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《广西大学》 2004年
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辣椒CTOM1基因的克隆与基因沉默表达质粒的构建

张会敏  
【摘要】:利用5’RACE和3’RACE方法从辣椒中克隆到CTOM1基因,其全长cDNA共1244个碱基对,编码一个由282个氨基酸组成的六次跨膜蛋白。CTOM1与拟南芥TMV寄主因子基因AtTOM1在核苷酸水平有65.2%的同源性,在氨基酸水平上有74.9%的同源性;与番茄CMV寄主因子基因TTOM1在核苷酸水平上有81.7%的同源性,在氨基酸水平上有91.7%的同源性,表明CTOM1很可能也是辣椒RNA病毒的寄主因子基因。构建了研究该基因功能的三种质粒:基于CTOM1基因的近5’端序列的反义RNA植物表达质粒;基于CTOM1全长cDNA的pTV00:CTOM1病毒表达质粒和基于CTOM1 cDNA片段的RNAi表达质粒。用三亲结合方法将上述质粒导入农杆菌,并用于转化辣椒“天等一号”和“桂研99”外植体,获得转CTOM1 RNAi表达质粒阳性“天等一号”转基因植株22株、转CTOM1反义RNA载体抗卡那霉素小苗12株和转CTOM1反义RNA质粒的“桂研99”抗卡那霉素小苗19株。用烟草花叶病毒接种转CTOM1 RNAi阳性植株,在观察期15天内,未观察到症状表现,而非转基因植株在第9天已显示明显症状,表明CTOM1功能的干扰能导致植株抗病毒能力的提高,暗示CTOM1可能是一个与烟草花叶病毒在辣椒中复制与维持相关的寄主因子基因。
【学位授予单位】:广西大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:Q786

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