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《广西大学》 2008年
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鸡毛松根瘤内生细菌的初步研究

文晓萍  
【摘要】： 本论文从广西十万大山海拔600米处一棵与红豆伴生上百年的鸡毛松根瘤中分离到13株内生细菌,从红豆中分离到3株内生细菌,从移栽回种植的鸡毛松小苗春季根瘤中分离到9株内生细菌,鸡毛松小苗夏季根瘤中分离到20株内生细菌。 本论文分离的42株鸡毛松根瘤内生细菌和3株红豆根瘤内生细菌菌株中,有9株菌株革兰氏染色阳性。有20%的菌株能水解淀粉,20%的菌株水解明胶,87%的菌株能利用柠檬酸盐,全部菌株都能利用葡萄糖、半乳糖、已二酸、D-果糖、阿拉伯糖、蔗糖、乳糖7种碳源和精氨酸、组氨酸、天冬氨酸、磷酸氢二氨、硝酸钾5种氮源。 采用16S rDNA序列分析和16S rDNA PCR-RFLP的方法确定这些菌株的分类地位。所有45株菌株共产生7种遗传图谱类型,聚类分析结果表明,在79%的相似水平上,45株未知菌株构成了7个遗传表观群。16S rDNA序列分析和聚类结果表明鸡毛松根瘤内生细菌与红豆根瘤内生细菌都表现出多样性。菌株个数组成在16S rDNA PCR-RFLP聚类和数值聚类结果基本一致。 16SrDNA全序列分析表明,45株菌株属于6个属,分别为不动杆菌(Acinetobacter sp)、假单胞菌(Pseudomonas sp)、类芽孢杆菌(Paenibacillussp)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas sp)、芽孢杆菌(Bacillus sp)和葡萄球菌属(Staphylococcus sp)。
【关键词】：鸡毛松根瘤内生细菌 分类 多样性 16S rDNA
【学位授予单位】：广西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：Q93
【目录】：
  • 摘要4-6
  • Abstract6-11
  • 第一章 综述11-21
  • 1.1 引言11
  • 1.2 生物固氮11-16
  • 1.2.1 豆科植物结瘤固氮研究现状12-13
  • 1.2.1.1 结瘤基因12-13
  • 1.2.1.2 固氮基因13
  • 1.2.1.3 基因组研究13
  • 1.2.2 非豆科植物结瘤固氮研究13-16
  • 1.2.2.1 非豆科双子叶树木与弗氏放线茵共生结瘤固氮系统13-14
  • 1.2.2.2 非豆科双子叶植物与根瘤茵共生结瘤固氮系统14-15
  • 1.2.2.3 裸子植物与固氮细菌共生结瘤固氮系统15
  • 1.2.2.4 联合固氮系统15-16
  • 1.3 植物内生细菌16-17
  • 1.3.1 植物内生细菌的定义及来源16
  • 1.3.2 植物内生细菌的生物学作用16-17
  • 1.3.2.1 植物内生细菌对植物的促生作用16-17
  • 1.3.2.2 内生细菌的固氮作用17
  • 1.4 多相分类涉及的主要实验技术17-19
  • 1.4.1 表型分群的方法17-18
  • 1.4.1.1 数值分类18
  • 1.4.1.2 全细胞可溶性蛋白电泳18
  • 1.4.1.3 多位点酶电泳18
  • 1.4.2 遗传型分群的方法18-19
  • 1.4.2.1 限制性片段长度多态性RFLP18
  • 1.4.2.2 随机扩增DNA片段的多态性分RAPD18-19
  • 1.4.2.3 DNA同源性分析和G+C mol%的测定19
  • 1.4.2.4 系统发育学研究方法19
  • 1.5 本研究的立题依据及研究意义19-21
  • 1.5.1 鸡毛松概述及其研究进展19-20
  • 1.5.2 本文研究方案和目的意义20-21
  • 第二章 鸡毛松根瘤内生细菌的生理生化研究21-26
  • 2.1 材料与方法21-22
  • 2.1.1 培养基、溶液与试剂21
  • 2.1.2 鸡毛松根瘤的采集地概况与分离纯化21
  • 2.1.3 3-酮基乳糖试验21-22
  • 2.1.4 淀粉水解试验22
  • 2.1.5 明胶水解实验22
  • 2.1.6 柠檬酸盐利用实验22
  • 2.1.7 氮源利用实验22
  • 2.1.8 碳源利用实验22
  • 2.2 结果与分析22-25
  • 2.2.1 分离纯化22-23
  • 2.2.2 3-酮基乳糖试验23
  • 2.2.3 淀粉水解试验23
  • 2.2.4 明胶水解试验23
  • 2.2.5 柠檬酸盐利用试验23-24
  • 2.2.6 碳源利用试验24
  • 2.2.7 氮源利用试验24-25
  • 2.3 讨论25-26
  • 第三章 鸡毛松根瘤内生细菌的16S rDNA PCR-RFLP分析26-40
  • 3.1 材料与方法26-29
  • 3.1.1 供试菌株26
  • 3.1.2 培养基26
  • 3.1.3 溶液、缓冲液和试剂26-27
  • 3.1.4 菌种的培养27
  • 3.1.5 总DNA的快速提取27-28
  • 3.1.6 琼脂糖凝胶电泳28
  • 3.1.7 16S rDNA-PCR扩增28-29
  • 3.1.8 限制性内切酶酶切29
  • 3.1.9 结果处理与分析方法29
  • 3.2 结果与分析29-36
  • 3.2.1 PCR扩增结果29
  • 3.2.2 16S rDNA PCR-RFLP基因图谱分析29-36
  • 3.2.3 16S rDNA的遗传关系分析36
  • 3.3 结果与讨论36-40
  • 第四章 鸡毛松根瘤内生细菌16S rDNA全序列测定及系统发育学分析40-66
  • 4.1 材料与方法40-41
  • 4.1.1 供试菌株40
  • 4.1.2 菌体的培养及总DNA提取40
  • 4.1.3 DNA-PCR扩增40-41
  • 4.1.4 16 4SrDNA的全序列测定41
  • 4.1.5 分析方法41
  • 4.2 结果与分析41-64
  • 4.2.1 测定结果41-43
  • 4.2.2 16S rDNA系统发育树分析43
  • 4.2.3 供试菌株16S rDNA全序列43-64
  • 4.3 讨论64-66
  • 第五章 总结与讨论66-67
  • 5.1 本论文的工作总结66
  • 5.2 本论文的工作讨论66-67
  • 参考文献67-73
  • 致谢73-74
  • 攻读学位期间发表论文情况74

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