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《广西大学》 2006年
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鸡蛋蛋黄蛋白质制备降血压肽的研究

廖丹葵  
【摘要】: 血管紧张素转化酶在血压调节中具有双重的作用,它将无催化活性的血管紧张素Ⅰ转化为具有活性的血管紧张素Ⅱ,同时,它还可催化降压物质舒缓激肽分解从而导致血压升高。食品蛋白质中存在着活性肽,其中对血管紧张素转化酶具有抑制作用的活性肽(降血压肽)的研究在国内外尤其引人注目,它可通过酶水解食品蛋白质而获得。 采用鸡蛋蛋黄蛋白质为原料,经超临界CO_2-乙醇萃取出蛋黄油和卵磷脂纯化蛋黄蛋白质,得到含量为74.68%的蛋黄蛋白质,蛋白质含量较传统的溶剂提取法提高了24%。经SDS—PAGE法测定,得蛋黄蛋白主要由35kDa、40kDa、67kDa和100kDa以上分子量的蛋白质组成。 用12种蛋白酶酶解蛋黄蛋白质,结果显示所用酶水解产物对ACE皆具有抑制作用;采用体外保温抑制实验将其中活性较好的6种酶解产物进行筛选,确定了产物对ACE的抑制类型,并筛选出酶L为制备蛋黄降血压肽的酶类,其水解产物的IC_(50)为1.19mg/mL。 考察了各因素对酶解的影响,得到蛋黄蛋白质酶解作用最适水解时间为300min、温度为45℃、pH为9.5、底物浓度为60g/L、加酶量为0.42g/kg,此时蛋黄蛋白质水解度为17.2%,氮溶解指数为89.09%,平均肽链长度为6.5。建立了酶解蛋黄蛋白质的水解动力学模型,得到其动力学方程为r=(270.2E_0-0.4125S_0)exp[-0.23(DH)],动力学模型与实验结果吻合较好。 蛋黄水解液经活性炭脱色、采用截留分子量为10K和3.5K的超滤膜进行分离,所得蛋黄降血压肽超滤液对ACE抑制活性明显提高;用D61大孔阳离子交换树脂对分子量小于3.5kDa的水解液进行分离,确定了离子交换分离降血压肽的适宜条件为:采用pH4.1、浓度为0.05 mol/L的乙酸钠缓冲溶液+1.0mol/L的NaCl溶液,梯度洗脱,上样量为25mg/mL(湿树脂体积),洗脱速度为0.5mL/min,在此条件下,肽的得率与活性回收率分别为67.2%和73.59%。 用Sephadex G-15对离子交换树脂分离出的穿透峰和洗脱峰分别进行分离和纯化,用RP-HPLC分离纯化最大活性组分峰,用RP-HPLC和高效毛细管电泳(HPCE)进行纯度鉴定,经薄层色谱分析和电喷雾质谱鉴定表征了降血压肽EY-1的结构序列为Leu-Tyr-Pro。 蛋黄水解液的功能研究实验表明,蛋黄水解液有较好的耐热、耐酸稳定性,并发现不同分子量范围的水解产物具有较好的抗油脂氧化性能。与肠道酶作用结果表明,蛋黄水解液与胃蛋白酶作用后其IC_(50)值由1.19mg/mL变为0.94mg/mL,与胰蛋白酶作用后产物的IC_(50)则增至3.19mg/mL,活性有一定的损失,并经毛细管电泳肽谱图得到证实。
【学位授予单位】:广西大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:TQ464.7

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【引证文献】
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【同被引文献】
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【二级引证文献】
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8 高静;发酵豆制品保健功能多[N];农村医药报(汉);2007年
9 邹远东;补肽四问[N];新华每日电讯;2003年
10 ;巴氏杀菌乳和UHT灭菌乳中复原乳的鉴定[N];农民日报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 廖丹葵;鸡蛋蛋黄蛋白质制备降血压肽的研究[D];广西大学;2006年
2 张宇昊;花生短肽制备及其功能活性研究[D];中国农业科学院;2007年
3 饶国华;利用低次烟叶蛋白制备生物活性肽及烟用香精的研究[D];华南理工大学;2006年
4 林伟锋;可控酶解从海洋鱼蛋白中制备生物活性肽的研究[D];华南理工大学;2003年
5 刘亭君;基因重组大肠杆菌发酵糖枫木片热水抽提物水解液转化合成生物乙醇的研究[D];华南理工大学;2010年
6 郭善广;猪血血红蛋白酶解及其酶解产物抗氧化活性研究[D];华南理工大学;2007年
7 任国谱;高蛋白肽奶粉的研制[D];华东师范大学;2005年
8 余勃;枯草芽孢杆菌发酵豆粕生产大豆活性多肽的研究[D];南京农业大学;2006年
9 杨远帆;利用蓝圆鲹和罗非鱼制备海鲜调味基料的研究[D];浙江大学;2009年
10 曹辉;大米蛋白酶法制备抗氧化肽的研究[D];江苏大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王茵;紫菜降血压肽的酶法制备及降压效果的研究[D];福建农林大学;2009年
2 于阳阳;东北核桃楸种仁蛋白提取及降血压肽制备的研究[D];东北林业大学;2012年
3 王洪涛;海参肽的酶法制备工艺及抗疲劳活性研究[D];烟台大学;2007年
4 赵桂华;中国林蛙肉的生物酶解、营养分析及功能评价的研究[D];辽宁师范大学;2008年
5 万顺刚;蛋黄ACE抑制肽分离纯化研究[D];广西大学;2007年
6 马艳梅;林蛙油酶解条件的优化及其蛋白水解营养液的研制[D];吉林农业大学;2007年
7 王志国;重组基因工程菌制备降血压肽及其降血压活性检测[D];吉林大学;2012年
8 孙健;牛乳蛋白ACEIP酶解工艺及发酵乳产品研究[D];扬州大学;2006年
9 徐思源;乳清蛋白降压肽的制备及其功能研究[D];东北林业大学;2007年
10 朱晓丽;油菜蜂花粉中活性肽的制备及其抗氧化性的研究[D];中国农业科学院;2007年
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