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《广西大学》 2007年
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绿色木霉纤维素酶基因的克隆及表达

刘一  
【摘要】: 纤维素是地球上分布最广、含量最丰富的生物质,纤维素酶能够水解纤维素为葡萄糖,为发酵,食品和能源提供原料。传统的原始菌发酵产纤维素酶已不能满足生产的需要,怎样用基因工程的手段来改造和利用纤维素酶,是摆在我们面前一个极富挑战的课题。 本论文以绿色木霉(Trichoderma viride)AS3.3711为出发菌株,利用其RNA反转录得到的cDNA为模板,PCR扩增Trichoderma viride的不含信号肽的外切葡聚糖酶基因(cbhⅡ)以及含信号肽的外切葡聚糖酶基因(cbhⅡ)和内切葡聚糖酶基因(egⅢ),回收的DNA片段分别与表达质粒pSE-380和pYES2连接,获得重组质粒pSE-cbhⅡ与pYES-cbhⅡ及pYES-egⅢ.将重组质粒pSE-cbhⅡ导入大肠杆菌BL21(DE3),pYES-cbhⅡ和pYES-egⅢ导入酿酒酵母INVScⅠ中。诱导表达后,进行SDS-PAGE分析。结果表明大肠杆菌重组子有特征蛋白条带出现,酿酒酵母重组子中则未检测到目的条带。利用DNS糖化力法测定大肠杆菌和酿酒酵母重组子BL21/pSE-cbhⅡ,INVScⅠ/pYES-cbhⅡ及INVScⅠ/pYES-egⅢ表达产物的酶活力,BL21/pSE-cbhⅡ和INVScⅠ/pYES2-cbhⅡ的粗蛋白中未检测到外切葡聚糖酶的酶活力,INVScⅠ/pYES-egⅢ中的内切葡聚糖酶活力为0.03 U/ml。最佳诱导时间为60h,对酿酒酵母表达系统表达的内切葡聚糖酶EGⅢ生物学特性研究显示,它的最适反应温度为60℃,最适反应pH值为4.8。
【学位授予单位】:广西大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:Q78

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