收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

多杀性巴氏杆菌感染山羊上皮细胞的初步分析及recN基因的表达研究

章泸尹  
【摘要】:多杀性巴氏杆菌(P.multocida,Pm)病是一种常见的疾病,它潜伏期短,传播速度快,致死率高,多呈暴发性流行,经常直接导致畜牧养殖业相当大的金额损失。尽管从我们认识Pm至今经过了135年,但我们对其DNA修复和重组功能和细菌黏附过程仍没有明确的认识。本文为更进一步了解Pm是如何在宿主细胞表面的发生粘附并导致宿主致病。以P.multocida HN01为研究对象,选取其自然宿主的山羊支气管上皮细胞建立合适的细胞感染模型,通过高通量测序技术筛选出差异表达基因(DEGs)并进行验证。本研究首先确定感染复数MOI=100,感染时间选取4h和6h的方法,建立了P.multocida HN01菌株感染羊上皮细胞模型。并提取上述感染组的总RNA展开转录组和mi RNA测序,借助GO与KEGG分析对DEGs展开筛选,从细菌黏附方向研究DEGs所在通路并进行验证。1、m RNA测序结果。对照组得到43938063条有效读长而处理组4h和6h分别有35452136和44565947条有效读长,通过对比筛选出DEGs:D_T4h vs Ctrl组中有29个基因上调,88个基因下调;D_T 6 h vs对照组组中有238个基因上调,261个基因下调。借助GO、KEGG富集分析,共有5186个基因被富集到KEGG代谢途径中的310个通路里;借助STEM软件分析发现有231个基因表达呈现先缓慢后快速降低状态,157个基因表达呈现先缓慢后快速增长状态。挑选其中和细菌黏附相关的3个DEGs:ITGA3、TMSB10和RHOC经过q RT-PCR检验结果相同。2、mi RNA测序结果。通过对比筛选出DEGs:D_T 4 h vs Ctrl组里上调基因160个而下调130个。D_T 6 hvs Ctrl组里上调基因213个而下调125个。选取q RT-PCR验证正确的DEGs:ITGA3、TMSB10和RHOC继续分析,借助靶基因预测和STEM分析中的mi RNA取交集的9个mi RNA展开q RT-PCR验证,除PC-3p-19778_398和oan-mi R-1386_L+1_1其他结论chi-mi R-128-3p、PC-3p-4951_2010、chi-mi R-103-5p_R-7、PC-3p-9125_1006、bta-mi R-2285i_R+1_1SS6CT、chi-mi R-106b-5p和bta-mi R-138与预期相同。为了探究rec N(基因重组以及调节细胞对DNA损伤的反应所需的基因)基因的功能,本研究构建p ET-28a(+)-rec N重组质粒并通过转化到E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,对rec N展开相应的生信分析。结果表明,本实验最终诱导表达66.94ku的rec N蛋白。经分析,rec N蛋白的分子式为C_(7864)H_(13009)N_(2463)O_(2965)S_(377),消光数为47410,理论等电点(PI)为5.61呈酸性;总平均亲水性(GRAVY)是0.571,与试验表达的包涵体蛋白性质相同同为疏水性蛋白;不稳定系数为42.66,属于不稳定蛋白;二级结构预测主要以α-螺旋(Hh,64.87%)及无规则卷曲(Cc,21.00%)为主;经疏水性分析,预测该蛋白有3个高疏水性区域,9个高亲水性区域;本试验为探究Pm的rec N基因的功能提供了一定的理论依据。综上,本文从蛋白水平对Pm的rec N基因研究为多杀性巴氏杆菌病疫苗的制备和巴氏杆菌的种间鉴定提供新的思路。从转录组水平的研究表明Pm的细菌黏附机制由多基因和mi RNAs同时调控。显著富集在肌动蛋白细胞骨架的调节和粘着斑的先上调后下调差异基因可能为细菌侵入细胞提供物质基础,而显著富集在肌动蛋白细胞骨架的调节的下调差异基因可能加强和促进细菌和基质的黏附过程;同时,这些差异基因会受到相应mi RNAs的调控,通过两者之间的复杂相互作用,从而最终导致疾病的发生。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前19条
1 谢倩茹;姜鹏;彭清洁;赖金伦;刘玉辉;童胜涛;邵咏旋;陈颖钰;胡长敏;郭爱珍;;牛溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌A型、B型的比较鉴定研究[J];中国奶牛;2015年14期
2 郝成武;何海;韩瑞;贺笋;;三种检测多杀性巴氏杆菌毒素灭活方法的研究[J];黑龙江畜牧兽医;2018年15期
3 张孝全,刘晨光;暴发多杀性巴氏杆菌(A型)病的诊断[J];中国兽医杂志;1985年07期
4 李国攀;荣俊;;多杀性巴氏杆菌同源重组质粒电转化条件研究[J];长江大学学报(自科版);2015年09期
5 贾小梅;倪莉;罗洪艳;丁红雷;王豪举;;猪多杀性巴氏杆菌检测技术研究进展[J];中国生物工程杂志;2020年08期
6 李军朝;邸涛;陈静;刘慧谋;张信军;王彦红;;1株鹦鹉源多杀性巴氏杆菌的鉴定[J];中国兽医杂志;2016年07期
7 熊萍萍;荣俊;;多杀性巴氏杆菌C48-16电转化条件的研究[J];长江大学学报(自科版)农学卷;2007年04期
8 李国攀;熊萍萍;荣俊;;多杀性巴氏杆菌外源基因表达元件的构建及其序列分析[J];湖北农业科学;2015年19期
9 吴范庚;我国多杀性巴氏杆菌血清型综述[J];中国兽医杂志;1993年01期
10 张显浩;陈敏鸿;李冰;蔡佳跃;黎云裕;裴仉福;陈瑞爱;贺东生;;猪A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析[J];黑龙江畜牧兽医;2016年02期
11 四郎曲珍;;多杀性巴氏杆菌相关毒力因子的研究进展[J];中国畜牧兽医文摘;2015年09期
12 方仁东;雷桂花;杜慧慧;彭远义;;多杀性巴氏杆菌毒素的研究进展[J];中国兽医学报;2016年11期
13 余宏杰;;牛多杀性巴氏杆菌外膜蛋白的研究进展[J];当代畜牧;2015年15期
14 冀梦瑶;于秀剑;杜万年;史秋梅;吴同垒;;多杀性巴氏杆菌脂多糖的结构和作用研究进展[J];河北科技师范学院学报;2020年02期
15 谢倩茹;童胜涛;邵咏旋;姜鹏;彭清洁;陈颖钰;胡长敏;郭爱珍;;某牛场奶牛A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定[J];中国畜牧兽医;2016年03期
16 唐先春,吴斌,索绪峰,王大林,陈焕春,尹争艳;猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究[J];畜牧兽医学报;2005年06期
17 崔爱莲;吴庆侠;董海龙;朱洪云;;西藏山南地区牦牛多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药敏试验[J];畜牧与兽医;2016年07期
18 谢倩茹;陈颖钰;胡长敏;郭爱珍;;牛多杀性巴氏杆菌疫苗研究进展[J];中国奶牛;2015年15期
19 卢顺;向敏;吴斌;赵战勤;汤细彪;但汉并;张建民;何华;陈焕春;;检测多杀性巴氏杆菌毒素抗体的单抗竞争ELISA方法的建立[J];农业生物技术学报;2008年04期
中国重要会议论文全文数据库 前20条
1 刘德碧;赵扬扬;季露;熊青山;丁壮;赵凤琴;付利芝;曹政;;牛多杀性巴氏杆菌A型、B型二价灭活苗的研究[A];第五届全国人畜共患病学术研讨会论文摘要集[C];2017年
2 余旭平;朱军莉;何世成;王丽辉;牛冬;阮辉;;多杀性巴氏杆菌跨膜蛋白基因片段的克隆与分析[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(下)[C];2003年
3 曹长福;黄显会;丁焕中;孙美珍;卢燕;曾庆林;刘伟;曾振灵;;马波沙星在牛感染多杀性巴氏杆菌组织笼模型中的药动/药效学研究[A];中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会论文集[C];2015年
4 彭远义;;牛源多杀性巴氏杆菌A型相关研究[A];第四届全国牛病防制及产业发展大会论文集[C];2012年
5 朱伟峰;陈露;魏后军;仇汝龙;范志宇;胡波;陈萌萌;徐为中;薛家宾;王芳;;巴氏杆菌利用宿主分子Plg致病的初步研究[A];第九届(2019)中国兔业发展大会论文集[C];2019年
6 Du huihui;;Two novel cross-protective antigens for bovine Pasteurella multocida[A];第十一届全国免疫学学术大会摘要汇编[C];2016年
7 王晓丽;王永明;朱万光;李世成;;兔病毒性出血症与兔多杀性巴氏杆菌二联蜂胶灭活疫苗的研制[A];中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会(第三届中国兽药大会学术论坛)论文集[C];2010年
8 罗琼;李力施;林志雄;;从澳大利亚进口病死种羊中分离出多杀性巴氏杆菌[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(下)[C];2003年
9 蓝玮璇;江礼捷;肖霞;王志强;;氟苯尼考对多杀性巴氏杆菌的药效学研究[A];中国毒理学会兽医毒理学委员会与中国畜牧兽医学会兽医食品卫生学分会联合学术研讨会暨中国毒理学会兽医毒理学委员会第5次全国会员代表大会会议论文集[C];2017年
10 赵战勤;李静;薛云;刘志军;王乐;廖成水;龙塔;;猪源多杀性巴氏杆菌的病原流行病学及其毒力特性研究[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会2016年学术研讨会论文集[C];2016年
11 梅朱园;邬琴;柴迎锦;顾晓晓;陶乔孝慈;韩猛立;黄新;周霞;张星星;钟发刚;;犊牛肺炎多杀性巴氏杆菌荚膜血清型和基因型的分析研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第六次学术研讨会论文集[C];2018年
12 常春龙;王士霞;翟军军;倪宏波;;牛多杀性巴氏杆菌菌影疫苗的制备及其免疫效力分析[A];中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会论文集[C];2016年
13 程龙飞;许利娜;林建生;陈红梅;仇微红;施少华;叶和佳;胡秀美;梁昭平;黄瑜;;福建及邻近省份禽源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会论文集[C];2015年
14 姜轩;刘梦月;孙英峰;马吉飞;赵瑞利;张奥;付超;石青青;;猪源A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及小鼠致病性分析[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会第二十三次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第三次学术研讨会、中国兽医病理学家第三次学术研讨会论文集[C];2018年
15 王蕾;邬琴;柴迎锦;顾晓晓;黄新;吴桐忠;钟发刚;韩猛立;李劼;周霞;张星星;;三株羊呼吸道感染多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及毒力基因检测[A];中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十三次全国学术研讨会论文集[C];2018年
16 胡荣斌;包世俊;邢小勇;杨红霞;陈文龙;;一株猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药物敏感性的筛选[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第六次学术研讨会论文集[C];2018年
17 Lei Guihua;Wu Rui;Jiang Bing;Nie Kui;Peng Yuanyi;Fang Rendong;;Involvement of NLRP3 inflammasome activation in macrophages infected with Pasteurella multocida[A];第十二届全国免疫学学术大会壁报交流集[C];2017年
18 唐先春;吴斌;索绪峰;王大林;陈焕春;尹争艳;;猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
19 孟薇薇;孙佳芝;王永明;王晓丽;;一例獭兔多杀性巴氏杆菌与魏氏梭菌混合感染的诊治[A];第八届(2018)兔业发展大会论文集[C];2018年
20 毛跟年;许牡丹;杨秀芳;;鸽源多杀性巴氏杆菌血清学鉴定[A];西部大开发 科教先行与可持续发展——中国科协2000年学术年会文集[C];2000年
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 肖国生;胸膜肺炎放线杆菌、猪肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌基因芯片检测与分型研究[D];四川农业大学;2006年
2 郭东春;多杀性巴氏杆菌兔体内差异表达基因及其突变株构建的研究[D];中国农业科学院;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前20条
1 章泸尹;多杀性巴氏杆菌感染山羊上皮细胞的初步分析及recN基因的表达研究[D];海南大学;2020年
2 卢顺;多杀性巴氏杆菌毒素单克隆抗体的制备及初步应用[D];华中农业大学;2008年
3 魏洁;检测产毒多杀性巴氏杆菌毒素抗体乳胶凝集试验方法的研究[D];华中农业大学;2005年
4 徐朋朋;鸭源多杀性巴氏杆菌分离鉴定及感染雏鸭动态病理学观察[D];河南科技大学;2011年
5 段龙川;产毒素多杀性巴氏杆菌重组沙门氏菌基因工程疫苗的研究[D];华中农业大学;2010年
6 常春龙;牛多杀性巴氏杆菌菌影疫苗的制备及其免疫效力分析[D];黑龙江八一农垦大学;2016年
7 吴勋;猪组织笼模型中头孢喹肟对多杀性巴氏杆菌的药动/药效同步模型的研究[D];华南农业大学;2017年
8 周巧仪;泰拉霉素对猪多杀性巴氏杆菌的半体内药动/药效同步模型研究[D];华南农业大学;2017年
9 赵光夫;L-抗坏血酸影响牛源A型多杀性巴氏杆菌感染的研究[D];西南大学;2019年
10 高艳;藏药复方翼草景香提取物对多杀性巴氏杆菌的药效和毒理学研究[D];甘肃农业大学;2019年
11 黄海峰;多杀性巴氏杆菌诊断方法的初步建立[D];海南大学;2019年
12 马凯;兔多杀性巴氏杆菌间接ELISA检测方法的建立及初步应用[D];南京农业大学;2017年
13 朱利霞;河北省肉牛常见呼吸道致病菌的分离鉴定及多重PCR检测方法研究[D];河北科技师范学院;2019年
14 雷桂花;牛源A型多杀性巴氏杆菌强弱毒株诱导IL-1β成熟与分泌差异的研究[D];西南大学;2018年
15 伍晨露;牛源多杀性巴氏杆菌感染小鼠肺组织的转录组学分析[D];西南大学;2018年
16 王蕾;羊呼吸道感染主要细菌性病原多重PCR诊断方法的建立与应用[D];石河子大学;2018年
17 李霄阳;牛源多杀性巴氏杆菌A、B型菌株转录组学分析、优势抗原筛选及间接ELISA方法建立[D];江西农业大学;2018年
18 王羽;牛源多杀性巴氏杆菌转录组学分析及DnaJ蛋白表达与免疫原性分析[D];吉林农业大学;2018年
19 梁禄;牛源A型多杀性巴氏杆菌的生物学特性研究及致病基因检测[D];内蒙古农业大学;2018年
20 朱玲;牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌疫苗候选株的筛选[D];石河子大学;2018年
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 山西太原神龙应用技术有限公司 李宝丽;猪多杀性巴氏杆菌感染的救治[N];中国畜牧报;2002年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978