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《广西大学》 2007年
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转基因体细胞克隆水牛与广西水牛的遗传特性研究

崔奎青  
【摘要】: 首先分离培养水牛胎儿成纤维细胞,并检测细胞传代培养过程中的核型稳定性和支原体污染情况。结果发现,组织块法和胰酶消化法均可从水牛胎儿皮肤组织获得大量高活力细胞,15代以前的水牛胎儿成纤维细胞生长良好。分别对体外培养5代、15代、25代和30代的胎儿成纤维细胞染色体分析结果显示,核型的正常率随体外传代增加呈下降趋势,但各代细胞之间差异不显著(P>0.05),核型正常比率均在75%以上。设计两对PCR引物对第5、15、25和30代细胞的支原体检测污染情况进行了检测,结果检测细胞样本和阴性对照均为阴性,说明培养到30代以内的水牛胎儿成纤维细胞没有发生支原体污染。上述结果表明,在现有实验条件下水牛胎儿成纤维细胞能进行稳定传代培养,可满足体细胞核移植与转基因操作的需要。 在此基础上,对影响水牛胎儿成纤维细胞在极低细胞接种密度条件下生长增殖和细胞集落形成的各种因素进行了系统的研究。结果发现,低密度接种的水牛胎儿成纤维细胞总体细胞集落形成率低于20%;在培养液中添加适宜浓度的胰岛素对水牛胎儿成纤维细胞的增殖具有显著的促进作用;培养液中添加不同浓度的细胞条件培养液,能明显改善细胞的增长;进口血清比自制血清更有利于提高细胞集落形成率;使用多聚赖氨酸做生长介质可以让细胞集落形成率增加,而琼脂和明胶的作用相反。这些研究结果表明,低密度接种的水牛胎儿成纤维细胞集落形成率较低;在培养液中添加胰岛素、条件培养液、进口血清及以多聚赖氨酸为细胞生长介质,可以提高水牛胎儿成纤维细胞集落形成率。 对电穿孔法和阳离子脂质体法转染水牛胎儿成纤维细胞的条件进行系统摸索,获得了较好的DNA转染参数。电穿孔法转染时脉冲时间为15ms,电场强度为40~50V/mM时,细胞的死亡率处于20%~50%之间,比较适合外源DNA转入水牛胎儿成纤维细胞。将脂质体与DNA的比例控制在8μL:2μg,可获得较高的转染率。相同培养条件下,脂质体法比电穿孔能获得更多的转基因抗性细胞集落,转染DNA的纯度和细胞的状态也明显影响脂质体法的转染效率。 用含有GFP基因的线性化载体pCE-EGFP-IRES-Neo-dNdB通过lipofectamine~(TM2000)转染水牛胎儿成纤维细胞,G418筛选2周后挑取抗性细胞集落扩大培养,对转染外源基因的抗性细胞系的生物学特性进行了分析。结果发现,经过G418筛选后细胞增殖活力下降,细胞爬片HE染色后可看到细胞形态发生变化,凋亡分析发现部分抗性细胞表现出早期凋亡征状,但染色体核型正常率与正常组相比差异不明显。这些结果表明,转染本身或随后的筛选过程会对细胞造成一定的损害。 从绵羊基因组扩增得到β-casein基因启动子区到第二内含子区4.1kb的5调控序列,从人基因组克隆得到人血小板生成素(TPO)基因长5.5kb的基因组序列,然后将启动子和TPO定向插入到ploxp骨架上。包含CMV超级启动子的GFP片段从质粒pCE-EGFP-IRES-Neo-dNdB中获得,并定向连接到ploxp-CN-TPO中。经酶切、PCR鉴定,成功获得了包含人TPO基因、绵羊β-casein启动子、GFP标记基因和新霉素抗性基因等长达20kb的转基因载体ploxp-EGFP-CN-TPO。通过脂质体介导将构建好的载体线性化后导入水牛胎儿成纤维细胞中,G418筛选后得到35个抗性细胞集落,扩大培养后其中4个表达GFP绿色荧光。经PCR鉴定目的基因整合的完整性,发现1个为完整转EGFP-CN-TPO基因阳性细胞集落。通过显微操作、电融合的方法将阳性细胞移入体外成熟去核的水牛卵母细胞内构建重组胚,囊胚率显著低于对照组(P<0.05),说明供体细胞经过基因转染及长期体外培养筛选对克隆胚胎的早期发育有明显影响;对转基因体细胞构建核移植重组胚外源基因表达进行检测发现,绿色荧光蛋白开始表达于4细胞以后的重组胚,说明转染的外源基因能够在胚胎早期发育过程中表达。 为研究广西沼泽水牛核基因组的多态性,采用23对荧光标记微卫星引物,对随机抽取的60个广西本地水牛样本进行了PCR检测,然后联合应用具有多态性的位点进行培养细胞的遗传鉴定。结果发现,23对引物中,有19对可以获得特异性产物且存在多态,平均有效等位基因数为4.0189,基因座ILSTS086含有13个等位基因;各微卫星基因座的平均杂合度变化范围为0.1852~0.4722,ILSTS019基因座平均杂合度最高(0.4722),而ILSTS017平均杂合度最低(0.1852);群体基因平均多态信息含量(PIC)为0.6639,19个标记中有18个PIC大干0.5,属高度多态位点。联合应用19个位点对培养细胞的基因组来源进行同一分析,证明培养细胞与供体水牛基因型完全相同,培养细胞基因组来源于供体水牛。研究结果表明,18个微卫星标记可进一步用于水牛亲缘关系的分析研究。 为研究广西沼泽型水牛线粒体D-loop区DNA的多态性,比较分析沼泽型水牛与河流型水牛之间的差异,本研究对26头广西本地水牛、8头贵州贵阳水牛、11头广西水牛与河流型水牛杂交后代、9头尼里拉菲和12头摩拉水牛(共4个品种66头水牛个体)的线粒体全长D-loop序列进行了扩增测序。66头水牛912bp的D-loop多重序列比较结果发现了147个多态位点,共形成58个单体型,其中中国沼泽型水牛与河流型水牛后裔单体型明显分成两簇;以牛为外群通过NJ、ML和贝叶斯方法构建的单体型进化树显示,沼泽型与河流型水牛分成明显两大支,河流型水牛聚在一起,而在沼泽型水牛内部又分成两个侧支;观察单体型之间的遗传关系与距离的median joining network网络分析产生三个区,与进化树分析结果一致;66头水牛D-loop区序列的碱基错配分布分析表明,水牛群体在历史上发生两次独立的群体扩增事件。为进一步验证实验结果,我们从genebank上下载了211条水牛D-loop序列与我们得到的序列整合在一起进行分析,在共有序列878bp区域中,包含了158个多态位点,共获得129个单体型;以牛为外群的进化树分析与单体型网络分析表明,沼泽型水牛分成两簇,所有的河流型水牛聚集成一紧密的簇,与进化树结果一致;碱基错配分布分析结果呈现两个明显的峰,进一步推断水牛群体在历史上发生过两次大的群体扩增。根据上述结果推断:沼泽型水牛与河流型水牛来自不同的家养化事件,沼泽型水牛起源于中国,其祖先可能存在两个基因池。
【学位授予单位】:广西大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S823

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【引证文献】
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1 崔奎青;刘庆友;李秀林;王志强;石德顺;;基于线粒体控制区变异的水牛群体遗传分析[J];华南农业大学学报;2013年01期
【参考文献】
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1 张于光,李迪强,饶力群,肖启明,刘丹;东北虎微卫星DNA遗传标记的筛选及在亲子鉴定中的应用[J];动物学报;2003年01期
2 张亚平,王文,宿兵,范志勇,张和民,何廷美;大熊猫微卫星DNA的筛选及其应用[J];动物学研究;1995年04期
3 崔奎青,刘庆友,石德顺,李海涛,汤刚彬;水牛β-酪蛋白5′启动区的克隆和序列分析[J];广西农业生物科学;2005年02期
4 赵迪诚,龙志高,郑多,戴和平,夏昆;直接消化法分离单克隆贴壁细胞[J];湖南医科大学学报;2002年06期
5 毛永江;常洪;杨章平;张柳;许明;常国斌;;盱眙水牛遗传多样性及系统地位的研究[J];家畜生态学报;2006年01期
6 周江,程萱,孙彦洵,黄培堂,黄翠芬,杨晓;基于Cre/LoxP系统的Smad2条件基因打靶小鼠的建立[J];中国科学(C辑:生命科学);2001年04期
7 安晓荣,苟克勉,关宏,侯健,林爱星,陈永福,朱士恩,曾申明,田见晖;卵丘细胞核移植技术生产克隆牛犊[J];中国科学(C辑:生命科学);2002年01期
8 张运海,潘登科,孙秀柱,孙国杰,王晓波,刘晓辉,李燕,戴蕴平,李宁;利用体细胞核移植技术生产表达绿色荧光蛋白的猪转基因克隆胚胎[J];中国科学C辑:生命科学;2005年05期
9 徐静娟;离体细胞的培养条件[J];江南大学学报;2002年01期
10 于元松,岳奎忠,孙兴参,周佳勃,韩毅,蒋惠男,谭景和;山羊耳皮肤成纤维细胞的传代培养及活力分析[J];解剖学报;2002年05期
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1 李湘萍;绵羊体细胞myostatin基因敲除及定点整合mAAT基因的初步研究[D];广西大学;2002年
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1 李海涛;TPO基因乳腺表达打靶载体构建的初步研究[D];广西大学;2003年
2 王朝锋;中国8个黄牛品种线粒体DNA遗传多样性研究[D];西北农林科技大学;2005年
【共引文献】
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1 赵俊;王兴满;胡勇;陈敬贤;王明丽;;动物细胞培养物中支原体污染的检测( 摘要)(英文)[J];Animal Husbandry and Feed Science;2009年Z1期
2 ;Conservation and Utilization of Germplasm Resources of Shandong Local Chickens[J];Animal Husbandry and Feed Science;2009年Z3期
3 顾拥建;夏义忠;陈启康;沙文锋;戴晖;朱娟;;狼山鸡资源利用现状及发展对策[J];安徽农业科学;2008年06期
4 孙志宏;邱瑞;李延清;周茂林;;哺乳动物核移植研究[J];安徽农业科学;2008年07期
5 张卫红;闫军;冯冲;龙川;张兆旺;潘登科;;运输温度与时间对猪孤雌胚胎发育的影响[J];安徽农业科学;2009年13期
6 康锦丹;尹熙俊;赵明辉;梁爽;刘希;李文学;崔成哲;;利用体细胞核移植技术生产表达红色荧光蛋白的猪转基因克隆胚胎研究[J];安徽农业科学;2011年12期
7 杨慧婷;王洪梅;孙涛;高运东;仲跻峰;何洪彬;;动物转基因研究进展[J];现代农业科技;2011年02期
8 梁红蕾;鲍传和;蒋业林;李翔;陈华良;;中华鳖两个地理种群遗传多样性的ISSR分析[J];安徽农业大学学报;2012年01期
9 史燕,吴孝兵,晏鹏,赵哲;扬子鳄鞣制皮革和鳞片的DNA提取方法[J];动物学报;2004年02期
10 张保卫,魏辅文,李明,吕晓平;大熊猫和小熊猫粪便DNA提取的简易方法[J];动物学报;2004年03期
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1 牟希东;胡隐昌;李小慧;汪学杰;宋红梅;罗建仁;;应用微卫星多态分析美丽硬仆骨舌鱼三个品系遗传结构[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第三卷)[C];2010年
2 陆凤花;石德顺;韦英明;韦精卫;潘红平;杨素芳;;供体细胞来源对水牛体细胞核移植效果的影响[A];第三届广西青年学术年会论文集(自然科学篇)[C];2004年
3 周庆峰;王洪新;王怡薇;符丽娟;单丹;刘鹤;;高糖高胰岛素对去甲肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的影响[A];中国生理学会应用生理学专业委员会暨《中国应用生理学杂志》二十周年纪念大会和学术讨论会论文集[C];2005年
4 李法君;傅洪拓;乔慧;李明爽;;长江流域日本沼虾遗传多样性分析[A];中国工程院第77场工程科技论坛·2008水产科技论坛——渔业现代化与可持续发展论文集[C];2008年
5 李法君;傅洪拓;乔慧;李明爽;;磁珠富集法筛选日本沼虾微卫星序列[A];中国工程院第77场工程科技论坛·2008水产科技论坛——渔业现代化与可持续发展论文集[C];2008年
6 彭华;许尚忠;昝林森;;中国黄牛线粒体DNA ND5基因PCR-RFLP分析[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
7 李彦欣;李宁;;哺乳动物种克隆的研究进展[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
8 黄雅娟;柏学进;李建栋;程明;;牛ntES细胞核在MetaphaseⅡ去核卵中重排及其核移植融合卵的发育[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
9 巴雅斯古楞;冯书堂;;近交系五指山猪胎儿成纤维细胞(PEF)的转基因研究[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
10 张红平;李利;李学伟;;四川黑山羊mtDNA控制区序列变异和系统发生关系研究[A];第十次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2006年
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1 李江南;RNA干扰途径抗猪瘟病毒研究[D];吉林大学;2011年
2 王召锋;牦牛驯化和适应:线粒体基因组证据[D];兰州大学;2011年
3 刘丽;大鼠SCG神经元细胞中PIP5K亚型与PIP_2以及M电流调节关系的研究[D];河北医科大学;2011年
4 冯正平;p38MAPK通路在高糖诱导成骨细胞凋亡中作用的研究[D];重庆医科大学;2010年
5 张东;转fat-1基因体细胞克隆绵羊的研究[D];内蒙古农业大学;2011年
6 赵高平;马体细胞核移植的研究[D];内蒙古农业大学;2011年
7 庞永红;黄牛VEGF、VEGF-B、Flt-1基因遗传变异、克隆与表达研究[D];西北农林科技大学;2011年
8 刘中华;不同茎部长度shRNA对模型小鼠EGFP基因表达干扰的研究[D];西北农林科技大学;2011年
9 何丽;川金丝猴(Rhinopithecus roxellana)遗传学与栖息地分析[D];石河子大学;2010年
10 吕自力;奶牛体细胞的纯化与人COL1α1 cDNA转染及核移植胚胎发育研究[D];石河子大学;2011年
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1 纪志宾;两个山羊品种分子系谱的构建及家系遗传特征分析[D];山东农业大学;2010年
2 刘磊;三疣梭子蟹形态性状对体重影响及微卫星DNA标记进行家系鉴定的研究[D];中国海洋大学;2010年
3 毕金贞;带鱼微卫星标记的开发和微卫星标记在牙鲆选择育种中的应用[D];中国海洋大学;2010年
4 敏云馨;藏獒三种组织成纤维细胞系的构建及生物学研究[D];西北民族大学;2010年
5 程文娟;多花黄精微卫星标记的开发和利用[D];安徽师范大学;2010年
6 陈晓伟;纺织用化学品对体外细胞增殖抑制影响的研究[D];北京服装学院;2010年
7 宫君原;稳定表达人巨细胞病毒蛋白pUL23和pUL49哺乳动物细胞系的建立及鉴定[D];暨南大学;2010年
8 王颜颜;新疆良种驴DGAT2基因部分序列PCR-SSCP多态性与生产性状相关性分析[D];石河子大学;2010年
9 庞杰;应用实时荧光PCR和PCR-DHPLC技术检测饲料中禽、鱼源性成分的研究[D];沈阳农业大学;2010年
10 崔凯;精子载体法制备FecB转基因太行山羊技术的研究[D];河北农业大学;2011年
【同被引文献】
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1 苗永旺;李大林;霍金龙;章纯熙;;中国水牛的遗传多样性与起源分化[J];中国牛业科学;2008年04期
2 徐旺生;中国家水牛的起源问题研究(下)[J];四川畜牧兽医;2005年05期
3 齐国强;昝林森;张桂香;王志刚;王均辉;韩旭;;中国部分地方水牛品种mtDNA D-loop区遗传多样性与起源研究[J];畜牧兽医学报;2008年01期
【二级参考文献】
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1 赵颖海,陈小毅,John R.Arrand;抗端粒酶核酶质粒的构建筛选及其对CNE-2Z细胞增殖与凋亡的影响[J];癌症;2004年01期
2 李明,魏辅文,饶刚,方盛国,冯祚建;非损伤性取样法在保护遗传学研究中的应用[J];动物学报;2001年03期
3 王戎疆;粪便DNA分析技术在动物生态学中的应用[J];动物学报;2001年06期
4 李庆伟,林津,文伟,李文正,曾养志;形目8种鸟类线粒体DNA多态性研究[J];动物学报;1998年01期
5 立岩,佟晓红,宫桂兰,朱凤全;人脐静脉内皮细胞的体外培养、鉴定及形态观察[J];白求恩医科大学学报;2000年01期
6 秦国庆;中国黄牛品种分类及其遗传资源研究进展[J];黄牛杂志;1994年02期
7 涂正超,邱怀;牛属遗传多样性及种间的遗传分化研究进展(下)[J];黄牛杂志;1998年01期
8 李国庆,伍育源,秦志峰,刘运莲;鱼类遗传多样性研究[J];水产科学;2004年08期
9 刘明军;乳蛋白基因结构及乳腺生物反应器研究进展[J];草食家畜;1998年01期
10 武坚,郭志勤;精子介导外源基因转移的研究进展[J];草食家畜;2000年01期
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1 李湘萍;绵羊体细胞myostatin基因敲除及定点整合mAAT基因的初步研究[D];广西大学;2002年
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1 胡福兰,向荣淑,蒋顺时,冯志田,刘灼均;水牛梭状肉孢子虫研究[J];西南农业大学学报;1988年03期
2 刘国霞;褚栋;姜勇;郭强;;琼脂糖凝胶电泳检测烟粉虱Q型与B型微卫星位点BEM23的研究[J];山东农业科学;2010年04期
3 谢文美;苏锐;张晓明;张云生;王小斌;雷初朝;;中国水牛mtDNA D-loop区遗传多样性与母系起源[J];中国牛业科学;2009年05期
4 张照,徐允令,程骏德;水牛体重的估测法[J];畜牧与兽医;1980年03期
5 徐定人;水牛发展现状与潜力[J];农村养殖技术;2002年07期
6 杨白云,章纯熙;中国水牛杂交改良方法[J];农村百事通;2004年23期
7 张光第;水牛有机磷农药中毒的治疗经验[J];湖北农业科学;1975年10期
8 顾毓琅;;为耕牛请命[J];农村经济;1983年12期
9 宁翔;;水牛血泪治验一例[J];中兽医学杂志;1984年01期
10 周世钧,宗耀林,许耀臣,金山,高林;水牛狂犬病的诊断[J];畜牧与兽医;1985年06期
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1 杜联明;张修月;李玉芝;岳碧松;;全基因组微卫星位点搜索软件M-DNA的开发[A];四川省动物学会第九次会员代表大会暨第十届学术研讨会论文集[C];2011年
2 杨文鹏;郑用琏;倪深;吴菁;;玉米O2基因内三个微卫星位点的隐性等位变异(英文)[A];贵州省自然科学优秀学术论文集[C];2005年
3 苏翔;汪桂玲;李家乐;;背角无齿蚌微卫星位点筛选和特征鉴定[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
4 郎侠;;15个微卫星位点在甘肃省6个绵羊品种中的遗传多样性分析[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
5 刘伟;庄海滨;陈瑶;李冬立;郝金平;闫磊;胡胜强;;南口北京鸭7个品系间的遗传关系分析[A];第三届中国水禽发展大会会刊[C];2009年
6 王广策;曾呈奎;;藻菌纲Achlya bisexualis两种不同的丙酮酸激酶基因(pyk1和pyk2)的发现以及全序列测定[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展(上册)[C];2001年
7 孙凤莉;墨锋涛;赵振华;贾青;郑长山;;斯格猪8个微卫星标记位点遗传结构分析[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(下册)[C];2009年
8 郝睿;王恩多;;人类线粒体tRNA~(Leu)(CUN)中存在T-茎的滑动现象[A];第四届全国RNA进展研讨会论文集[C];2005年
9 叶月芳;周韧;;汉族人群caspase-10基因中可能存在一个新的微卫星位点[A];中华医学会病理学分会2005年学术年会论文汇编[C];2005年
10 狄冉;马月辉;关伟军;;中国4个地方绒山羊品种遗传多样性初步分析[A];第十次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2006年
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1 赵开典;水牛的生物学特性[N];云南科技报;2003年
2 张爱林;我国奶水牛潜藏产值2000多亿元[N];湖北科技报;2006年
3 记者 李丽芳;广西建设产业园打造“水牛文化”品牌[N];农民日报;2009年
4 党山 陈国美 尹瑞琴;为德宏水牛产业插上腾飞的翅膀[N];云南科技报;2009年
5 吉林大学边疆考古研究中心 蔡大伟;家马的起源[N];中国文物报;2006年
6 王旺声 丁立凡;福安水牛品种得到全面保护[N];中国畜牧兽医报;2005年
7 彭福宗;水牛踩伤人 牛主承担责任[N];广西政法报;2003年
8 本报记者 陈梦婕通讯员 林志良 陈秋辉;水牛奶用的无限商机[N];福建日报;2007年
9 阚云起;水牛水牛你最最可爱[N];人民政协报;2003年
10 志远;巴西军队招水牛入伍[N];中国国防报;2006年
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1 崔奎青;转基因体细胞克隆水牛与广西水牛的遗传特性研究[D];广西大学;2007年
2 叶中德;RFP13诱导细胞凋亡的调控[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
3 康伟民;蛛网膜下腔出血急性期脑损伤和亚低温保护作用[D];天津医科大学;2006年
4 薛宏斌;运动训练预防小鼠帕金森病的神经生物学机理研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2007年
5 臧莹安;线粒体自由基在快大型黄羽肉鸡PHS防控中的应用[D];南京农业大学;2006年
6 贾利强;水稻侧根发育基因OsSLR1的克隆和功能研究[D];浙江大学;2008年
7 毛永江;中国牛亚科家畜六个群体遗传多样性与遗传分化及其统计方法的研究[D];扬州大学;2006年
8 廖小林;长江流域几种重要鱼类的分子标记筛选开发及群体遗传分析[D];中国科学院研究生院(水生生物研究所);2006年
9 许强华;长兴扬子鳄遗传多样性及重引入工程的可行性研究[D];浙江大学;2005年
10 和雪莲;朱鹮(Nipponia nippon)分子遗传多样性研究[D];北京林业大学;2013年
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1 周慧;藏羚羊的保护遗传学研究[D];湖南农业大学;2005年
2 周襄武;浙江九龙山保护区黑麂种群遗传多样性的微卫星分析[D];浙江师范大学;2008年
3 许明;地方水牛品种遗传分化水平的研究[D];扬州大学;2005年
4 周乐;高原鼠兔地理种群的遗传多样性与遗传分化[D];扬州大学;2006年
5 沈菲菲;震旦鸦雀线粒体全基因组研究及鸦雀类微卫星标记的筛选和特征分析[D];南京师范大学;2008年
6 张筠婷;家族性高胆固醇血症样表型两家系候选基因分析[D];南华大学;2008年
7 罗宏;广西马尔尼菲青霉菌微卫星多态性[D];广西医科大学;2007年
8 李珏;利用非遗传信息和微卫星多态性分析小尾寒羊种群生存力[D];山东农业大学;2008年
9 孙海涛;黑龙江省部分地区梅花鹿微卫星遗传多样性的研究[D];黑龙江八一农垦大学;2009年
10 王跃峰;白头叶猴的个体识别及亲缘关系的研究[D];广西师范大学;2006年
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