收藏本站
《广西大学》 2015年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

广西陆川猪肺炎支原体病原分离及其P97R1区基因的克隆及序列分析

黎珂钰  
【摘要】:猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae, Mhp)是引发陆川猪支原体肺炎(Mycoplasmal pneumonia of swine, MPS)的主要原因。本研究旨在对广西陆川猪Mhp进行病原分离鉴定及其P97 R1区基因序列分析,为进一步了解和研究广西陆川猪Mhp的病原特性、流行病学以及该病的综合防制提供理论依据。方法:(1)采集广西陆川猪疑似患有MPS的肺组织,常规Mhp病原分离培养后进行涂片染色和PCR方法鉴定,筛选阳性病料;(2)常规病理组织切片,HE染色观察组织病理学变化特征。采用免疫组织化学方法对组织中病原分布进行定位;用原位杂交技术对组织中Mhp的核酸进行检测、定位;(3)参考Mhp基因组序列设计扩增P97基因R1区片段的一对引物,提取基因组DNA,PCR扩增黏附因子P97基因R1区,对PCR产物进行测序,并将广西陆川猪Mhp不同地方流行毒株的P97基因R1区序列的碱基组成和推导的氨基酸序列进行比较。结果:(1)采用液体培养方法成功从疑似患有MPS的广西陆川猪肺组织中分离到M11p野毒株,液体培养物通过瑞氏一吉姆萨染色镜检,观察到环状、两极状等多形态的菌体;PCR检测液体培养物能扩增出目的片段;(2)Mhp阳性肺的病理组织HE染色结果显示,病变肺组织呈现典型的间质性肺炎以及融合性支气管肺炎变化,肺泡隔增厚,间质有大量炎性细胞增生和浸润,肺泡腔狭窄、缩小。细支气管管壁增厚,上皮细胞脱落,大量炎性细胞渗出,细支气管周围淋巴小结样增生。免疫组化结果显示,Mhp阳性信号主要分布在细支气管管壁柱状上皮细胞胞质和黏膜,管腔中的分泌物以及周围的炎性细胞胞浆中:原位杂交结果显示,Mhp DNA主要分布在气管和支气管黏膜表面。(3)广西陆川猪Mhp P97 R1区基因的碱基组成和推导的氨基酸序列比较结果显示,所扩增的15株广西陆川猪Mhp毒株与3株广西二元杂商品猪Mhp毒株的P97基因R1区多处碱基发生变异,通过推导氨基酸序列统计P97基因R1区氨基酸重复基序(AAKPV/E)数为9-18,平均值为12,TN重复数在1-4,发现广西陆川猪Mhp流行毒株变异使其的毒力和黏附能力增强。结论:本研究成功从疑似患有MPS的广西陆川猪肺组织中分离到Mhp野毒株,并定位了肺组织中Mhp病原菌和核酸的分布情况:此外,15株广西陆川猪Mhp毒株与3株广西二元杂商品猪的Mhp毒株的P97基因R1区序列分析、比较结果表明,广西陆川猪MhpP97基因R1区发生变异。
【学位授予单位】:广西大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:S852.62

中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026