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《海南大学》 2015年
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巴西橡胶树HbMADS4的克隆及功能分析

魏利然  
【摘要】:橡胶树自根幼态无性系是以橡胶树花药、内珠被等为外植体通过体细胞体胚发生途径获得的一种新型种植材料。试验表明自根幼态无性系的产量可以提高20%-42%。目前关于橡胶树自根幼态无性系的高产机制尚不清楚。以往主要的研究集中在形态学和生理学等方面,如幼态无性系生长速度快、乳管列数目增多及排胶和产胶性能好等,但其高产的分子机制还鲜有报道。 本课题组前期通过抑制缩减杂交和双向电泳等技术发现在自根幼态无性系和老态无性系的胶乳中存在一些差异表达基因和蛋白,这些差异表达的基因和蛋白可能是橡胶树自根幼态无性系和供体产量差异产生的原因。为了深入研究相关差异表达基因的功能,我们对相关基因进行了克隆和相关研究,旨在进一步阐明橡胶树自根幼态无性系高产的分子机制。 通过RACE方法克隆了一个橡胶树自根幼态无性系和老态无性系的胶乳中差异表达的MADS-box转录因子基因(命名为HbMADS4), HbMADS4含有一个633bp的阅读框,编码的蛋白质含有230个氨基酸。推导的HbMADS4在N端含有1个典型的MADS-box和1个K-box结构域。亚细胞定位分析结果显示HbMADS4具有核定位特性。定量PCR结果显示在幼态或者老态无性系胶乳中HbMADS4的表达都显著高于其它组织中的表达,达到几十倍的差距。构建了原核表达载体并在大肠杆菌表达系统中获得]HbMADS4融合蛋白,Western-blot验证表达蛋白为目的蛋白。酵母单杂交结果表明HbMADS4与HbSRPP启动子结合。瞬时表达和转基因烟草表明HbMADS4对HbSRPP启动子具有负调控作用。推测HbMADS4在橡胶树中可能是天然橡胶生物合成过程中的1个负调控因子。
【学位授予单位】:海南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:S794.1;Q943.2

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