收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

广西眼镜蛇毒Natrin的分离纯化及抗人肿瘤细胞生物活性研究

蒋兴明  
【摘要】:目的:用柱层析法从广西眼镜蛇毒中分离纯化出蛋白Natrin;探讨Natrin对抗人肿瘤细胞的生物活性研究。 方法:(1)广西眼镜蛇粗毒经Sephadex G75凝胶过滤及CM SepharoseCL-6B阳离子交换柱及FPLC mono-S柱层析进行分离纯化得到Natrin蛋白;再用SDS-PAGE鉴定Natrin的纯度和相对分子质量。(2)采用MTT法,以Natrin浓度分别为0.625,1.25,12.5,125,250μg/ml处理人肝癌BEL-7721细胞株、HEPG2细胞株、人卵巢癌SKOV3细胞株和人宫颈癌SIHA细胞株等四种人肿瘤细胞作用24h,观察不同浓度Natrin对四种人肿瘤细胞的毒性和生长抑制率;(3)以不同浓度处理人卵巢癌SKOV3细胞株24小时后,固定脱干包埋切片染色后利用电子显微镜的方法观察人卵巢癌SKOV3细胞株的形态变化;(4)以不同浓度处理人卵巢癌SKOV3细胞株24小时后,用AO/EB试剂染色利用倒置荧光显微镜的方法观察人卵巢癌SKOV3细胞株的染色及形态变化;(5)以不同浓度处理人卵巢癌SKOV3细胞株24小时后,采用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测人卵巢癌SKOV3细胞株的凋亡率。 结果:(1)从广西眼镜蛇毒中分离纯化出Natrin,经测定其相对分子质量为25Ku,质谱测定分子量为24.937Ku,测得N端的序列为NVDFNSESTRRKKKQKEIVD;(2)Natrin对四种人肿瘤细胞均有细胞毒性作用,且呈剂量依赖关系,尤其是对SKOV3的抑制作用更强,对SKOV3作用24h的IC50值为1.47ug/ml;电镜观察可观察到人卵巢癌SKOV3细胞株的凋亡细胞的主要特点为:核染色质固缩、边集,核膜皱褶,胞质紧实,电子密度增加,及凋亡小体现象;倒置荧光显微镜下可观察到人卵巢癌SKOV3的凋亡细胞的主要特点为:细胞体积缩小,染色质固缩,橘红色荧光增强;流式细胞仪检测到人卵巢癌SKOV3细胞株的凋亡细胞的的早期凋亡率在一定剂量内随Natrin浓度的增高而增加,但是到达最大值后凋亡率反而随着Natrin的浓度的增加而有所降低,各浓度组与对照组的细胞凋亡率比较仍有明显差异(P0.05)


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 Ritz J;周爱婷;;应用单克隆抗体治疗白血病和淋巴瘤[J];国际生物制品学杂志;1983年03期
2 孙文勇;;EB病毒感染诱导B淋巴细胞表达癌基因fgr-mRNA[J];医学分子生物学杂志;1987年01期
3 魏丽惠,李自新,虞幸,田明泉,苑金梅;人卵巢癌裸鼠移植瘤传代生长的观察研究[J];北京大学学报(医学版);1989年01期
4 沈洪兴;;人肿瘤细胞对细胞毒药物多重抗药性及反应的定量检测[J];国外医学.药学分册;1991年05期
5 章扬培,藤元次郎,石崎宽治,贺涛,范国才,池永满生;中国人肿瘤细胞中O~6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶活性与对嘧啶亚硝脲敏感性的关系[J];中国生物化学与分子生物学报;1992年03期
6 孙慧;战忠利;宁连胜;王垣;高进;;人卵巢癌裸鼠移植模型的建立和形态学观察[J];中国肿瘤临床;1992年06期
7 李佩茵,林晨;人卵巢癌细胞阿霉素耐药株的建立及其耐药机制的探讨[J];药学学报;1995年04期
8 ;培养的人肿瘤细胞受2Gy/d分次照射时放射敏感性和细胞周期的重分布[J];国外医学.放射医学核医学分册;1996年01期
9 刘杰,田志刚,孙汭,魏海明,冯进波;人肿瘤细胞中Th2类细胞因子的优势表达[J];中国肿瘤生物治疗杂志;1997年03期
10 薛开先,曾昭暄,马国建,彭素荣,陈森清,吴建中;多重癌基因改变在良、恶性卵巢等妇科肿瘤的比较研究[J];癌变畸变突变;1997年02期
11 赵家伟,刘志达,蒋滢;人卵巢癌HO-8910细胞系胞内多胺水平的动态变化[J];苏州医学院学报;1998年01期
12 ;卵巢肿瘤[J];国外科技资料目录(医药卫生);1999年05期
13 ;肿瘤病理学、病因学[J];国外科技资料目录(医药卫生);2000年02期
14 ;卵巢肿瘤[J];国外科技资料目录(医药卫生);2000年03期
15 王晓梅,罗灿;电离辐射和/或高热诱导的六种不同p53状态人肿瘤细胞S期停滞和G_1期阻滞[J];国外医学.放射医学核医学分册;2001年02期
16 李佳平,卞度宏;人卵巢癌多药耐药细胞株的建立及初步鉴定[J];现代妇产科进展;2001年01期
17 许沈华,牟瀚舟,吕桂泉,朱赤红,羊正炎,高永良,楼洪坤,刘祥麟,程勇,杨文;高低转移人卵巢癌细胞系基因表达谱差异(英文)[J];Chinese Medical Journal;2002年01期
18 黎彬;;全国肿瘤大会会议报道[J];医学研究通讯;2002年09期
19 陈爱平,刘晖,徐冰,戴淑真;bcl-xs基因对卵巢癌的作用及其凋亡机制的研究[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2003年01期
20 ;妇 科[J];中国医学文摘(肿瘤学);2003年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 ;Ryanodine receptor-protein regulator interaction revealed a general molecular mechanism of channel inhibition[A];第十一次中国生物物理学术大会暨第九届全国会员代表大会摘要集[C];2009年
2 金沈锐;张新胜;祝彼得;秦旭华;;西黄丸对肝癌细胞SMMC7721分泌的血管内皮生长因子及基质金属蛋白酶2、9的影响[A];西黄丸临床应用研究论文集[C];2009年
3 刘洋;许建华;董金华;李娜;陈纯;张南文;许娇红;;姜黄素衍生物的合成及其抗癌活性[A];2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2009年
4 周兆丽;李征;缪泽鸿;林莉萍;童林江;李援朝;丁健;;雷公藤类化合物的新构效关系及其新衍生物LLDT-67的抗肿瘤作用[A];2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2009年
5 孙立;林森森;梁文璐;房冬冬;赵人平;周力强;刘大涛;黄岚;周华;张陆勇;袁胜涛;;针对间质细胞的抗肿瘤及抗肿瘤转移多肽类药物的研究[A];2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2009年
6 周力强;梁文璐;袁胜涛;张陆勇;刘大涛;;基因重组人P43(AIMP1)的抗肿瘤作用研究[A];2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2009年
7 林莉萍;姜勇;谢华;代梅;童林江;任晓维;郭建辉;丁健;;酪氨酸激酶EGFR和ErbB2双重抑制剂AST-6的抗肿瘤作用以及机理研究[A];2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2009年
8 于冰;缪泽鸿;蒋轶;李美红;杨娜;李婷;丁健;;c-Jun的非转录功能:与ODD结构域结合地阻断缺氧诱导因子HIF-1泛素化降解[A];2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2009年
9 李灵;俸婷婷;连莹莹;张广丰;缪辉;徐奕江;吴传芳;Alan Garen;宋旭;;5种来源于人的非编码RNA通过与PSF蛋白相互作用诱导细胞恶性转化[A];2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2009年
10 姜达;武巧丽;;洛伐他汀对人卵巢癌SKOV3细胞株的体外作用及其机制研究[A];第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议论文汇编[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 孙晋民;蛇毒抗肿瘤成分的筛选及对人肿瘤细胞抑制作用的研究[D];中国医科大学;2003年
2 吴永忠;c-erbB-2与c-raf-1基因反义寡核苷酸联合治疗卵巢癌的实验研究[D];重庆医科大学;2003年
3 邢艳;hCG对人卵巢癌3AO细胞增殖凋亡的影响及其与LH/hCG受体的关系的研究[D];四川大学;2003年
4 杨志宏;超声波对人卵巢癌细胞COC1抑制作用及机制研究[D];重庆医科大学;2004年
5 李军霞;戊地昔布的抗肿瘤作用和机制研究[D];河北医科大学;2004年
6 易晓芳;拓扑替康腹腔化疗治疗浆液性卵巢癌的实验研究[D];复旦大学;2004年
7 何俏军;DL111-IT的抗肿瘤作用及其机制研究[D];浙江大学;2005年
8 杨孝军;能量可控陡脉冲电穿孔生物学效应的实验研究[D];重庆医科大学;2005年
9 侯萍;纽卡斯尔病毒疫苗、白细胞介素-12、15对人卵巢癌免疫治疗作用的实验研究[D];山东大学;2004年
10 苏涛;hTERT启动子诱导TRAIL基因靶向表达治疗涎腺肿瘤的实验研究[D];吉林大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 蒋兴明;广西眼镜蛇毒Natrin的分离纯化及抗人肿瘤细胞生物活性研究[D];广西医科大学;2012年
2 朱华;荷人及其转IL-7基因卵巢癌人化PBL SCID鼠腹腔移植模型的建立[D];浙江大学;2001年
3 潘子民;荷人卵巢癌SCID鼠腹腔移植模型的生物学特性及人参皂甙Rg3抗血管生成作用[D];浙江大学;2001年
4 张凤月;超声激活血卟啉对离体人黑色素瘤(LiBr),胃癌细胞(7901)杀伤效应的初步研究[D];陕西师范大学;2001年
5 李厚怀;小细胞肺癌病人外周静脉血中微转移的基因检测及其临床意义的研究[D];苏州大学;2001年
6 陶雪芬;2-(4-取代苄氧基)芳基-s-1,2,4-三氮唑并“1,5-a”吡啶类化合物的合成及其生物活性研究[D];浙江大学;2002年
7 杨英;Tapasin和HLAI类分子在人卵巢癌中的表达及其相关性研究[D];浙江大学;2003年
8 牟宜坤;73种天然产物的体外抗肿瘤活性研究及其构效关系分析[D];昆明医学院;2003年
9 潘玉真;中药消积煎剂对卵巢癌化疗和热化疗增敏作用的体外实验研究[D];辽宁中医学院;2003年
10 邱巍峰;复方中药牛黄天龙饮对人卵巢癌SK细胞和小鼠肉瘤S-180细胞抗肿瘤作用的实验研究[D];河北医科大学;2003年
中国重要报纸全文数据库 前3条
1 王雪飞 吴志军;肿瘤耐药 查清敌情 攻其软肋[N];健康报;2005年
2 徐峰;疯草毒性成分苦马豆素的研究进展[N];中国医药报;2001年
3 通讯员 吴志军;寻找肿瘤背后的“黑手”[N];科技日报;2005年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978