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《广西大学》 2007年
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利用微生物生产胆固醇氧化酶的研究

王发合  
【摘要】: 胆固醇氧化酶是胆固醇代谢的关键酶之一,它催化胆固醇氧化及异构化反应,生成胆甾-4-烯-3-酮和过氧化氢。胆固醇氧化酶被广泛应用于临床诊断、制药工业、食品加工及生物农药等方面,具有广泛的应用前景。 本研究通过紫外+LiCl、紫外+光敏试剂处理类芽孢杆菌X534,筛选出一株酶活较高的诱变菌株XUM10,酶活为221.20 U.L~(-1),比出发菌株提高了近2.5倍。 此外对发酵工艺进行了改变,首先对突变株产酶条件进行了优化,确定了合适的产酶培养基及其组成,并对发酵温度、溶氧、pH等进行优化。在温度30℃,pH值为8,转速200r/min,摇瓶发酵50h,发酵液酶活达到275.41 U.L~(-1)。 通过旋转蒸发浓缩、蔗糖浓缩、DEAE离子交换层析、SephadexG-75凝胶柱层析对该酶进行纯化,纯化后的浓缩酶液的酶活力达到6.83U/mg。通过SDS-PAGE电泳,测定酶的分子量为58KDa,以胆固醇为底物的米氏常数3.3×1O~(-5)mol/L,最大反应速度为4.60mmol/(L·min),显示了与底物良好的亲和性,从薄板层析结果看,转化产物单一,为有药用价值的胆甾-4-烯-3-酮。 比较多种固定化酶的方法,最终确定固定化酶的材料为PVA+H_3BO_3+Na_2CO_3。并确定固定化酶最适温度为60℃,最适pH为7.0,其热稳定性及pH稳定性相对与游离酶有了很大程度的提高,通过电镜扫描观察固定化内部为小而密的多孔网状结构,使酶液很好的包埋在固定化材料内。通过固定化酶对牛奶中胆固醇的转化率试验,可知最高转化率为75.64%。
【学位授予单位】:广西大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:TQ925

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 黄寅;胆固醇氧化酶高产菌株的选育及酶学性质初步研究[D];安徽工程大学;2010年
2 赵超;产胆甾-4-烯-3-酮菌株的筛选、鉴定及其发酵优化[D];四川师范大学;2010年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前9条
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中国硕士学位论文全文数据库 前2条
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【共引文献】
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8 王素英;高朋辉;马熟军;;不同诱变方法对青霉TS406Y胆固醇氧化酶活性的影响[J];河北师范大学学报(自然科学版);2008年04期
9 秦佳;王玉霞;李春萍;马光辉;;快速膜乳化法制备温敏微球及其固定胰蛋白酶[J];过程工程学报;2012年03期
10 王龙刚;梁爽;王武;;三相分离甾短杆菌胆固醇氧化酶及其性质[J];华东理工大学学报(自然科学版);2007年02期
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1 关海滨;董至恒;;降胆固醇乳酸菌的筛选[A];科技创新与经济结构调整——第七届内蒙古自治区自然科学学术年会优秀论文集[C];2012年
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1 赵春海;产油脂酵母菌的遗传改良和油脂的发酵生产[D];中国海洋大学;2011年
2 孙艳;点突变改造提高胆固醇氧化酶耐温性的研究[D];江南大学;2011年
3 武东亮;融合杀虫基因的分子设计、构建及表达研究[D];中国农业科学院;2000年
4 张锐;胆固醇氧化酶基因的克隆、融合及在大肠杆菌和植物中的表达[D];中国农业科学院;2001年
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6 牛天贵;食品中胆固醇微生物转化机理与应用研究[D];中国农业大学;2000年
7 张桂芬;转基因Bt棉对棉田害虫和天敌作用机理的研究[D];中国农业科学院;2003年
8 林彦良;甾体化合物微生物转化的研究[D];山东大学;2009年
9 符家平;苎麻转P_(SAG12)-IPT基因和B_t基因的分子检测及性状考察[D];华中农业大学;2009年
10 杨英;微生物转化植物甾醇制备甾体药物关键中间体研究[D];合肥工业大学;2009年
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1 黄寅;胆固醇氧化酶高产菌株的选育及酶学性质初步研究[D];安徽工程大学;2010年
2 李闯;重组胆固醇氧化酶表达的发酵优化[D];江南大学;2010年
3 李霞;植物乳杆菌M1-UVs29酸奶的研制及其功能性评价[D];黑龙江八一农垦大学;2011年
4 李颖;复合菌种发酵生产低胆固醇鹅肉香肠的研究[D];黑龙江八一农垦大学;2011年
5 姜华;降胆固醇功能乳酸菌的筛选及其特性的研究[D];南京农业大学;2010年
6 王珣;Bt、CPTI双价杀虫基因对水稻遗传转化的研究[D];东北农业大学;2003年
7 李荣贵;有机溶剂/水两液相体系中甾体微生物C_(1,2)脱氢研究[D];浙江工业大学;2003年
8 银国利;胆固醇氧化酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[D];西北农林科技大学;2003年
9 赵晓莉;柿叶黄酮类化合物提取分离研究[D];西北工业大学;2005年
10 胡新平;磷脂酶A_2制备功能性蛋黄粉的研究[D];江南大学;2005年
【同被引文献】
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1 黄寅;葛飞;陶玉贵;汤斌;李英;;胆固醇氧化酶高产菌株的诱变选育及产酶条件优化[J];安徽工程科技学院学报(自然科学版);2009年04期
2 桂琳;葛飞;黄寅;;比色法测定细脚拟青霉胞内甘露醇及羟自由基清除率[J];安徽农业科学;2009年19期
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4 葛飞;桂琳;陶玉贵;朱龙宝;黄寅;;大豆豆渣粗提物清除DPPH自由基活性及其协同效应的研究[J];大豆科学;2010年01期
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7 赵芳;梁海秋;杨辉;王发合;周河治;;高活性胆固醇氧化酶产生菌出发菌株的筛选[J];现代食品科技;2006年02期
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中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 张锐;胆固醇氧化酶基因的克隆、融合及在大肠杆菌和植物中的表达[D];中国农业科学院;2001年
2 牛天贵;食品中胆固醇微生物转化机理与应用研究[D];中国农业大学;2000年
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1 李清;Rhodococcus equi 4-2胆固醇氧化酶的发酵、纯化及初步应用[D];中国农业大学;2004年
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6 王巍;具有降胆固醇功能益生菌的筛选[D];黑龙江大学;2009年
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【二级参考文献】
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【相似文献】
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2 柯为;胆固醇氧化酶研究的新进展[J];中国生物工程杂志;1987年05期
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4 赵芳;;胆固醇氧化酶的研究进展[J];江西食品工业;2008年02期
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6 赵芳;;一株胆固醇氧化酶产生菌株的筛选和鉴定[J];食品工程;2008年02期
7 银国利,张锐,郭三堆,陈毓荃,牛天贵;胆固醇氧化酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[J];西北农业学报;2003年03期
8 苏起恒;法幼华;;节杆菌82菌株胆固醇氧化酶的产生条件[J];微生物学报;1991年06期
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10 范孝用;石菲菲;梁佩兰;王杰;胡常英;魏亚新;李培英;刘志恒;张亚美;阮继生;;诺卡氏菌2031胆固醇氧化酶的制备及其性能[J];微生物学报;1986年01期
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2 牛天贵;食品中胆固醇微生物转化机理与应用研究[D];中国农业大学;2000年
3 周礼芹;灰色链霉菌ATCC14811胆固醇氧化酶基因的分子生物学研究[D];华中农业大学;1999年
4 时巧翠;碳纳米管及其复合材料在电分析化学中的应用研究[D];浙江大学;2006年
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7 郭慢丽;碳纳米管基化学生物传感研究及细胞传感界面的构建[D];湖南大学;2007年
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1 黄寅;胆固醇氧化酶高产菌株的选育及酶学性质初步研究[D];安徽工程大学;2010年
2 李闯;重组胆固醇氧化酶表达的发酵优化[D];江南大学;2010年
3 陈亦;胆固醇氧化酶亲和纯化及酶稳定性研究[D];江南大学;2013年
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5 李清;Rhodococcus equi 4-2胆固醇氧化酶的发酵、纯化及初步应用[D];中国农业大学;2004年
6 付娟;胆固醇氧化酶的异源表达和应用研究[D];山东大学;2011年
7 高朋辉;胆固醇氧化酶的分离纯化及酶学性质的研究[D];天津商业大学;2008年
8 张建;胆固醇氧化酶产生菌的筛选与鉴定[D];齐齐哈尔大学;2012年
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10 叶德萍;胆固醇氧化酶产生菌Enterobacter sp.的筛选及其酶分离纯化的研究[D];四川师范大学;2008年
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