。这些突变体使FRET方法来研究活细胞内蛋白质-蛋白质间相互作用成为可能。 目前认为细胞凋亡是细胞在各种死亡信号刺激后发生的一系列caspase瀑布式激活的主动性细胞死亡过程,并且该过程,同时伴随着多种凋亡因子的参与。 Bid是Bcl-2家族中的一个前凋亡因子。TNF-α(tumor necrosis factorα)可以通过激活caspase-8后由caspase-8切割Bid成为tBid。tBid进一步诱导Bax寡聚化并转位到线粒体,进而触发cytochrome c释放和caspase3激活,最终导致细胞凋亡。然而到目前为止,Bid和tBid在活细胞中是否能够直接和Bax发生作用仍然是一个不清楚的问题。在本研究中,我们使用了荧光共焦显微镜结合荧光共振能量转移技术和受体漂白技术来研究在TNF-α诱导的细胞凋亡过程中,Bid和Bax的动态相互作用过程。结果表明,在TNF-α处理的肺腺癌细胞(ASTC-a-1)中,全长的Bid通过瞬时的直接与Bax发生相互作用而导致Bax转位到线粒体,并且这一作用过程是发生在细胞收缩之前。接着,我们证明在TNF-α处理的ASTC-a-1和HeLa细胞中,Bid在细胞收缩之前没有发生切割,尽管细胞收缩之前caspase-8已经被激活,而且这一结果得到Western Blotting实验的进一步证明。另外,在TNF-α处理的ASTC-a-1细胞中,caspase-3激活经历了两个阶段,而Bid的切割是发生在caspase-3激活的第二个阶段。综上所述,全长的Bid在TNF-α诱导的细胞凋亡过程中激活了Bax转位并且Bid在细胞凋亡晚期发生了切割。
【学位授予单位】:华南师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:Q51-3

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 樊廷俊,夏兰,韩贻仁;线粒体与细胞凋亡[J];生物化学与生物物理学报;2001年01期
2 任会荣,钱令嘉;线粒体通透性转换孔、细胞色素C与细胞凋亡[J];生命的化学;2002年04期
3 高建芝,张建龙,王红梅,马琪,腾清蕾;脓毒症大鼠Fas-L、Caspase-3和NF-κB的表达与肝细胞凋亡的关系[J];新乡医学院学报;2004年02期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 胡林,胡刚,徐汉虹;Calpain的激活与鱼藤酮导致的细胞凋亡[J];安徽大学学报(自然科学版);2004年05期
2 陈玉培;牟崇明;季道如;但伶;龚文婷;王莉莎;;参附注射液对大鼠缺血再灌注心肌Bcl-2、Bax与c-fos基因蛋白表达的影响[J];第三军医大学学报;2006年19期
3 郭剑英;李英;潘家强;唐兆新;;线粒体通透性转换孔及其与细胞凋亡的关系[J];动物医学进展;2009年08期
4 温桂兰,项小兰,何金兰;酿酒酵母凋亡细胞的毛细管电泳行为研究[J];分析化学;2004年09期
5 樊廷俊;赵君;李凌;杨秀霞;于苗苗;王晶;;人角膜内皮细胞体外氧化损伤及黄酮抗氧化保护作用的机制[J];国际眼科杂志;2008年08期
6 田首元;刘保江;;线粒体介导细胞凋亡和心肌保护新途径[J];国外医学.麻醉学与复苏分册;2005年06期
7 孙玉宁;王升启;;以细胞凋亡通路为靶点的抗肿瘤分子治疗研究进展[J];国外医学.药学分册;2006年05期
8 胡建新;何坚;罗战利;孙兆林;梁文通;谭宗建;张红云;刘军;;相对缺血缺氧与丙酸睾酮在促进前列腺增生作用中的相互关系[J];贵州医药;2007年03期
9 胡建新;何坚;孙兆林;;Caspase-3、Bcl-2及bFGF与良性前列腺增生关系的研究进展[J];贵州医药;2007年11期
10 杨俊杰;马洪;李静;刘红;张伟同;周永正;赵鹏;;邻苯二甲酸二乙基己酯及代谢产物邻苯二酸-单-2-乙基己酯对雄性幼鼠生精细胞凋亡的影响[J];南方医科大学学报;2012年12期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 陈少贤;刘居理;刘晓颖;林秋雄;麦丽萍;朱杰宁;单志新;余细勇;杨敏;;三七总皂苷抗细胞凋亡作用与MIF/AMPK的关系研究[A];共铸医药学术新文明——2012年广东省药师周大会论文集[C];2012年
2 陈少贤;刘居理;刘晓颖;林秋雄;麦丽萍;朱杰宁;单志新;余细勇;杨敏;;三七总皂苷抗细胞凋亡作用与MIF/AMPK的关系研究[A];2011年中国药学大会暨第11届中国药师周论文集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 崔兴;从母系遗传和表观遗传学来研究肾阴虚型慢性再生障碍性贫血的发病机制[D];山东中医药大学;2011年
2 梁欣;新型Naphthalimide类衍生物B1抗肿瘤药理学作用及分子机理研究[D];华东理工大学;2012年
3 黄宜生;酸枣仁皂苷A对大鼠心肌缺血再灌注的保护作用及机制研究[D];南方医科大学;2011年
4 牛韵韵;食管癌细胞凋亡中线粒体跨膜电位和Caspase-3的作用及食管癌组织中线粒体跨膜电位特性的研究[D];郑州大学;2002年
5 陈加平;微囊藻毒素LR对大鼠毒性效应研究[D];浙江大学;2004年
6 李睿;稻麦淀粉胚乳细胞程序性死亡和淀粉质体的发生发育[D];华中农业大学;2004年
7 石德时;伪狂犬病毒Ea株gD基因转基因细胞系的构建及其人工感染仔猪的病理学[D];华中农业大学;2004年
8 胡薛英;新型鸭肝炎病毒致病特性及感染鸭肝胰细胞凋亡的研究[D];中国农业大学;2005年
9 范谦;硝酸甘油对缺血/再灌注心脏的潜在威胁[D];第四军医大学;2005年
10 张祖新;玉米CMS-S核恢复基因及玉米对淹水胁迫响应基因的功能分析[D];华中农业大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 田智谋;肥胖对大鼠生殖细胞线粒体凋亡途径的影响[D];山西医科大学;2011年
2 冯红林;迁飞前后麦长管蚜(Macrosiphum avenae Fabricius)飞行肌细胞凋亡相关基因的筛选[D];吉林大学;2011年
3 赵涛;8周有氧及间歇运动对心梗大鼠心肌梗死面积、血流动力学及心肌Bax、Bcl-2和Caspase-3表达的作用研究[D];陕西师范大学;2011年
4 李净兵;苯巴比妥对大鼠额叶、顶叶、小脑神经元及神经胶质细胞凋亡的影响[D];河北医科大学;2011年
5 刘涛;应激诱导对牛卵母细胞成熟和凋亡的影响及金属硫蛋白基因的初步研究[D];中国农业科学院;2011年
6 周美玲;低氧预处理增强骨髓间充质干细胞对心肌细胞凋亡的保护作用[D];安徽医科大学;2011年
7 边海波;miR-451增加NSCLC细胞系A549对顺铂敏感性的研究[D];南京医科大学;2011年
8 张焕英;一种萘酰亚胺类衍生物7c诱导HeLa细胞凋亡的分子作用机理研究[D];华东理工大学;2011年
9 郭德伟;罂粟碱在兔蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛中的作用[D];中南大学;2011年
10 张金刚;酒精诱导小鼠生精细胞的凋亡及其对survivin和caspase-3表达的影响[D];天津医科大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 吕琦,金大地,金丽娟;多发性创伤后巨噬细胞吞噬凋亡白细胞的功能变化[J];中华创伤杂志;1999年01期
2 姚咏明,盛志勇;脓毒症研究的若干新动态[J];中国危重病急救医学;2000年06期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈靠山;梁厚果;张承烈;杜新华;;外源ABA影响生物膜特性的两个证据[J];科学通报;1993年24期
2 邵海军;李敬远;吴长毅;曾因明;;线粒体通透性增高过程中新的参与者[J];中国生物化学与分子生物学报;2007年04期
3 王文文;邓毛程;;Bcl-2、Bax及Bid与细胞周期阻滞及凋亡调控的关系[J];广东轻工职业技术学院学报;2009年03期
4 王健;;疱疹病毒诱导的凋亡及其机制[J];国外医学(微生物学分册);2001年02期
5 宓容钦,李锦树,王洪春;生物膜组分对膜功能和膜脂相变的调控 Ⅰ.吐温表面活性剂对玉米根端线粒体ATP酶活力的影响[J];Acta Biochimica et Biophysica Sinica;1981年03期
6 刘志;郑军;;Bcl-2家族蛋白及其在细胞凋亡中的作用[J];生命的化学;2007年01期
7 梁伟伦;黄慧玲;武俏丽;王辰;张文治;苏心;只达石;;α-生育酚对脑皮层神经元线粒体的保护作用[J];中国比较医学杂志;2007年10期
8 宋佳兴;邢达;魏言春;汪献旺;;环氧化酶-2对肿瘤细胞的作用机理研究[J];激光生物学报;2008年06期
9 单长民,李娟;线粒体膜的酶蛋白质及其转运的分子遗传学研究[J];国外医学.遗传学分册;1996年05期
10 柴勇;刘丹如;;HIV vpr蛋白诱导细胞凋亡的线粒体途径研究进展[J];包头医学院学报;2006年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 裴沂辉;邢达;陈同生;高学娟;刘镭;;实时监测BID与BAX在TNF-α诱导的细胞凋亡中的相互作用[A];中国光学学会2006年学术大会论文摘要集[C];2006年
2 刘镭;邢达;裴沂辉;陈同生;高学娟;;利用FRET技术实时检测顺氯氨铂诱导的细胞凋亡中Calpain介导的Bid切割[A];中国光学学会2006年学术大会论文摘要集[C];2006年
3 张琳;;线粒体膜间隙促凋亡因子与运动心肌细胞凋亡[A];2008年神经内分泌暨神经免疫内分泌学术研讨会论文摘要汇编[C];2008年
4 刘婕;张晓坤;曾锦章;;乙酰紫草素及其衍生物调节Nur77介导的凋亡途径[A];2008年中国病理生理学会第十一届肿瘤和第十二届免疫专业委员会学术会议论文集[C];2008年
5 张太翔;梁俊发;孙斌;;隐性乳房炎奶牛泌乳期bax凋亡因子免疫组化检测[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(上册)[C];2010年
6 陶乐天;;利用FRET钙离子指示剂,绘制斑马鱼神经系统的功能网络[A];2010·第一届斑马鱼学术研讨会论文摘要集[C];2010年
7 付长亮;佟春芳;王曼柳;高宇欣;龙勉;;整合素-ICAM-1相互作用的二维反应动力学研究[A];第九届全国生物力学学术会议论文汇编[C];2009年
8 李正强;王雪丽;吴雷;;一种新的阳离子水溶性卟啉与DNA之间相互作用的研究[A];第十次中国生物物理学术大会论文摘要集[C];2006年
9 胡新根;陈帆;方盈盈;朱玉清;余生;;DMSO与小牛胸腺DNA相互作用的DSC研究[A];第五届全国化学生物学学术会议论文摘要集[C];2007年
10 田志敏;钱七虎;吴步旭;;大压力爆炸动载作用下地下复合圆形结构研究[A];钱七虎院士论文选集[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 罗青;《ChinaBidding商务管理数据库》企业版光盘推出[N];国际商报;2002年
2 郭信麟;内外市场相互作用 港股波动难免[N];中国证券报;2007年
3 吴阿仑;eBay的恶梦[N];深圳商报;2000年
4 ;中西药相互作用的机理(一)[N];农村医药报(汉);2006年
5 ;中西药相互作用的机理(二)[N];农村医药报(汉);2006年
6 睢阳区路河乡第一初级中学 吴卫星;谈谈经济与文化、道德的相互作用[N];商丘日报;2010年
7 武都区汉王中学教师 张登云;如何发挥课堂教学中的相互作用[N];陇南日报;2007年
8 记者  董映璧;日精确计算出核子之间的强排斥相互作用[N];科技日报;2007年
9 肖丽;草药+NSAIDs有潜在危险[N];健康报;2006年
10 三明市列东中学 余雪璐;电荷或磁极间相互作用演示托架[N];福建科技报;2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 田昕;线粒体凋亡途径参与蟾蜍灵诱导的人类白血病细胞HL-60凋亡[D];中国医科大学;2005年
2 李杨;桦木醇诱导的人源癌细胞凋亡过程中Bax、Bak以及Caspase-9重要调控作用的研究[D];吉林大学;2011年
3 邱爽;NMDA受体亚单位装配、运输以及膜表面表达的分子机制[D];浙江大学;2007年
4 刘晓梅;氯化镉诱导SMMC-7721细胞线粒体损伤及细胞凋亡的实验研究[D];吉林大学;2007年
5 刘健;萘酰亚胺类化合物诱导肿瘤细胞凋亡的机制[D];延边大学;2008年
6 李晶华;人参皂苷Rh2与Etoposide协同诱导Hela细胞凋亡的机制研究[D];吉林大学;2008年
7 刘双;αB-晶状体蛋白抗细胞凋亡的机制研究[D];中南大学;2005年
8 宋凯;基于上转换纳米晶FRET的生物检测和PDT应用研究[D];中国科学院研究生院(长春光学精密机械与物理研究所);2010年
9 杜志强;甲壳类WAP结构域蛋白及Bax抑制因子1样蛋白的表达与功能研究[D];山东大学;2010年
10 陈艳;光晶格中玻色爱因斯坦凝聚体动力学特性的研究[D];兰州大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 裴沂辉;利用荧光共振能量转移技术研究蛋白—蛋白的相互作用[D];华南师范大学;2007年
2 于欣欣;大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞凋亡与Bcl-2和Bax基因表达的关系[D];昆明医学院;2008年
3 赵冰;海葵毒素对神经胶质瘤细胞凋亡诱导作用及机制研究[D];吉林大学;2007年
4 郝卫红;持续输注瑞芬太尼对犬心肌缺血再灌注损伤时心肌细胞凋亡的影响[D];山西医科大学;2009年
5 陈妙娟;利用荧光共振能量转移技术研究细胞凋亡分子机制[D];华南师范大学;2007年
6 陈杨杨;慢性高原病骨髓有核红细胞凋亡及Bcl-xl、Bax、Bid表达研究[D];青海大学;2012年
7 王东强;四逆散的保肝作用及机制研究[D];天津中医学院;2005年
8 赵伟;Ki-67、Bax和p73在肝门部胆管癌中的表达和意义[D];青岛大学;2006年
9 韦懿桐;大鼠带瓣血管冻存时间对其活性与Bax、Bcl-2基因表达的影响[D];广西医科大学;2010年
10 刘阳;肝细胞生长因子对受损面神经神经元凋亡bcl-2,Bax表达影响的试验研究[D];重庆医科大学;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026