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《广西医科大学》 2011年
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银杏叶提取物体外抗乙型肝炎病毒分泌抗原的作用

杨芳  
【摘要】:目的:探讨不同浓度的银杏叶提取物(EGb761)对乙型肝炎病毒抗原分泌的作用,进一步研究中药在抗乙型肝炎病毒感染过程中的价值。 方法:第一部分:1.用MTT法检测银杏叶提取物对HepG2.2.15细胞的毒性作用。2.用不同浓度的银杏叶提取物作用于HepG2.2.15细胞,期间分不同的时间段(4d和6d)收集细胞培养上清,用时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)法检测细胞培养上清中乙肝病毒表面抗原(HBsAg)及乙肝病毒e抗原(HBeAg)。用spss16.0软件进行统计学处理,分析EGb761对HepG2.2.15细胞分泌抗原的作用。第二部分:用人乙型肝炎病毒(HBV)阳性血清和银杏叶提取物作用于HL-7702细胞株和树鼩原代肝细胞,在不同的时间点(4d和6d)收集细胞培养上清液和细胞DNA,用TRFIA法检测细胞培养上清液中的HBsAg;用聚合酶链式反应(PCR)方法检测细胞内的HBV DNA。 结果:第一部分. 1. MTT实验显示:分别在细胞培养的第4天和第6天进行MTT实验,检测实验组吸光度值A(OD)与对照组吸光度值A(OD),经单因素方差分析没有统计学意义(P0.05)。2. HepG2.2.15细胞经不同浓度的EGb761干预后,第4天和第6天的细胞培养上清中HBsAg吸光度A值及HBeAg吸光度A值,明显少于未加药作用过的阳性对照组细胞培养上清中的乙肝病毒抗原吸光度A值,经单因素方差分析,有统计学差异(P0.05)。3. HepG2.2.15细胞经不同浓度的EGb761干预后,EGb761的浓度在55μg/ml~1750μg/ml的剂量范围内,4d时细胞培养上清中的HBsAg吸光度A值小于6d时对应药物浓度的细胞培养上清中HBsAg吸光度A值,4d时EGb761对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg的抑制率大于6d时对应药物浓度对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg的抑制率;而EGb761的浓度在14μg/ml~1750μg/ml的剂量范围内,4d时细胞培养上清中的HBeAg吸光度A值大于6d时对应药物浓度的细胞培养上清中HBeAg吸光度A值,但是4d时EGb761对HepG2.2.15细胞分泌HBeAg的抑制率大于6d时对应药物浓度对HepG2.2.15细胞分泌HBeAg的抑制率。4. HepG2.2.15细胞经不同浓度的EGb761作用4d和6d后,27μg /ml及以上的浓度范围时测得的细胞培养上清中的HBsAg吸光度A值与阳性对照组的吸光度A值比较有统计学差异(P0.05);219μg/ml及以上的浓度范围时测得的细胞上清中的HBeAg吸光度A值与阳性对照组的吸光度A值比较有统计学差异(P0.05)。第二部分.银杏叶提取物干预过的感染了人HBV的HL-7702细胞株和树鼩原代肝细胞培养上清中的HBsAg呈阳性,HL-7702细胞株培养上清中的HBsAg的吸光度A值在一倍稀释浓度4d时与相应的阳性对照组A值比较,有统计学差异(P0.05);细胞内的HBV DNA经PCR后灰度值没有呈现明显的规律变化趋势。 结论:1.本实验应用EGb761的剂量在14μg/ml~1750μg/ml对HepG2.2.15细胞的生长没有明显的毒性作用;2.经EGb761干预过4d和6d的HepG2.2.15细胞,EGb761的剂量浓度范围在27μg/ml~1750μg/ml时对细胞分泌到培养上清中的HBsAg的抑制作用呈现剂量依赖效应;而在219μg/ml~1750μg/ml的剂量范围内时对细胞分泌到培养上清中的HBeAg的抑制作用呈现剂量依赖效应;3. HepG2.2.15细胞经不同浓度的EGb761作用4d和6d后,EGb761在较低的浓度范围内就可以抑制HepG2.2.15细胞向培养上清中分泌HBsAg;而抑制细胞分泌HBeAg到培养上清中却需要较高的药物浓度,并且EGb761对HBsAg的抑制率有强于对HBeAg的抑制率的趋势。4.经EGb761干预过的HepG2.2.15细胞,4d时对乙肝抗原的抑制率有强于6d时抑制率的趋势。5. EGb761的浓度在27μg/ml时可能是抑制HBsAg分泌的最低有效剂量浓度,同样EGb761的浓度在219μg/ml时可能是抑制HBeAg分泌的最低有效剂量浓度。6. HL-7702细胞株能够被人HBV感染,但是不能用其作为研究自然状态下感染HBV的细胞模型。7.树鼩原代肝细胞可以感染人HBV病毒。
【学位授予单位】:广西医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R285

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