收藏本站
《海南大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种T-DNA插入突变体库的构建及部分致病相关突变体插入位点的定位

高剑  
【摘要】:香蕉枯萎病是一种系统性维管束病害,用化学农药很难防治,又因为其传播容易且速度快,给香蕉种植业带来毁灭性打击。本研究首先从海南省不同市县采集不同地理来源的香蕉枯萎病菌4号小种,通过经典病理学与分子生物学的方法对这些香蕉枯萎病的病原进行了鉴定;经过致病性测定后发现不同来源的菌株致病性方面存在差异,并从中筛选出致病性强且生长旺盛的菌株193-6作为插入突变的原始野生型菌株。在进行突变体库的构建之前,优化了农杆菌介导的该生理小种的转化体系,优化后4号生理小种的转化效率达到700-800个转化子/106个香蕉枯萎病菌孢子。PCR验证表明外源的T-DNA已经成功地整合到病原菌基因组中。应用该转化体系已建立了包含2520个转化子的突变体库,并且已经完成了所有转化子的单孢分离、致病性测定以及部分致病性变化显著突变体的侧翼序列克隆工作。取得的研究结果如下: 1、从海南省不同市县采集到具有香蕉枯萎病症状的香蕉假茎材料,分离纯化得到17株香蕉枯萎病菌,经显微观察、分子检测以及柯赫法则鉴定后确定17株病原菌均为香蕉枯萎病菌,其中10株为香蕉枯萎病菌4号生理小种菌株,7株为1号生理小种。从这些4号生理小种菌株中挑取致病力和生活力都较强的单孢菌株193-6,用作T-DNA插入遗传转化的野生型菌株。 2、大规模构建突变体库前,对ATMT转化条件进行了优化,优化后的转化体系转化效率非常高。优化后的最佳条件分别是:诱导剂AS的浓度为150μmol/mL,AS诱导前IM培养基中的农杆菌浓度OD600为0.15,农杆菌经IM液体培养基AS诱导的时间为7个小时,Focr4孢子浓度为1×107个/mL,培养温度为25℃,诱导培养基pH值为5.5,共培养时间为48小时。 3、通过潮霉素抗性筛选,获得抗性遗传稳定的突变菌株2520个,本实验对2520个转化子进行了单孢分离及致病力的检测。 4、通过致病性测定方法的摸索,找到了首先离体叶片粗筛,组培苗复筛,大田实验最后确认突变体致病性变化的高通量突变体致病性测定方法。 5、通过致病性测定筛选,共获得致病性丧失突变体3个,致病性严重减弱突变体7个,致病性减弱突变体11个,致病性加强突变体4个,致病性极度加强突变体1个以及形态上明显变化的突变体若干。 6、通过DW-ACP的方法,可以很简便高效地扩增插入的侧翼序列。本实验共获得18个香蕉枯萎病菌4号生理小种致病性变化突变体侧翼序列,并通过此侧翼序列与Focr4全基因组序列进行比对,可以获得T-DNA插入位点的具体信息。
【学位授予单位】:海南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S436.68

免费申请
【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 吴飞宏;香蕉枯萎病菌4号小种一个致病相关基因克隆及其功能的初步研究[D];海南大学;2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 蒲金基,刘晓妹,曾会才;香蕉抗枯萎病育种研究进展[J];中国南方果树;2003年01期
2 刘景梅,王璧生,陈霞,蔡曼珊;广东香蕉枯萎病菌生理小种RAPD技术的建立[J];广东农业科学;2004年04期
3 任小平,李小妮,吴仕豪,曹俐;香蕉枯萎病4号小种的生物学特性及检测防治技术[J];广东农业科学;2005年01期
4 王政逸,王秋华,李德葆;根癌土壤杆菌介导的丝状真菌转化[J];菌物系统;2003年02期
5 漆艳香,谢艺贤,张欣,蒲金基,张辉强;海南省香蕉枯萎菌生理小种的RAPD分析[J];菌物学报;2005年03期
6 白罚利;田沈;闫飞;杨秀山;;酿酒酵母与嗜鞣管囊酵母原生质体制备研究[J];可再生能源;2007年02期
7 谢艺贤,张欣,漆艳香,蒲金基,刘志昕,张辉强;香蕉枯萎病菌的致病性测定及其RAPD分析[J];热带作物学报;2005年02期
8 方卫国,张永军,杨星勇,裴炎;根癌农杆菌介导真菌遗传转化的研究进展[J];中国生物工程杂志;2002年05期
9 漆艳香,谢艺贤,张欣,张辉强;香蕉枯萎菌基因组DNA提取方法的研究[J];生物技术;2004年06期
10 黄亚丽;潘玮;蒋细良;郭平;田云龙;李记鹏;朱昌雄;;根癌农杆菌介导丝状真菌遗传转化的研究进展[J];生物技术通报;2007年03期
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 叶明珍;香蕉枯萎病菌生理小种鉴定及检测技术[D];福建农林大学;2006年
2 唐复润;香蕉枯萎病菌FPD1基因的克隆、表达及其生防菌分离、筛选[D];华南热带农业大学;2007年
3 王文华;香蕉枯萎镰刀菌1、4号小种rDNA-ITS序列分析及4号小种遗传转化体系建立[D];华南热带农业大学;2007年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 徐文玲;王淑芬;牟晋华;王翠花;刘贤娴;;AFLP分子标记技术的改进——内切酶EcoRⅠ/TruⅠ组合与EcoRⅠ/MseⅠ组合的比较[J];山东农业科学;2008年09期
2 缪军;霍雨猛;杨妍妍;修景润;刘冰江;张一卉;霍凤梅;吴雄;;高效TAIL-PCR的改良及在洋葱中的应用[J];山东农业科学;2009年10期
3 张玉芹;高俊平;张晋;王芙蓉;张军;;棉花T-DNA标签雄性不育突变体的遗传分析[J];山东农业科学;2010年01期
4 戴杨;温丽伟;高克祥;何邦令;吴海燕;刘畅;;生防真菌球毛壳ND35的RAPD特异序列的标记转换[J];山东农业科学;2011年10期
5 孙海彦;孙建波;彭明;;香蕉枯萎病生物防治研究进展[J];安徽农学通报;2008年15期
6 竺利红;许豪;;原生质体融合技术及其在嗜酸乳杆菌菌种选育中的应用[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年07期
7 程娜;晓军;赵民安;张文明;姚大年;;农杆菌介导遗传转化宿主的研究进展[J];安徽农业科学;2006年24期
8 王文华;曾会才;;香蕉枯萎镰刀菌的核糖体DNA-ITS区段序列分析[J];安徽农业科学;2007年27期
9 王葵娣;郑服丛;;一种快速·有效分离T-DNA插入位点的侧翼序列的方法——DW-ACP-PCR技术[J];安徽农业科学;2007年28期
10 刘春香;;基于随机引物的PCR-Walking技术[J];安徽农业科学;2010年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 高剑;肖苏生;曾涛;曾会才;;农杆菌介导的香蕉枯萎病菌4号生理小种高效遗传转化体系的建立及影响因子的优化[A];2009年海南省微生物学检测及质量保证研讨会论文集[C];2009年
2 唐改娟;曾涛;林妃;曾会才;彭明;郭刚;;香蕉枯萎病菌1号小种致病相关基因敲除突变体△Focr1-328的生物学特性研究[A];2011年海南省微生物学会学术年会论文汇编[C];2011年
3 吴飞宏;曾涛;曾会才;;尖孢镰刀菌古巴专化型4号小种T-DNA插入突变体Focr4-1562及其基因敲除子的生物学表型研究[A];2011年海南省微生物学会学术年会论文汇编[C];2011年
4 李欣龙;张敏;段霞瑜;周益林;;丝状真菌遗传转化系统的研究进展[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年
5 严明理;刘忠松;官春云;陈社员;;芥菜型油菜种皮颜色的遗传和SCAR标记[A];中国作物学会2006年学术年会论文集[C];2006年
6 徐春香;谢丽君;邹茹;陈厚彬;胡桂兵;李华平;;“粤优抗1号”(Musa spp.AAA Group)愈伤组织的诱导与体细胞胚直接发生[A];2008园艺学进展(第八辑)——中国园艺学会第八届青年学术讨论会暨现代园艺论坛论文集[C];2008年
7 于莉;黎永坚;李赤;张英俊;王建余;;香蕉枯萎病菌毒素的成分分析及其生物测定[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
8 彭军;梁昌聪;赵培静;黄俊生;;香蕉枯萎病菌β-微管蛋白基因分子检测研究[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
9 陈森;;广东省香蕉枯萎病防控存在的问题和对策[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
10 丁兆建;习平根;李敏慧;汤历;陆小军;郑常格;姜子德;;亲和的生防微生物组合对香蕉枯萎病的盆栽防效测定[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 顾春波;草莓枯萎病菌对多菌灵及戊唑醇的抗性研究[D];山东农业大学;2010年
2 崔玉琳;亚心型扁藻细胞核与叶绿体稳定转化系统的构建[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
3 冯宝珍;辣椒疫霉(Phytophthora capsici)诱导坏死蛋白基因克隆及功能研究[D];山东农业大学;2011年
4 刘浩;拟南芥一个2OG-Fe(Ⅱ)氧化还原酶在GA合成及其与ABA互作的功能分析[D];河南大学;2011年
5 石雅丽;棉花体细胞胚发生受体类激酶基因的克隆与功能分析[D];中国农业科学院;2011年
6 由磊;全基因组筛选胰腺癌耐药相关基因[D];北京协和医学院;2010年
7 洪伟雄;甘蔗梢腐病病原菌—串珠镰刀菌分子生物学研究初探[D];福建农林大学;2011年
8 夏勇开;中国香蕉生产技术的经济研究[D];海南大学;2011年
9 黄永红;韭菜对香蕉枯萎病的防控效果及其作用机理的研究[D];湖南农业大学;2011年
10 王璐;农杆菌介导转化及原生质体融合法选育红曲菌Monacolin K高产株[D];江南大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 兰楠;利用天南星科凝集素构建内生工程真菌及其抗虫防病效果研究[D];华中农业大学;2010年
2 刘学明;枯草芽胞杆菌TR21的发酵和海洋细菌DM09的抗真菌活性物质研究[D];华中农业大学;2010年
3 李红美;抗香蕉枯萎病4号小种的枯草芽胞杆菌R31的发酵条件优化[D];华中农业大学;2010年
4 赵凯;食酸菌属中三价砷氧化细菌As(Ⅲ)氧化酶基因和调控基因的功能研究[D];华中农业大学;2010年
5 李霞;人工合成甘蓝型黄籽油菜粒色基因的精细定位[D];华中农业大学;2009年
6 谢宙;刺糖多孢菌对剪切力抗性的初步研究[D];华中农业大学;2010年
7 汪小艳;几株蛹草拟青霉原生质体制备及染色体核型研究[D];安徽农业大学;2010年
8 尤卫艳;光皮桦分子遗传连锁图谱的构建[D];浙江农林大学;2009年
9 张志仙;白菜花粉特异基因BcSKS11在花粉发育及授粉受精中的表达分析及功能鉴定[D];浙江大学;2011年
10 王红;稻瘟病菌亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MoMET13)功能的初步研究[D];浙江大学;2011年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈瑾;王标;李敏慧;习平根;姜子德;;香蕉枯萎病菌4号生理小种致病力减弱突变体C1576的初步研究[J];福建果树;2009年03期
2 林时迟,张绍升,周乐峰,黄月英,胡方平;福建省香蕉枯萎病鉴定[J];福建农业大学学报;2000年04期
3 蒲金基,刘晓妹,曾会才;香蕉抗枯萎病育种研究进展[J];中国南方果树;2003年01期
4 彭埃天;宋晓兵;凌金锋;刘景梅;;香蕉枯萎病菌4号生理小种分子检测与枯萎病生物防治研究进展[J];果树学报;2009年01期
5 王文华;王葵娣;曾会才;;香蕉枯萎病的危害及其防治策略[J];广西热带农业;2007年03期
6 李敏慧;习平根;姜子德;戚佩坤;;广东香蕉枯萎病菌生理小种的鉴定[J];华南农业大学学报;2007年02期
7 许文耀,兀旭辉,林成辉;香蕉枯萎病菌粗毒素的毒性及其模型[J];热带作物学报;2004年04期
8 黄贵修;薛迎春;卢昕;;胶孢炭疽菌T-DNA插入突变体库的构建及其分子分析[J];热带作物学报;2008年01期
9 杨歆璇;杨腊英;羊玉花;黄俊生;;香蕉枯萎病菌pgx4基因的克隆与序列分析[J];热带作物学报;2009年11期
10 杨旸;董章勇;王振中;;香蕉枯萎病菌2个生理小种MAPK基因的克隆及序列分析[J];热带作物学报;2011年01期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 凌金锋;李敏慧;习平根;姜子德;;香蕉枯萎病菌两个致病突变体的表型及致病特性研究[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 王秋华;尖孢镰刀菌的DNA转化及其转化子表型的初步分析[D];浙江大学;2004年
2 叶明珍;香蕉枯萎病菌生理小种鉴定及检测技术[D];福建农林大学;2006年
3 王文华;香蕉枯萎镰刀菌1、4号小种rDNA-ITS序列分析及4号小种遗传转化体系建立[D];华南热带农业大学;2007年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 姚华建,于嘉林,金元,刘仪;甜菜坏死黄脉病毒外壳蛋白基因的表达及其表达产物抗血清的制备[J];病毒学报;1994年01期
2 林时迟,张绍升,周乐峰,黄月英,胡方平;福建省香蕉枯萎病鉴定[J];福建农业大学学报;2000年04期
3 蒲金基,刘晓妹,曾会才;香蕉抗枯萎病育种研究进展[J];中国南方果树;2003年01期
4 王璧生,罗启浩;广东香蕉的主要病害及其防治[J];中国南方果树;1997年03期
5 胡适连;王碧青;;香蕉枯萎病组培苗伤根接种试验[J];广东农业科学;1988年02期
6 刘绍钦,卓国豪,王璧生,李汉龙,叶伟忠,蔡时可;香蕉镰刀菌枯萎病发生规律初探[J];广东农业科学;2001年01期
7 刘景梅,王璧生,陈霞,蔡曼珊;广东香蕉枯萎病菌生理小种RAPD技术的建立[J];广东农业科学;2004年04期
8 魏岳荣,黄秉智,杨护,许林兵,邱继水;香蕉镰刀菌枯萎病研究进展[J];果树学报;2005年02期
9 张正奇,邹敏芬,熊劲芳,王玲;黄瓜DNA的提取研究[J];湖南大学学报(自然科学版);2003年06期
10 施跃峰,桑金隆,竺利红,李孝辉,吴吉安;新微生物农药抑霉菌素的研究[J];核农学报;2004年01期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 李宏宇;稻瘟病菌T-DNA插入突变研究[D];福建农林大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 李模孝;盾壳霉T-DNA标记插入突变体库的构建及其质量评估[D];华中农业大学;2004年
2 冉红艳;青枯假单胞菌拮抗微生物的筛选、鉴定及发酵条件的研究[D];四川大学;2005年
3 叶明珍;香蕉枯萎病菌生理小种鉴定及检测技术[D];福建农林大学;2006年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 何道一;王旭明;陈楚;;T-DNA诱发的小麦强分蘖突变体研究初报[J];中国农学通报;2006年10期
2 王莹;任大明;;盐芥T-DNA插入突变体库的建立及初步分析[J];湖北农业科学;2011年04期
3 张健,徐金相,孔英珍,纪振动,王兴春,安丰英,李超,孙加强,张素芝,杨晓辉,牟金叶,刘新仿,李家洋,薛勇彪,左建儒;化学诱导激活型拟南芥突变体库的构建及分析[J];遗传学报;2005年10期
4 郑海涛;李庆伟;张永芳;牟普;刘加英;;玉米突变体创造与检测技术的研究进展[J];中国农学通报;2009年10期
5 张向前;刘芳;朱海涛;李晓燕;曾瑞珍;;水稻Ds插入淡绿叶突变体的鉴定和遗传分析[J];遗传;2009年09期
6 郭飞;卢杰;魏斌;张自立;;拟南芥抗镧突变体的筛选及初步鉴定[J];安徽农学通报(上半月刊);2010年11期
7 魏然;阮颖;王莹;刘春林;;化学诱导激活系统的研究进展[J];作物研究;2006年05期
8 赵天祥;孔秀英;周荣华;高双成;贾继增;;EMS诱变六倍体小麦偃展4110的形态突变体鉴定与分析[J];中国农业科学;2009年03期
9 贺云霞;徐慧;叶飞;孙慧玲;王宏俊;龚玉梅;张莉;黄秀芬;张培君;;副猪嗜血杆菌EZ-Tn5转座子插入突变体库的构建及减毒株的筛选(英文)[J];Agricultural Science & Technology;2011年02期
10 黄国庆,姚泉洪;高通量筛选蛋白质突变体库方法的研究进展[J];上海农业学报;2004年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 周鹏;潘丽;刘丽萍;王子月;黄俊斌;;希金斯刺盘孢T-DNA插入突变体库的构建与筛选[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
2 贾娇;邢继红;董金皋;;拟南芥抗核盘菌突变体的筛选[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
3 姚姿婷;蓝秀万;周燕;周辉;商巾杰;陈保善;;大规模板栗疫病菌突变体库的构建[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
4 胡瑞学;刘金亮;张世宏;赵文生;彭友良;潘洪玉;;尖孢镰刀菌蓖麻专化型突变体库的构建及其部分突变子的筛选[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
5 王伟伟;张桂珍;刘金亮;张世宏;赵文生;彭友良;潘洪玉;;玉米大斑病菌T-DNA插入突变体库构建及致病相关基因的克隆[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
6 王伟伟;李桂华;刘金亮;张世宏;张艳华;潘洪玉;;玉米大斑病菌T-DNA插入突变体库的创建及致病相关基因克隆[A];中国菌物学会第五届会员代表大会暨2011年学术年会论文摘要集[C];2011年
7 王丽;张艳华;李广泉;燕巍;尚博菲;;根癌农杆菌介导申克氏孢子丝菌T-DNA插入突变的研究[A];中国菌物学会第五届会员代表大会暨2011年学术年会论文摘要集[C];2011年
8 桂春爽;蒋继志;;中国重要马铃薯产区致病疫霉生理小种研究进展[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
9 杨雅云;罗文富;杨艳丽;;云南番茄晚疫病菌生理小种的研究[A];第八届海峡两岸菌物学学术研讨会论文集[C];2007年
10 彭德良;张东升;;大豆孢囊线虫病发生危害、生理小种及抗性鉴定研究进展[A];“植物保护21世纪展望”——植物保护21世纪展望暨第三届全国青年植物保护科技工作者学术研讨会文集[C];1998年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 王丹;我国建成大型小鼠基因突变体库[N];健康报;2010年
2 付毅飞;给基因装上“开关”[N];科技日报;2004年
3 ;济麦20[N];农资导报;2004年
4 王文辉;专家提醒:不能盲目种植超级稻[N];农资导报;2006年
5 本报记者 齐冰;2003,生物科技成果多[N];健康时报;2003年
6 记者  叶其军;走过伤心地[N];阿坝日报;2006年
7 齐芳;李振声:小麦人生[N];光明日报;2007年
8 本报记者 罗兵前 王伟;番茄晚疫病有望从根本上得到控制[N];江苏农业科技报;2006年
9 四川省农科院 何明;小麦锈病防治要点[N];江苏农业科技报;2007年
10 本报记者 舒萍 特约通讯员 张颙;悠悠五十载 浓浓麦香情[N];四川科技报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 徐荣旗;棉花黄萎病菌T-DNA插入突变体表型特征及侧翼序列分析[D];中国农业科学院;2009年
2 郜新强;水稻T-DNA插入突变体库的构建及控制水稻株高和花粉育性基因OsLIS-L1的分离与鉴定[D];华中农业大学;2011年
3 常玉晓;水稻T-DNA插入突变体侧翼序列的分离和水稻DNA复制蛋白RPA1a及RPA2-3基因的功能研究[D];华中农业大学;2010年
4 吴宇;拟南芥耐低硫突变体高通量筛选的建立和鉴定[D];中国科学技术大学;2010年
5 韩锁义;大豆突变体库的构建及子叶折叠突变相关基因的初步研究[D];南京农业大学;2008年
6 代晓霞;水稻T-DNA插入突变体库侧翼序列的分离和OsBC1L家族基因的功能研究[D];华中农业大学;2010年
7 侯蕾;拟南芥盐敏感突变体的筛选鉴定及蛋白酶体β5亚基与植物抗氧化性的相关性研究[D];山东师范大学;2012年
8 张治国;水稻标签库突变体筛选与分析[D];中国农业科学院;2006年
9 周小静;拟南芥RETARDED ROOT GROWTH基因的图位克隆及功能分析[D];华中农业大学;2011年
10 王伟平;水稻包穗突变体M893的形态、生理及遗传特性研究[D];湖南农业大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吴磊;快速生长甘蓝型油菜的遗传转化及其T-DNA插入突变体的获得[D];扬州大学;2010年
2 王芯;球孢白僵菌T-DNA插入突变体Mu301的鉴定及分析[D];西南大学;2010年
3 张娇;灰葡萄孢T-DNA插入突变体的筛选及分析[D];河北农业大学;2010年
4 闫双勇;水稻T-DNA插入突变体库的构建与初步分析[D];四川农业大学;2004年
5 王振宇;拟南芥光周期敏感型多效突变体ldd1的表型及遗传分析[D];兰州大学;2010年
6 马振;水稻Tos17突变体库的创建和应用[D];华中农业大学;2010年
7 李雪华;大豆突变体库的初步构建及突变类型的鉴定[D];南京农业大学;2003年
8 吕明;芥菜型油菜黄化突变体L638-y叶片缺绿的生化机制探讨[D];西北农林科技大学;2010年
9 李瑞清;水稻白化转绿突变体G_9的特性分析和基因定位研究[D];安徽农业大学;2010年
10 唐京生;农杆菌介导水稻转化系统的优化及水稻T-DNA插入突变体库的初步建立[D];四川大学;2002年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026