收藏本站
《广西科技大学》 2014年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

无乳链球菌GlnR因子与DNA相互作用的研究

夏杰  
【摘要】:为研究GlnR中与DNA结合的关键氨基酸残基位点,本实验利用生物信息学的方法对无乳链球菌GlnR因子与DNA结合的位点进行预测,筛选出GlnR因子中与DNA结合的3个关键位点的氨基酸残基R27、R30和R47R48。然后将此3个位点的氨基酸残基分别突变,构建出3个glnR突变基因并构建它们的原核表达载体,使它们在大肠杆菌中高效表达。将分离纯化后的3种突变蛋白和GlnR蛋白分别与glnRA操纵子进行结合实验,并观察3种突变基因与glnRA操纵子的结合能力的变化,判断突变位点对DNA结合蛋白的影响,从而确定GlnR-DNA作用的三维结构模型,并初步阐明GlnR与DNA的作用机理。 根据以上的内容本文开展以下实验: 1、通过基于BindN的网络服务预测无乳链球菌GlnR因子中可能参与DNA结合的氨基酸残基,并通过分析这些氨基酸残基初步筛选最具可能性的结合位点,再利用网络服务器预测的GlnR-DNA三维结构模型来筛选关键位点,结果发现,提交至Zhang Lab的网络服务器预测出两种不同的GlnR-DNA三维结构模型,为确定其结构模型,我们从可能结合的位点中筛选了R27(27位精氨酸)、R30(30位精氨酸)和R47R48(47和48位精氨酸)作为实验的突变位点。 2、利用重叠PCR的方法突变此3个氨基酸残基,构建出3个突变glnR基因,根据其在氨基酸序列当中的位置分别命名为glnRm27、glnRm30和glnRm4748(以下以glnRm表示)。DNA测序结果显示成功将R27突变为A27(AGA突变为GCG)、R30突变为A30(CGC突变为GCG)、R47R48突变为A47A48(CGCCGC突变为GCGCGC)。 3、成功构建pGEX-4T-glnRm27、pGEX-4T-glnRm30、pGEX-4T-glnRm4748并转化至大肠杆菌BL21中表达。另外,我们对IPTG浓度及诱导温度进行了优化,结果显示IPTG诱导表达的最佳浓度均为0.1mmol/L,最佳诱导温度为30℃,并且可溶性检测显示表达的目的蛋白均为可溶性,最后利用亲和层析柱分离纯化。 4、利用电泳凝胶迁移实验(EMSA)分别对上述3种突变蛋白与glnRA基因的体外相互作用进行研究。通过对比未突变GlnR蛋白与glnRA基因的结合情况发现,GlnRm4748几乎完全丧失与glnRA的结合能力,而GlnRm27和GlnRm30虽然与glnRA仍有结合,但结合能力远远弱于未突变的GlnR蛋白。得出结论为:1)、47、48位的氨基酸残基对GlnR结合glnRA起到关键作用,30位氨基酸残基次之;2)、27位也起到一定的影响结合作用,但其对DNA的绑定作用的影响相对较弱;3)、预测的GlnR-DNA三维复合物结构中蛋白与DNA以氢键结合的可能性较小,它们之间的相互作用模式可能为螺旋-转角-螺旋(HTH)模式。
【学位授予单位】:广西科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:Q78

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李文送;;DNA甲基化及其生物学功能[J];生物学教学;2014年09期
2 刘庆华;茹慧香;;“DNA是主要的遗传物质”教学设计[J];中学生物教学;2016年07期
3 丁思思;袁华;罗小虎;李高峰;;植物DNA粗提取与鉴定的简便方法[J];中学生物教学;2016年19期
4 周苑;;《DNA分子的结构》微课程设计[J];中国信息技术教育;2016年24期
5 吴久宏;;追寻人类思维的脉络——苏教版“DNA分子的结构”一节科学史料教学设计[J];中学生物教学;2016年21期
6 唐琳;;《DNA是主要的遗传物质》教学设计(第一课时)[J];课程教育研究;2016年35期
7 王佳惠;;“观察DNA和RNA在细胞中的分布”实验改进[J];中学生物教学;2016年18期
8 刘雪梅;;作图法解决“放射性同位素标记DNA与细胞增殖”问题[J];中学生物教学;2016年18期
9 陈云;;“DNA是主要的遗传物质”一节的教学设计[J];生物学教学;2017年02期
10 霍静;李妞妞;曾令江;;提高“DNA粗提与鉴定”实验开出率的思考与探索[J];生物学教学;2017年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘冰;王旭;赵梦真;晁洁;樊春海;;基于DNA折纸术的纳米金棒精密修饰[A];中国化学会第30届学术年会摘要集-第二十八分会:化学生物学[C];2016年
2 刘冬生;李闯;程恩隽;邢永政;金娟;;DNA超分子水凝胶及其应用[A];中国化学会第30届学术年会摘要集-第二十四分会:超分子组装与软物质材料[C];2016年
3 Kaiying Cheng;Hong Xu;Xuanyi Chen;Liangyan Wang;Bing Tian;Ye Zhao;Yuejin Hua;;Structural basis for DNA 5′-end resection by RecJ[A];第五届中国结构生物学学术讨论会摘要集[C];2016年
4 陈南迪;覃诗雅;羊小海;王青;翦立新;王柯敏;;“传感-治疗”的DNA纳米装置在协同杀伤循环肿瘤细胞的应用[A];中国化学会第30届学术年会摘要集-第三十八分会:纳米生物效应与纳米药物化学[C];2016年
5 刘晔华;陈锦艳;江雁;张坚磊;穆红;;磁珠法提取金黄色葡萄球菌基因组DNA的评价[A];第七届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛论文汇编[C];2016年
6 谭磊;孙悦;周湘;刘伟;;多头蚴核糖体DNA及线粒体DNA多态性研究[A];中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会论文集[C];2015年
7 叶俏;沈洁;严婷婷;王宙政;;原发性干燥综合征患者血浆循环DNA与疾病活动相关性研究[A];2015年浙江省风湿病学学术年会论文汇编[C];2015年
8 周嘉嘉;FriederikeSchmid;;计算模拟研究DNA和聚电解质的结合[A];2015年全国高分子学术论文报告会论文摘要集——主题E 高分子理论计算模拟[C];2015年
9 Yuan Zhang;Yanlong Chen;Gaigai Xu;Chen Lan;Shaige Xia;Wenjie Zhao;Shusheng Zhang;;Endogenous DNA adducts method establishment and Human Biomonitoring[A];河南省化学会2016年学术年会论文摘要集[C];2016年
10 孙觅;辛丽斐;刘宏;;基于浓差电池原理高灵敏检测DNA的传感器[A];中国化学会第30届学术年会摘要集-第四分会:生物分析和生物传感[C];2016年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 黄辛;DNA骨架硫修饰研究又获新成果[N];科学时报;2011年
2 本报记者 辛明;邓亚军:灾难现场的DNA斗士[N];中国青年报;2011年
3 本报记者 欧阳晓红 韩宋辉;“可怕”的友邦DNA 267亿港元净利从何而来[N];经济观察报;2015年
4 记者 冯卫东;DNA分子计算为可编程药丸铺路[N];科技日报;2018年
5 本报记者 李禾;DNA折纸术,“折”出生命所需神奇图案[N];科技日报;2019年
6 深圳特区报首席记者 孙锦;解读DNA惠及世界患癌儿童[N];深圳特区报;2018年
7 本报记者 陆成宽;DNA到底能不能预测外貌[N];科技日报;2018年
8 陆成宽;DNA到底能不能预测外貌[N];科学导报;2018年
9 记者 刘霞;人体细胞内存在全新DNA结构[N];科技日报;2018年
10 强天林 王佳乐;DNA存储技术:掌握信息控制权的利器[N];解放军报;2018年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张军;全基因组DNA甲基化测序以及定点表观遗传学改造两个层面来解析哺乳动物DNA甲基化的作用[D];南京大学;2014年
2 龚平;运用高通量遗传互作图谱技术研究酵母DNA复制检验点网络[D];中国农业大学;2016年
3 全韵;酿酒酵母DNA复制蛋白Mcm10促进复制解旋酶Mcm2-7激活的分子机制[D];中国农业大学;2016年
4 周宏;DNA电致化学发光分析方法研究[D];南京大学;2013年
5 付晓;Tudor-SN蛋白参与DNA损伤应答的机制探讨[D];天津医科大学;2014年
6 王琳;镰孢菌DNA条形码及多样性研究[D];山西农业大学;2017年
7 王倩倩;双加氧酶Tet对DNA甲基化修饰的影响及相关调控机制研究[D];中国农业大学;2018年
8 王丹;DNA损伤应答中长非编码RNA LRIK、ncRNA0301及蛋白质XPF的功能研究[D];湖南大学;2018年
9 田茜;黄单胞菌属DNA条形码筛选及其重要致病变种检测技术研究[D];中国农业科学院;2018年
10 吴成超;序列复杂度方法在DNA调控元件预测中的应用研究[D];华中农业大学;2018年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 韩丹;荧光DNA-银纳米簇用于某些疾病相关基因检测的研究[D];山西大学;2018年
2 徐楠;基于功能化DNA的信号放大与荧光检测新方法研究[D];南京大学;2015年
3 杨雯;基于DNA骨架的银纳米簇构建免标记的荧光猝灭传感器在核酸酶及DNA检测中的应用[D];广西师范大学;2016年
4 刘倩;基于脱氧核酶的DNA传感器及逻辑门设计[D];华中科技大学;2017年
5 邱云锋;座壳孢属分子系统学及DNA条形码研究[D];福建农林大学;2013年
6 白慧玲;双根DNA力学性质的研究及双成像和多通道单分子技术研发[D];华中科技大学;2017年
7 王正明;双根DNA扭转扭矩的研究[D];华中科技大学;2017年
8 吴燃峰;DNA核酶调控的分子计算模型的研究[D];华北电力大学(北京);2018年
9 曲宇辉;利用序列信息预测DNA结合蛋白的深度学习算法研究[D];天津大学;2018年
10 夏杰;无乳链球菌GlnR因子与DNA相互作用的研究[D];广西科技大学;2014年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026