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《广西大学》 2005年
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中国苏铁科(Cycadaceae)部分种类的RAPD分析及其亲缘关系的研究

农保选  
【摘要】:苏铁科植物(Cycadaceae)是现存最古老的一类种子植物,具有重要的学术价值与经济价值。本研究建立了苏铁科植物RAPD的反应体系,进而用于探讨苏铁科苏铁属21个不同种类的亲缘关系。研究结果表明: 1.用改良的CTAB法能够提取浓度与纯度都较高的苏铁科植物基因组DNA,且经RAPD扩增后能取得比较理想的扩增效果。 2.优化了RAPD反应体系,确定了适合于苏铁RAPD-PCR的反应体系:20ül反应体系,其中含超纯水9.04 ül,10×TaqBuffer2.0ül,25mmol/LMg~(2+)1.6ül,2.5mmol/L dNTP 1.6ül,10ümol/L随机引物0.6 ül,5U/ül Taq DNA聚合酶0.2ül,10ng/ül模板DNA 5ül。确定了适合的PCR扩增程序为:94℃预变性5min;94℃变性30sec,37℃退火40sec,72℃延伸110sec,共35个循环;72℃延伸7min。反应产物4℃保存。 3.RAPD分析结果表明:各种间的遗传相似系数在0.2903-0.7016之间,各种间的遗传相似系数跨越的幅度较大,表明苏铁科苏铁属内种间的遗传背景十分复杂。所有供试种类中,多裂苏铁(C.multifida)与叉孢苏铁(C.segmentifida)的遗传相似系数最大,为0.7016,表明它们之间的亲缘关系最近。隆林苏铁(C.longlinensis)与多羽叉叶苏铁(C.multifromlis)的遗传相似系数最小,为0.2903,表明它们之间的亲缘关系最远。所有供试材料中,滇南苏铁(C.diannanensis)不同性别的雌雄类群之间的相似系数最大,为0.9098,聚类时最先聚在在一起。聚类分析结果基本反应了苏铁科苏铁属各个种之间的亲缘关系,证明了RAPD用于苏铁科苏铁属种间亲缘关系分析的有效性。
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