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《海南大学》 2016年
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红树林区团水虱肠道微生物多样性及可培养微生物抑菌活性研究

胡亚强  
【摘要】:尽管人类对抗生素的使用已采取了各项限制性措施,但因其在全世界范围的广泛普及,微生物的抗药性正逐步显现。近年来不断涌现的群体耐药性事件和超级细菌案例,令人触目惊心,寻找全新的抑菌药物已迫在眉睫。红树林区团水虱肠道微生物因其独特生境,成为挖掘药用新型菌株、开发抑菌药物及前导化合物的重要来源。本论文通过Misq测序平台和生物信息学分析手段,获得红树林区团水虱肠道微生物多样性信息,结合培养法分离得到团水虱肠道中具有显著抑菌活性的目的菌株,并对其进行形态学和分子生物学鉴定、生理生化鉴定以及抗菌活性研究。全文主要包括两个部分:1.16S rDNA高通量测序结果表明,三个样品共产生794个OTU,幼体、稚体、成体分别包含156个、686个和646个。OUT的聚类分析结果显示,团水虱共涵盖25个细菌门类,其中变形菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)和梭菌门(Fusobacteria)为优势类群,变形菌门为三者的共同优势菌门,幼体、稚体、成体分别含51.7%,55.1%,51.6%;幼体的第二优势菌门为梭菌门(37.8%),成体和稚体的第二优势菌门为拟杆菌门(38.57%和30.21%),其余菌门在三者中相对含量较低;在三类样品的属水平上,发现具强抑菌活性的芽孢杆菌属(Bacillus)和赤杆菌属(Erythrobacter)存在;幼体、稚体、成体的Chao指数分别为190.50、697.16和66.12,Shannon指数分别为2.12、4.69和4.58,菌群多样性指数、稀释曲线、PCA分析和聚类树结果显示,幼体菌群结构与成体和稚体差异显著;丰富度和均匀度为稚体成体幼体,且幼体明显低于前两者。2.共附生微生物的抑菌活性筛选及分离鉴定:从团水虱肠道内分离得到126株菌株,以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和黑曲霉为指示菌,采用琼脂块倒置法进行初筛、滤纸片法复筛,共得到具抑菌活性菌株8株;用青霉素钠、氨苄西林钠和制菌霉素作对照抗生素,对8株菌株进行抗生素效价测定,结果显示,全部菌株对金黄色葡萄球菌有强抗菌活力,6株至少对两种或以上菌株有较强抗菌活力,其中编号为H2-1和H2-8菌株对四种指示菌皆有强抑菌活性,对青霉素钠、氨比西林钠以及灰黄霉素的相对效价分别为0.698U/ml和0.650U/ml、0.713U/ml和0.766U/ml、4.593U/ml和3.672U/ml:生理生化实验和形态学鉴定,初步判定8种菌中包含真菌2种、细菌6种,H2-1和H2-8菌株为同一种革兰氏阳性菌:分子生物学手段对两个菌株作种属最终鉴定,测得其实际长度为1418bp,确定二者均为枯草芽孢杆菌。研究首次揭示了团水虱肠道微生物组成信息,并获得高抑菌活性目的菌株,为特色海洋药用微生物及其天然产物的开发提供基础数据;从红树林寄生动物肠道中首次分离得到具抑菌活性菌株,这对于简化红树林药用内生菌的筛选及活性物质的挖掘有着重要理论和实际意义。
【学位授予单位】:海南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R96;R915

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