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利用微生物生产胆固醇氧化酶的研究

赵芳  
【摘要】: 胆固醇氧化酶(EC1.1.3.6)在食品加工、医疗监测、生物抗虫等方面作用日益受到人们的重视,并且显示出巨大应用潜力。 本文从腐败的鸡蛋黄中筛选获得一株产胞内胆固醇氧化酶的菌株X5,通过形态学、生理生化条件和16srRNA鉴定,确定该菌为类芽孢杆菌,命名为Paenibacillus sp X5。考察其破壁条件,得出超声波法和反复冻融法为最佳破壁方法,但具体应用还需要根据试验性质而定。 通过对菌株Paenibacillus sp X5进行紫外和~(60)Co诱变,得到一株遗传稳定性好的高产菌株Paenibacillus spX534。通过单因素实验和正交实验对Paenibacillus spX534进行发酵条件的研究,确定发酵培养基的最佳组成为:蔗糖2%,大豆粉汁2%,MgSO_4·7H_2O 0.1%,MnSO_4 0.02%,土豆汁30%,K_2HPO_4·3H_2O 0.4%,Tween—800.1%。最佳发酵条件为:起始pH8,培养温度34℃,装液量为250mL的三角瓶中装入40ml发酵培养基,接种量8%,摇瓶转速180r/min,发酵时间50h。在上述条件下胆固醇氧化酶酶活达到412U/L。 对该酶的部分酶学性质研究得出:该酶作用的最适温度为60℃;最适pH为7.5;温度在40-50℃、pH在7.0-8.0的范围内时,该酶均能保持较好的稳定性。酶对pH的敏感程度比对温度的高。Mn~(2+)对酶活有很大促进作用,而Hg~(2+)则对酶活有着明显的抑制作用。


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