收藏本站
《海南大学》 2018年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

布鲁氏菌fliC影响巨噬细胞基因表达谱的初步研究

聂鑫  
【摘要】:布鲁氏菌病是在世界广泛流行的传染性人畜共患病。布鲁氏菌是其致病菌,革兰氏染色为阴性,属于胞内菌。鞭毛蛋白FliC是布鲁氏菌鞭毛丝的主要组成部分,参与细菌对宿主的致病过程,是重要的病原相关分子模式之一(PAMPs)。有研究将缺失fliC基因后的布鲁氏菌通过腹腔注射感染小鼠,发现其毒力增强。但fliC缺失株感染后引发宿主细胞基因表达的变化机制还有待研究。本研究利用PCR技术及T4 DNA连接酶,通过重叠延伸PCR反应及T4 DNA连接酶连接平末端,成功构建同源重组质粒pGEM-7Zf(+)-ΔfliC。然后利用电转化手段将该重组质粒转化到布鲁氏菌M5-90株,通过PCR验证及连续传代确定其遗传稳定性,最终成功获得M5-90-ΔfliC基因缺失株。将布鲁氏菌M5-90与布鲁氏菌M5-90ΔfliC缺失株分别感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,TRIzol法提取总RNA。应用miRNA Microarray-Single芯片检测miRNAs表达谱变化,通过Agilent芯片检测基因表达谱变化。芯片实验结果发现了 15个差异倍数≥2的miRNAs及388个差异倍数≥2的mRNAs。经qRT-PCR验证后,发现10个下调的miRNAs表达量变化与芯片结果一致,分别为:mmu-miR-6965-3p、mmu-miR-328-5p、mmu-miR-7683-3p、mmu-miR-7072-5p、mmu-miR-691、mmu-miR-3070-2-3p、mmu-miR-7056-5p、mmu-miR-1907、mmu-miR-486a-3p、mmu-miR-409-3p。利用TargetScan和miRDB数据库对差异miRNA及差异mRNA表达谱进行联合分析,发现39个靶基因,再经qRT-PCR验证后,确认38个靶基因表达量与芯片结果一致,并且最终预测得到80对miRNA与靶基因的对应关系。之后选取与免疫、细胞凋亡相关基因:白细胞介素17受体Il17ra、卷曲蛋白Fzd7和促凋亡蛋白Bmf基因为研究对象。根据预测的miRNA-mRNA关系,利用miRNAmimics转染RAW264.7,通过qRT-PCR验证确定miRNAs与靶基因的对应关系,结果初步得到miRNA-预测靶基因的对应关系mmu-miR-7056-5p与Bmf、mmu-miR-328-5p与Bmf、mmu-miR-691 与Il17ra、mmu-miR-328-5p 与Fzd7。本研究为发现fliC在布鲁氏菌感染RAW264.7过程中的作用提供理论支持。
【学位授予单位】:海南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:R392

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张家敏;张小贤;王志刚;;fliC基因在快速分型鉴定伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌的应用[J];中国卫生检验杂志;2012年08期
2 王鹤;梁宏儒;胡旭;赵达;姜东君;尹辉;高佳滨;陈为宏;崔玉东;朱战波;;鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白FliC的原核表达及纯化[J];黑龙江八一农垦大学学报;2012年05期
3 邓显文;谢芝勋;刘加波;谢志勤;庞耀珊;谢丽基;范晴;罗思思;;肠炎沙门菌fliC蛋白的表达及ELISA检测方法的建立[J];动物医学进展;2013年06期
4 万崇华,方积乾,张灿珍,汤学良,罗艳敏,林颖;FLIC量表用于肝癌患者生命质量测定的对比研究[J];中国行为医学科学;2000年05期
5 田文静;廖成水;王晓利;郁川;余祖华;张梦珂;李婧;张春杰;李银聚;程相朝;;鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FliC的表达纯化及其生物学特性的研究[J];中国兽医科学;2017年07期
6 李任峰;田香勤;何启盖;王三虎;郑玉姝;胡建和;赵坤;;猪传染性胸膜肺炎放线杆菌flic基因的原核表达与生物学活性分析[J];生物技术通报;2009年02期
7 李阳;杨康;张宝江;苏艳;;马流产沙门氏菌新疆分离株FliC基因的克隆及分子特征分析[J];中国畜牧兽医;2014年11期
8 李任峰;田香勤;何启盖;王自良;赵坤;李学斌;王三虎;;猪传染性胸膜肺炎放线杆菌flic基因的克隆表达及生物信息学分析[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2009年10期
9 朱春红;董立伟;张江英;谢静;李芙蓉;陆广富;朱国强;;鞭毛素fliC基因的缺失对肠炎沙门氏菌生物膜形成的影响[J];中国预防兽医学报;2016年04期
10 陈明;徐幸莲;周光宏;汤晓艳;袁飞;陈爱亮;;鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白FliC的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备[J];食品科学;2013年09期
中国重要会议论文全文数据库 前6条
1 温馨;郝凤奇;杨桂连;王春凤;;鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白flic基因的克隆及在乳酸菌中的表达[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集(下册)[C];2010年
2 田文静;廖成水;王晓利;张春杰;李银聚;程相朝;;鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FliC的表达纯化及其生物学特性的研究[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第九次全国会员代表大会暨第十七次全国学术研讨会论文集[C];2017年
3 孟霞;董立伟;张江英;王建业;朱礼倩;朱国强;;肠炎沙门氏菌fliC基因突变株的构建及致病相关功能的分析[A];中国畜牧兽医学会2014年学术年会论文集[C];2014年
4 田文静;廖成水;郁川;余祖华;张梦珂;李婧;张春杰;程相朝;WANG Xiao-li;LI Yin-ju;;鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FliC的表达纯化及其生物学特性的研究[A];中国兽医病理学2017年学术研讨会暨兽医病理学分会第九次全国会员代表大会论文集[C];2017年
5 朱文冠;郭霄峰;;大肠杆菌O_(157):H_7 rfbE基因和fliC基因的克隆与序列分析[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(下)[C];2003年
6 潘中勉;王俊;周锐;刘文婷;徐文俊;彭健;;猪源产肠毒素大肠杆菌鞭毛蛋白的表达及鞭毛参与黏附宿主细胞的研究[A];第七届中国饲料营养学术研讨会论文集[C];2014年
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 许彦梅;肠出血性大肠杆菌O157:H7 EDL933基因组岛OI-172的功能研究[D];中国疾病预防控制中心;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 聂鑫;布鲁氏菌fliC影响巨噬细胞基因表达谱的初步研究[D];海南大学;2018年
2 董立伟;肠炎沙门氏菌鞭毛素fliC基因缺失突变株的构建及相关功能性分析[D];扬州大学;2014年
3 史冰田;肠炎沙门氏菌FliC蛋白对鸡PBMCs分泌细胞因子的影响研究[D];中国农业科学院;2016年
4 包琦锋;鞭毛蛋白FliC突变体作为HPV L2多肽抗原载体的初步研究[D];北京协和医学院;2013年
5 陈明;鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白FliC的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备[D];南京农业大学;2012年
6 王鹤;停乳链球菌GapC蛋白与鼠伤寒沙门氏菌FliC蛋白的融合表达及免疫原性研究[D];黑龙江八一农垦大学;2012年
7 杨康;马流产沙门氏菌新疆分离株鉴定免疫及其FliC蛋白增强SeM蛋白及gD蛋白抗体应答的研究[D];新疆农业大学;2016年
8 于波;类鼻疽杆菌鞭毛蛋白FliC与肠出血性大肠杆菌蛋白EspA的融合表达及其免疫学性质研究[D];第三军医大学;2013年
9 王高玲;利用酵母表面展示技术对肠炎沙门氏菌FliC蛋白在鸡体内抗原特性的研究[D];中国农业科学院;2015年
10 张爱萍;西瓜噬酸菌σ~(28)因子fliA及鞭毛素基因fliC的功能研究[D];中国农业科学院;2017年
中国知网广告投放
相关机构
>中国农业科学院
>海南大学
相关作者
>张爱萍 >聂鑫
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026