收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

广西猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF3基因克隆及分子流行病学调查研究

刘海鹏  
【摘要】: 猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的传染病。该病自发现以来给世界各国养猪业造成了巨大的经济损失。2006年夏秋之季,我国部分地区发生猪“高热病”疫情,对养猪业造成巨大损失,发现了高致病性猪繁殖与呼吸综合征变异病毒,证实疫情主要是由该病毒引起的。 本研究通过RT-PCR技术对2006月年至2008年2月送检的56份病料进行PRRSV检测,结果30份为阳性,阳性率达54%。本实验对这30份阳性病料作为研究对象,根据北美洲株ATCC-VR2332和中国标准株CH-1a的序列利用Primer设计一对针对ORF3基因的特异性引物GP3-1/GP3-2,通过RT-PCR扩增出约900bp的基因片段,与预期的目的片段大小相符。将其插入克隆载体质粒pMD18-T。构建重组质粒,对克隆的ORF3基因进行序列测定,测序结果显示ORF3基因全长765bp。包含完整的ORF3基因的开放阅读框架,编码254个氨基酸。将ORF3基因序列与VR-2332、FJ04A、JXA1、HuN、LV、VR2332、RespPRRS MLV和CH-1a的ORF3基因进行同源性比较,结果显示,30份毒株的ORF3基因序列之间的核苷酸同源性为90.8%~99.9%,推导编码的氨基酸序列之间的同源性为92.6%~100%;与VR-2332、FJ04A、JXA1、HuN、LV、RespPRRS MLV和CH-1a株的核苷酸同源性分别为87.9~90.0%、89.4%~90.7%、92.1%~99.7%、91.9%~99.4%、40.7%~41.2%、88.2%~89.6%、93.1~96.7%。与VR-2332、FJ04A、JXA1、HuN、LV、RespPRRS MLV和CH-1a株推导编码的氨基酸序列之间的同源性分别为90.2~92.5%、91.3%~93.8%、93.0%~99.7%、93.8%~99.6%、54.9%~56.9%、90.2%~92.5%、95.9~97.6%。表明国内流行毒株的ORF3基因区域变异较大,证实30份毒株均属美洲型。 把30株流行毒株与国内外已发表的48株PRRSV相应序列进行比较,并建立了遗传进化树。本研究获得的30株流行毒株均属于3个亚群中的亚群Ⅱ,并且ORF3基因序列的同源性和2006至2007年“高热病”期间分离得到的国内代表株较高,达到了97.7%~99.7%。 推导编码氨基酸的比较结果表明,分属于不同亚群的广西不同地区流行的PRRSV毒株在ORF3基因编码蛋白的潜在糖基化位点数7个。分别位于29aa、43aa、50aa、131aa、152aa、160aa、195aa。 本研究通过对PRRSV ORF3基因序列变化的比较,了解PRRS的流行状况,探索高致病性猪繁殖与呼吸综合征变异病毒的变异规律,为控制本病流行打下基础。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前9条
1 徐明明;蔡雪辉;刘永刚;王淑杰;王洪峰;石文达;李丽琴;荣福龙;;高致病性PRRS VORF3基因在昆虫细胞中的表达与免疫原性研究[J];中国预防兽医学报;2010年06期
2 王旭荣;张彩勤;赵炳武;张春红;杨增岐;宋长绪;;PRRSV流行株Nsp2、ORF5和ORF3基因序列的分析[J];动物医学进展;2008年12期
3 李增魁;;猪圆环病毒2型ORF3编码蛋白的体外表达[J];畜牧与兽医;2008年09期
4 龙亚芹;左瑞娟;李凡;赵秀兰;李玲;陈海如;;烟草丛顶病毒ORF3的克隆及原核表达[J];华南农业大学学报;2010年02期
5 孙新峰;张淼涛;;猪生殖与呼吸综合征病毒多基因重组真核表达质粒的构建及诱导的小鼠体液免疫[J];中国兽医科学;2008年03期
6 赵鹏;马诚太;崔治中;;猪繁殖与呼吸综合征病毒在抗体免疫选择压下的变异[J];中国科学:生命科学;2010年10期
7 罗军荣;胡国良;余群英;兰旅涛;;PRRSV NC株ORF3基因的克隆、序列分析及表达[J];中国预防兽医学报;2010年04期
8 刘涛;杜丽;王凤阳;雷明;崔克;成鹰;陈品林;王轶;林杰材;满初日嘎;;基因Ⅳ型猪戊型肝炎病毒重组ORF3蛋白抗原间接ELISA诊断方法的建立[J];中国兽医科学;2009年04期
9 李建强;柳纪省;程杰;兰喜;胡永浩;吴润;殷相平;李宝玉;;猪源冠状病毒ORF3和ORF7的克隆及特性分析[J];甘肃农业大学学报;2007年06期
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 王可;Ⅱ型猪圆环病毒ORF2、ORF3基因的克隆表达与潜在应用研究[D];山东大学;2008年
2 马红霞;戊型肝炎病毒ORF2和ORF3多肽的抗原性及ORF3多肽的免疫原性研究[D];吉林大学;2009年
3 申会刚;猪圆环病毒Ⅱ对猪的实验性感染及其Cap蛋白诱导的小鼠免疫应答类型[D];浙江大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 傅艳琨;戊型肝炎病毒ORF3及其候选互作蛋白原核表达载体的构建及表达纯化[D];上海交通大学;2013年
2 徐明明;高致病性PRRSV-HuN4株ORF3基因的真核表达及GP3单克隆抗体的制备[D];东北农业大学;2010年
3 孙新峰;猪繁殖与呼吸综合征病毒多基因重组真核表达质粒的构建及免疫学研究[D];西北农林科技大学;2008年
4 相琪旺;鸭圆环病毒ORF2和ORF3基因部分生物学特性的研究[D];山东农业大学;2012年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978