拟南芥CBF3基因转化巴西橡胶树的研究

【摘要】：本研究以巴西橡胶热研7-33-97为实验材料,以调控植物抗寒性的CBF3基因为目的基因,通过农杆菌介导法和基因枪法分别转化热研7-33-97花药愈伤组织进行巴西橡胶树的转基因研究。通过农杆菌介导转化法,研究选择转化材料、侵染后共培养时间、共培养温度、抑菌抗生素浓度等对遗传转化的影响。结果表明：选择培养30天的花药愈伤组织,侵染3min后,在20℃共培养2d,再转至添加200mg／L Cef的培养基上,可有效的控制农杆菌污染,并且愈伤组织在侵染后可继续生长。但是由于橡胶花药愈伤组织本身的成胚率十分低,加之农杆菌的侵染以及添加Cef,对愈伤组织的损伤较大,愈伤组织很难形成正常的胚状体。研究了基因枪法转化热研7-33-97花药愈伤组织,并通过25mg／L Hyg的筛选,最终获得3株抗性苗。经过提取其叶片DNA进行PCR检测,其中一株呈阳性。该株转化苗经过扩繁4代后得到29株苗,再次提取叶片DNA进行PCR检测,结果仍然呈阳性,初步证明CBF3基因已整合到橡胶基因组中。最后用BamHI和HindⅢ分别对其DNA进行单酶切,然后进行Southern印迹杂交,结果有明显的杂交信号,而非转化的再生植株无Southern杂交信号,说明目的基因CBF3已成功整合到橡胶树的基因组中,并可稳定遗传。

【学位授予单位】：海南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：S794.1

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3	吴蝴蝶,王泽云,陈雄庭,郑文茹,谢玉萍;影响橡胶体细胞胚萌发成植株的几个因素[J];热带作物研究;1997年02期
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8	赵辉;陈雄庭;王旭;彭明;;巴西橡胶树遗传转化技术研究进展[J];热带作物学报;2008年01期
9	王颖;陈雄庭;张秀娟;彭明;;基因枪法将GAI基因导入巴西橡胶的研究[J];热带亚热带植物学报;2006年03期
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9	陈兴江;张福城;;拟南芥抑芽基因SPS的克隆及植物表达载体的构建[J];安徽农业科学;2006年15期
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8	王沛;周洲;尹新明;;菊花“绿鹦哥”遗传转化系统的研究[A];河南省植保学会第九次、河南省昆虫学会第八次、河南省植病学会第三次会员代表大会暨学术讨论会论文集[C];2009年
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7	蔡肖;青杨原生质体培养及叶片离体染色体加倍研究[D];北京林业大学;2011年
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1	刘红梅;农杆菌介导百子莲抗寒基因CBF1高效转化体系的建立[D];华中农业大学;2010年
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3	曹玲;AM真菌孢子萌发及其与紫云英转化根双重培养体系建立的研究[D];华中农业大学;2009年
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10	霍凤梅;洋葱种质资源遗传多样性的SRAP分析与查尔酮合成酶基因的分子克隆与表达研究[D];山东农业大学;2010年

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1	权瑞党,尚梅,张举仁;农杆菌介导的玉米自交系愈伤组织的转化[J];山东农业科学;2003年02期
2	郭展雄，肖更生，苏大道;广东桑树多倍体及其育种研究的进展[J];蚕业科学;1994年02期
3	陈正华,钱长发,岑明,王传华,索长江,肖育玲,许绪恩;在三叶橡胶花药培养中体细胞与小孢子的关系[J];西北植物研究;1981年01期
4	袁鹰,刘德璞,张光弟,郝文媛,谭化,姜昱;玉米常规育种中存在的问题的生物技术解决方案[J];分子植物育种;2005年01期
5	韩礼星,赵改荣,李玉红,张海璇,樊秀彩;猕猴桃多倍体诱导研究[J];果树科学;1998年03期
6	王友如,胡莎,崔永涛;几种农杆菌质粒DNA提取方法的比较[J];湖北师范学院学报(自然科学版);2005年02期
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5	郭冬;李辉亮;彭世清;;巴西橡胶树SUMO活化酶基因HbSAE1的克隆及表达[J];热带作物学报;2010年09期
6	李海林;吴春太;李维国;;巴西橡胶树DNA甲基化的MSAP分析[J];分子植物育种;2011年01期
7	;《热带作物译丛》1983年总目录[J];世界热带农业信息;1983年06期
8	张桂和;徐碧玉;金志强;卢向阳;罗泽民;;巴西橡胶树基因组文库的构建[J];科学技术与工程;2002年06期
9	张欣;蒲金基;谢艺贤;漆艳香;符悦冠;;巴西橡胶树棒孢霉落叶病发生情况调查[J];植物检疫;2007年06期
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1	王立丰;田维敏;;白粉病和衰老对巴西橡胶树叶片线粒体结构和功能的影响[A];第九届全国植物结构与生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2010年
2	刘先宝;蔡吉苗;高宏华;潘羡心;彭建华;张科立;李超萍;陈瑶;时涛;黄贵修;;巴西橡胶树棒孢霉落叶病及其鉴定[A];生物入侵与生态安全——“第一届全国生物入侵学术研讨会”论文摘要集[C];2007年
3	杨署光;陈月异;史敏晶;田维敏;;茉莉酸信号途径与天然橡胶生产[A];第九届全国植物结构与生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2010年
4	李惠波;周堂英;;橡胶树新品种云研77-2和云研77-4的细胞学鉴定及育种历程总结[A];云南省热带作物学会第七次代表大会暨2009年学术年会会议材料[C];2009年
5	张欣;张贺;蒲金基;漆艳香;谢艺贤;;一种新的巴西橡胶树棒孢霉落叶病菌产孢方法——纸片法[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
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7	史敏晶;田维敏;;巴西橡胶树乳管伤口堵塞物形成机制的研究[A];第九届全国植物结构与生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2010年
8	谢艺贤;张欣;蒲金基;漆艳香;张辉强;;巴西橡胶树棒孢霉落叶病病原菌生物学特性研究[A];中国植物病理学会2007年学术年会论文集[C];2007年
9	刘世彪;林位夫;郝秉中;吴继林;胡正海;;巴西橡胶树嫁接接合区接穗和砧木径向生长差异的研究[A];中国植物学会七十周年年会论文摘要汇编（1933—2003）[C];2003年
10	罗雪华;邹碧霞;吴菊群;杨俐苹;;氮素对巴西橡胶树花药苗生长及氮代谢、光合作用的影响[A];中国植物营养与肥料学会2010年学术年会论文集[C];2010年

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1	广西农垦集团公司董事长刘刚;垦歌嘹亮映八桂勇立潮头竞风流[N];农民日报;2011年
2	祝捷　李乾孙;原油到天然橡胶的价格传导[N];期货日报;2011年

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7	刘晓妹;巴西橡胶树棒孢霉落叶病病菌MAPK基因（CCK1）和毒素基因（ct）克隆与功能鉴定[D];海南大学;2012年
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9	林清火;海南丘陵区橡胶园土壤养分精准管理取样方法研究[D];中国农业大学;2013年
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