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肽核酸夹提高孕妇血浆胎儿父源性β珠蛋白突变基因检出率的研究

黄肯  
【摘要】:目的:探讨利用肽核酸夹提高孕妇血浆胎儿父源性β珠蛋白突变基因的检出率,为地中海贫血无创性产前诊断提供参考。 方法:选择妊娠7-20周的孕妇共41例,丈夫基因型为41-42M/N而孕妇基因型正常或为其它β地贫基因突变。以羊水、脐带血或出生后婴儿外周血标本的检测结果作为金标准对照。用QIAamp DNA Blood Mini Kit提取孕妇血浆总游离DNA,再将总游离DNA经过1%琼脂糖凝胶电泳后回收长度100-300bp的DNA,然后应用回收后的DNA并加肽核酸夹进行PCR扩增,最后进行反向斑点杂交确定基因型并与金标准的结果进行比较。同时设置扩增方法不同的两对照组以检验本方法的可靠性,对照组1应用总游离DNA并加肽核酸夹,对照组2应用回收后的DNA不加肽核酸夹。 结果:共对41例孕妇外周血浆标本的PCR产物进行杂交检测, 38例完成金标准对照。金标准对照胎儿基因型为41-42M/N的21例标本中,对照组1、对照组2和实验组分别有8、12、19例检出41-42M,胎儿基因型正常(N)的17例标本中,分别有1、2、1例出现假阳性,敏感度分别为38.1%(8/21)、57.1%(12/21)、90.5%(19/21),特异度分别为94.1%(16/17)、88.2%(15/17)、94.1%(16/17),准确度分别为63.2%(24/38)、71.1%(27/38)、92.1%(35/38)。进行McNemar X2检验两两比较敏感度、准确度,实验组与对照组1、对照2的差别均有显著性(p均0.05﹚。 结论:利用肽核酸夹对孕妇外周血浆中小片段游离胎儿DNA检测胎儿父源性β-珠蛋白基因突变的方法,不仅具有较高的敏感度、特异度和准确度,而且方法简便实用、结果可靠,在普通实验室的条件下即可完成检测。通过本方法检测阴性者可避免实施有创性产前诊断及其带来的并发症风险,因此具有潜在的临床实用性。


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