收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

Ⅰ群禽腺病毒分离鉴定及重组蛋白ELISA鉴别诊断方法的研究

罗思思  
【摘要】:禽腺病毒(FAV)归为腺病毒科禽腺病毒属,根据抗原性差异,分为3个群。I群禽腺病毒(FAVI)具有共同的群抗原,共12个血清型(FAV1-FAV12),在鸡、鸭、鹅体内普遍存在,呈隐性感染,与其他病原共同作用于家禽。2008-2010年从广西南宁市活禽市场采集259份样品,通过SPF鸡胚传代增殖与PCR鉴定,分离到92份FAV,阳性率为35.5%(92/259)。选取不同年份的8株,进行血凝性、免疫琼脂扩散、形态学、致细胞病变和鸡胚致病性试验。结果显示,8株均不凝集鸡红细胞,能与FAVI阳性血清反应,具有腺病毒粒子的典型特征,致细胞变圆、折光性增强,使鸡胚发育不良。克降8株hexon基因,经序列分析,均与FAVI同源性最高。经遗传进化分析,均与FAVI亲缘关系最近,结果表明,8株分离株为FAVI。 根据GenBank中FAVI hexon、penton、100K、33K基因序列,设计引物,经PCR扩增,与pGEX-4T-1载体连接,转化大肠杆菌DH5a感受态细胞,经IPTG诱导,表明四种重组蛋白得到良好表达;经可溶性分析,表明hexon、penton表达产物以包涵体的形式存在,100K、33K表达产物以可溶性的形式存在;经纯化,表明四种重组蛋白达到了较高的纯度和浓度;经western-blot检测,具有良好的反应原性,可作为间接ELISA的诊断抗原。 以hexon和penton结构蛋白分别作为包被抗原,建立检测FAVI抗体的间接hexon-ELISA和penton-ELISA力法。结果农明,抗原最适包被浓度分别为1O.Oug/mL和15.0ug/mL;一抗血清和最适稀释度均为1:100;酶标二抗最适稀释度均为1:2000;一抗和二抗最适作用时间均分别为75min和45min。两种ELISA方法具有良好的特异性、敏感性、重复性。以不同比例的hexon、penton两种蛋白混合包被,建立hexon-penton-ELISA方法。用三种ELISA方法检测野毒感染和灭活苗免疫血清各30份,结果表明两种血清均有反应,hexon-penton-ELISA灵敏度更高。用三种ELISA方法检测临床样品100份,阳性率分别为45%、41%、48%。为FAVI抗体的检测和流行病学调查提供简便、快速的血清学诊断方法。 以100K和33K非结构蛋白分别作为包被抗原,建立检测FAVI抗体的间接100K-ELISA和33K-ELISA方法。结果表明,抗原最适包被浓度分别为10.8u∥mL和12.0u∥mL;一抗血清最适稀释度均为1:100;酶标二抗最适稀释度均为1:3000;一抗和二抗最适作用时间均分别为60min和45min。两种方法具有良好的特异性、敏感性、重复性。以不同比例的100K、33K两种蛋白混合包被,建立间接100K-33K-ELISA方法。J1j三种ELISA方法检测野毒感染和灭活苘免疫_I『n.消符30份,表明100K-33K-ELISA灵敏度更高。用三种ELISA方法检测临床样l ul 100份,15I…j率分别为40%、35%、42%。该方法可检出FAVI野毒感染血消,而与火活苘免疫血消无反应,为该病的诊断与净化提供技术支撑。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 吴延功,徐天刚,王志亮,张喜悦,王君玮,宋翠平,刘佩兰,徐培莲,宋芳,许立华,陈溥言;重组N蛋白抗原检测PRRSV抗体ELISA的研究 Ⅰ.ELISA方法的初步建立及其标化[J];中国兽医学报;2005年04期
2 韩庆功;崔艳红;张智勇;;ELISA技术在禽流感诊断研究中的应用[J];生物技术通报;2008年06期
3 杨先进;ELISA操作中某些非特异性反应因素的消除[J];中国动物检疫;1992年05期
4 安清聪,张曦,陈克嶙;动物组织中四环素类抗生素残留的ELISA检测研究——土霉素抗体的制备[J];畜牧与兽医;2004年09期
5 陈甜甜;刘建柱;成子强;张利;周栋;王振勇;刘海涛;刘永夏;王淑静;柴同杰;;猪附红细胞体MSG1基因人工合成、克隆、表达及免疫原性分析[J];中国人兽共患病学报;2011年03期
6 于洪侠;杨曙明;朱宇;;莱克多巴胺多克隆抗体的制备[J];中国兽医科学;2006年01期
7 管刚;牛小迎;马利青;;猪弓形虫病的ELISA诊断及试剂盒建立[J];中国兽医杂志;2008年06期
8 孙海新;凌红丽;曹照真;刘围;高亚东;郗日沫;;莱克多巴胺人工抗原及抗体的制备[J];食品科学;2009年09期
9 杨剑波;吴向华;周红霞;林兴凤;张红琳;;检测硫酸雌酮间接ELISA方法的建立[J];南京晓庄学院学报;2009年06期
10 李会娜;曹远银;孙艳秋;魏松红;;兔抗2,4-D多克隆抗体的制备[J];河北农业大学学报;2006年03期
11 钟发刚;黄新;王新华;李娜;;牛病毒腹泻病毒(BVDV)E2重组蛋白ELISA检测方法的初步建立[J];新疆农业科学;2010年04期
12 褚文雷;崔杰;马莺;李滨胜;;抗氟甲砜霉素多克隆抗体的制备与鉴定[J];黑龙江大学自然科学学报;2010年02期
13 赵宁;徐飞;吴小平;王战辉;李杰超;朱景慧;潘净茹;;ELISA一步法快速检测牛奶中三聚氰胺的研究[J];中国畜牧兽医;2011年04期
14 王清华;胡森;王喜军;步志高;;重组痘病毒表达裂谷热病毒囊膜蛋白及其免疫原性分析[J];中国预防兽医学报;2007年06期
15 臧科伟;张春玲;邹勇;柴家前;崔言顺;;猪细小病毒NS1基因低温诱导表达及间接ELISA方法的建立[J];中国兽医学报;2009年10期
16 刘斌,甘孟侯;酶联免疫吸附试验用于鸡葡萄球菌抗体检测的研究[J];中国兽医杂志;1993年02期
17 黄丽,潘科,孙远明;克喘素免疫原CL13.2-BSA制备3种鼠抗血清效果比较[J];食品科学;2005年09期
18 金仁耀;桂文君;吴建祥;王春梅;朱国念;;抗毒死蜱单克隆抗体的研制[J];浙江大学学报(农业与生命科学版);2006年06期
19 李川;谭亚娣;陈颖钰;胡巧云;马艳;张桂荣;钦博;晁彦杰;陈焕春;郭爱珍;;牛IFN-γ原核表达、单克隆抗体制备及其ELISA检测方法的建立[J];生物工程学报;2007年01期
20 连晓雯;杜惠芬;李克生;崔燕;徐海聂;薄清如;黄新民;;抗H5N1型禽流感病毒单克隆抗体的制备与鉴定[J];甘肃农业大学学报;2007年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘少宁;张兴晓;邹金峰;谢之景;朱岩丽;赵钦;周恩民;姜世金;;检测DuCV抗体ELISA方法的建立及应用[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
2 王辉;姚松涛;刘群;;检测弓形虫血清抗体的SPA-ELISA诊断方法的建立及应用[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
3 王笑言;张大丙;;鸭星状病毒抗体ELISA的建立和初步应用[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
4 乔明明;申屠芬琴;马永缨;杨欣艳;杨璐;孙明;;猪瘟抗体间接ELISA检测试剂盒研究[A];中国畜牧兽医学会养猪学分会第五次全国会员代表大会暨养猪业创新发展论坛论文集[C];2010年
5 肖一红;吕军华;聂力;马晓春;周恩民;;高致病性与传统型PRRSV鉴别诊断间接ELISA方法的建立及初步应用[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年
6 邢春莲;徐阳阳;赵蕊;杨一;崔立莉;曹健荣;;血筛产品(ELISA)检测能力的评价[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
7 刘辰庚;王培昌;;血清抗碳酸酐酶Ⅲ抗体ELISA检测方法的建立与初步应用[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
8 王凯;虞伟;高德玉;白彩琴;严孝岭;李晓军;;特异性ACPA免疫复合物ELISA检测法的建立及其应用[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
9 黄立平;刘长明;危艳武;陆月华;郭龙军;;检测猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA方法的建立及应用[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年
10 王丽;朱立苇;徐霄勤;杨雪梅;王拥军;吕杭军;;4项目复合ELISA室内质控品制备方法的建立和评估[A];中国输血协会第五届输血大会论文专集(摘要篇)[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 何继红;阿维菌素类药物多残留分析方法的研究[D];中国农业大学;2005年
2 宋振梅;Clusterin在食管鳞癌中表达的研究与应用[D];山东大学;2005年
3 张爱霞;抗GP73、HDGF抗体的制备、夹心ELISA法的建立及临床初步应用[D];南京医科大学;2009年
4 曹丙蕾;山羊IL-18定量抗原捕获ELISA检测方法的建立及其免疫增强作用的研究[D];山东农业大学;2010年
5 邓省亮;己烯雌酚和双烯雌酚单克隆抗体的制备及ELISA方法的研究[D];中国农业科学院;2011年
6 耿宏伟;蓝舌病病毒群特异性构象抗原表位的初步鉴定及竞争ELISA检测方法的建立与应用[D];东北农业大学;2012年
7 商绍彬;猪圆环病毒衣壳蛋白抗原表位的精细定位与间接ELISA检测技术[D];浙江大学;2007年
8 王卓娅;侵袭性烟曲霉感染特异性甘露聚糖捕获ELISA和rDNA ITS区DNA检测方法的建立及评价[D];南方医科大学;2012年
9 张德勇;基于IBV重组表达蛋白的抗体检测技术及基因免疫研究[D];浙江大学;2005年
10 王斌;甲型H1N1流感病毒特异性抗原捕获ELISA方法的建立及通用型猪流感疫苗基础研究[D];东北农业大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 文永平;鸭瘟病毒TK基因转录与表达时相及TK重组蛋白ELISA方法的建立和应用[D];四川农业大学;2010年
2 范秋佳;己烯雌酚人工抗原合成研究及ELISA检测方法的建立[D];河北农业大学;2010年
3 尹衍新;基于CjaA蛋白检测鸡空肠弯曲菌抗体的间接ELISA方法建立及其单克隆抗体研制[D];扬州大学;2010年
4 宋宇;魏氏梭菌α毒素基因的克隆表达及间接ELISA方法的初步研究[D];四川农业大学;2010年
5 王净;CPV VP2截短基因的克隆表达及双抗体夹心ELISA检测方法的建立与应用[D];中国农业科学院;2011年
6 武燕斌;汉赛巴尔通体P17基因原核表达及间接ELISA检测方法的建立[D];内蒙古农业大学;2011年
7 陈琰;猪札幌样病毒间接ELISA和荧光定量PCR检测方法的建立[D];上海交通大学;2010年
8 李子平;牛附红细胞体特异性抗原制备及双抗体夹心ELISA诊断方法的建立[D];中国农业科学院;2010年
9 张海瑞;羊口疮病毒的分离鉴定及其ELISA检测方法的建立[D];中国农业科学院;2011年
10 李正平;猪流感病毒H_3N_8亚型NA基因的克隆和原核表达及间接ELISA方法的建立[D];华中农业大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 何源;走近法国软件产业[N];电脑报;2003年
2 高彦生;OIE疫情专递[N];中国畜牧兽医报;2005年
3 高彦生;OIE疫情专递[N];中国畜牧兽医报;2005年
4 记者 冯军;我市重大动物疫病防控研究达到国际先进水平[N];宁波日报;2009年
5 上海市艾滋病监测中心供稿;迎战“艾魔”二十载回眸[N];文汇报;2000年
6 高彦生;OIE疫情专递[N];中国畜牧兽医报;2005年
7 庾志成;全球手机电视业务发展透视[N];人民邮电;2004年
8 高彦生;OIE疫情专递[N];中国畜牧兽医报;2005年
9 高彦生;OIE疫情专递[N];中国畜牧兽医报;2005年
10 本报记者 胡京京;艾滋病人的希望[N];中国中医药报;2000年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978