利用微生物生产胆固醇氧化酶的研究

【摘要】： 胆固醇氧化酶(EC1．1．3．6)在食品加工、医疗监测、生物抗虫等方面作用日益受到人们的重视，并且显示出巨大应用潜力。 本文从腐败的鸡蛋黄中筛选获得一株产胞内胆固醇氧化酶的菌株X5，通过形态学、生理生化条件和16srRNA鉴定，确定该菌为类芽孢杆菌，命名为Paenibacillus sp X5。考察其破壁条件，得出超声波法和反复冻融法为最佳破壁方法，但具体应用还需要根据试验性质而定。 通过对菌株Paenibacillus sp X5进行紫外和~(60)Co诱变，得到一株遗传稳定性好的高产菌株Paenibacillus spX534。通过单因素实验和正交实验对Paenibacillus spX534进行发酵条件的研究，确定发酵培养基的最佳组成为：蔗糖2％，大豆粉汁2％，MgSO_4·7H_2O 0.1％，MnSO_4 0.02％，土豆汁30％，K_2HPO_4·3H_2O 0.4％，Tween—800.1％。最佳发酵条件为：起始pH8，培养温度34℃，装液量为250mL的三角瓶中装入40ml发酵培养基，接种量8％，摇瓶转速180r／min，发酵时间50h。在上述条件下胆固醇氧化酶酶活达到412U／L。 对该酶的部分酶学性质研究得出：该酶作用的最适温度为60℃；最适pH为7.5；温度在40-50℃、pH在7.0-8.0的范围内时，该酶均能保持较好的稳定性。酶对pH的敏感程度比对温度的高。Mn~(2+)对酶活有很大促进作用，而Hg~(2+)则对酶活有着明显的抑制作用。