收藏本站
《广西医科大学》 2017年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

内质网应激在小鼠狼疮肾炎中的发病机制研究

韦颖  
【摘要】:系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种复杂的自体免疫性疾病,几乎影响身体各个器官,其中沉积在肾脏的自身抗体及免疫复合物(immune complexes,IC)能触发炎症反应,导致狼疮肾炎(lupus nephritis,LN),可发展至终末期肾病[1]。LN的发病机制尚不明确。目前LN的治疗主要依靠激素和免疫抑制剂。长期使用激素可引起诸如高血压、血糖升高、诱发感染、骨质疏松等不良反应。而使用免疫抑制剂可出现骨髓抑制、肝肾损害等副作用。因此,探讨狼疮肾炎的发病机制有助于探寻疗效确切、副作用小的治疗手段。内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)是否参与到LN的发病机制尚未明确,本研究通过观察MRL/lpr小鼠内质网应激现象、利用4-苯基丁酸(4-phenyl butyric acid,4-PBA)抑制ERS,观察其变化,探讨LN的发病机制,有助于为LN的治疗提供新思路。一、材料和方法1.小鼠狼疮肾炎模型及干预方案选用12周龄的雌性MRL/lpr小鼠共16只,随机分为4-PBA干预组和溶媒对照组,每组8只。同时选取8只12周龄雌性健康小鼠作为正常对照组。4-PBA干预组小鼠给予1.0 g.kg-1.d-1剂量的4-PBA灌胃。正常对照组和溶媒对照组则分别给予等体积生理盐水灌胃。治疗前及治疗过程中第4、8和12周检测24小时尿蛋白定量;第12周检测血肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)。2.组织学损伤评估肾组织石蜡切片行HE、PAS染色,观察肾小球、肾小管及肾血管病理损害情况。3.免疫组织化学染色及量化肾组织石蜡切片行免疫组化染色观察肾小球、肾间质及肾血管周围CD3+T细胞浸润情况。4.RT-PCR检测mRNA表达提取肾脏组织总RNA,以GAPDH作为内参照,检测GRP78、CHOP、PERK、eIF2α、ATF4、IRE1α、XBP1、ATF6 mRNA 表达,计算目标条带与内参照条带密度的比值。5.Western blot检测蛋白表达提取肾脏组织总蛋白,以GAPDH作为内参照,检测GRP78、CHOP、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、p-IRE1α、XBP1、ATF6 蛋白表达。提取肾脏组织的核蛋白,以Fibrillarin作为内参照,检测核内NF-κB p65表达,计算目标条带与内参照条带密度的比值。6.ELISA提取肾脏组织匀浆的上清液,利用ELISA检测上清液MCP-1、TNF-α、IL-6水平。7.统计学分析组间均数的比较使用方差分析(ANOVA),两两比较采用LSD-t检验,p0.05证明存在统计学差异。二、结果1.MRL/lpr小鼠LN中的ERS现象与正常小鼠相比,MRL/lpr小鼠肾脏中ERS相关标志物GRP78 mRNA及GRP78蛋白的表达明显升高(p0.05),且ERS信号通路PERK和IRE1α的磷酸化蛋白表达也明显升高(p0.05)。2.MRL/lpr小鼠蛋白尿变化情况MRL/lpr小鼠在12周龄开始出现蛋白尿,与正常对照组小鼠比较,溶媒对照组小鼠的24小时尿蛋白定量明显增多(p0.05);在4-PBA干预12周后,4-PBA干预组小鼠的24小时尿蛋白排泄量显著低于溶媒对照组(p0.05)。3.MRL/lpr小鼠血生化变化情况与正常对照组比较,溶媒对照组小鼠的血BUN和SCr均显著升高(p0.05);4-PBA干预12周后,4-PBA干预组小鼠的血BUN及SCr显著低于溶媒对照组(p0.05)。4.MRL/lpr小鼠肾脏组织学变化情况与正常对照组比较,溶媒对照组小鼠肾小球、肾小管间质及肾血管评分均明显增加(p0.05);4-PBA干预12周后,4-PBA干预组小鼠的肾脏组织评分显著低于溶媒对照组(p0.05)。5.MRL/lpr小鼠肾脏炎症细胞浸润情况与正常对照组比较,溶媒对照组小鼠的肾组织CD3+T淋巴细胞浸润明显增多(p0.05);4-PBA干预12周后,4-PBA干预组CD3+T淋巴细胞浸润程度较溶媒对照组显著减轻(p0.05)。6.MRL/lpr 小鼠肾脏 GRP78、CHOP、PERK、eIF2α、ATF4、IRE1α、XBP1、ATF6mRNA 表达情况RT-PCR结果显示,与正常对照组比较,溶媒对照组小鼠的GRP78、CHOP、PERK、eIF2α、ATF4、IRE1α、XBP1、ATF6mRNA 表达水平均显著升高(p0.05);4-PBA干预12周后,4-PBA干预组以上指标较溶媒对照组显著降低(p0.05)。7.MRL/lpr 小鼠肾脏 GRP78、CHOP、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、p-IRE1α、XBP1、ATF6蛋白表达情况Western blot结果显示,与正常对照组比较,溶媒对照组小鼠的GRP78、CHOP、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、p-IRE1α、XBP1、ATF6 蛋白表达水平均显著升高(p0.05);4-PBA干预12周后,4-PBA干预组以上指标较溶媒对照组显著降低(p0.05)。8.MRL/lpr小鼠肾脏MCP-1、TNF-α、IL-6蛋白表达情况ELISA结果显示,与正常对照组比较,溶媒对照组小鼠的肾组织匀浆MCP-1、TNF-α、IL-6含量均显著升高(p0.05);4-PBA干预12周后,4-PBA干预组以上指标较溶媒对照组显著降低(p0.05)。9.MRL/lpr小鼠肾脏NF-κB活化情况Western blot结果显示,与正常对照组比较,溶媒对照组小鼠肾脏核蛋白表达量均显著升高(p0.05);4-PBA干预12周后,4-PBA干预组肾脏核蛋白表达量较溶媒对照组显著降低(p0.05)。三、小结本研究发现在MRL/lpr小鼠中存在ERS,使用ERS抑制剂4-PBA进行干预:1.减少MRL/lpr小鼠尿蛋白的排泄,改善肾功能;2.减轻肾脏病理损害;3.抑制肾脏炎症细胞浸润;4.抑制肾脏NF-κB活化;5.减少促炎症细胞因子MCP-1、TNF-α、IL-6的表达;6.抑制ERS状态。结论本研究发现在小鼠LN中:1.ERS参与小鼠LN的发病;2.ERS参与小鼠LN的发病机制可能与NF-1κB炎症信号通路活化有关;3.抑制ERS可减轻肾脏炎症反应及肾脏损害。
【学位授予单位】:广西医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R593.242

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 黄荣桂,陈锦海,李月婷,许有容;狼疮肾炎治疗与随访[J];中华肾脏病杂志;2001年03期
2 叶任高,阳晓;狼疮肾炎的诊断和治疗近况[J];中国实用内科杂志;2002年09期
3 高晓健,张玉琦;狼疮肾炎并发甲状腺功能减退症1例[J];新医学;2002年06期
4 杨念生,薛志强,黄越芳,陈雄辉,叶任高;狼疮肾炎与妊娠的相互影响[J];中山医科大学学报;2002年02期
5 徐雷艇,王美美;诱生型一氧化氮合酶与狼疮肾炎[J];中华风湿病学杂志;2003年05期
6 孙茹蓉,王美美;单核细胞趋化蛋白-1在狼疮肾炎中的表达和治疗前景[J];中华风湿病学杂志;2004年07期
7 朱小霞,王美美;转化生长因子-β与狼疮肾炎[J];中华风湿病学杂志;2004年10期
8 黎磊石,刘志红;狼疮肾炎治疗的前景[J];中华肾脏病杂志;2004年01期
9 刘冠贤,邓安国,方敬爱,刘建社,王玉梅,石咏军;狼疮肾炎患者尿单核细胞趋化蛋白-1检测的临床意义[J];中华风湿病学杂志;2005年10期
10 刘志红;黎磊石;;狼疮肾炎的治疗[J];中国实用内科杂志;2006年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王晓非;蒋莉;刘海娜;张榕;张晓莉;;早期狼疮肾炎患者血中可溶性CD40配体的变化及意义[A];中华医学会全国风湿病学年会论文汇编[C];2003年
2 钟力;高建华;徐珊;张剑勇;尹志华;;激素联合中药治疗难治性狼疮肾炎的临床研究[A];全国中西医结合强直性脊柱炎专题研讨会论文汇编[C];2007年
3 钟力;高建华;徐珊;张剑勇;尹志华;;激素联合中药治疗难治性狼疮肾炎的临床研究[A];第十一届全国中医风湿病学术研讨会专辑[C];2006年
4 刘晓倩;戴明;陈晓翔;胡大伟;鲍春德;;狼疮肾炎患者外周血白介素18及其结合蛋白基因的表达[A];全国自身免疫性疾病专题研讨会暨第十一次全国风湿病学学术年会论文汇编[C];2006年
5 郭桂梅;陈顺乐;沈南;倪旭鸣;鲍春德;戴岷;王海丰;黄新芳;钱捷;;狼疮肾炎患者肾组织基因表达的研究[A];第十二届全国风湿病学学术会议论文集[C];2007年
6 顾越英;;狼疮肾炎的临床治疗进展[A];浙江医学会2007年风湿病年会论文汇编[C];2007年
7 肖嫦娟;饶慧;;不同治疗方案对Ⅴ型狼疮肾炎的综合疗效对比[A];第17次全国风湿病学学术会议论文集[C];2012年
8 李雪璐;邢艳;;雌二醇和白细胞介素-10在女性狼疮肾炎患者血浆的表达水平及其意义[A];第17次全国风湿病学学术会议论文集[C];2012年
9 林书典;;伴抗中性粒细胞胞质抗体阳性狼疮肾炎的临床病理特征[A];第17次全国风湿病学学术会议论文集[C];2012年
10 阳晓;叶任高;;狼疮肾炎的诊断和治疗[A];第七届全国中西医结合肾脏病会议专题讲座汇编[C];2003年
中国重要报纸全文数据库 前4条
1 陶春祥;狼疮肾炎的药物治疗[N];中国医药报;2003年
2 衣晓峰;李华虹;如何判断狼疮肾炎患者肾损害?[N];中国医药报;2004年
3 熊明山;粤港两地共克顽疾[N];医药经济报;2000年
4 魏开敏;狼疮肾炎的免疫抑制治疗[N];中国医药报;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 张馨梅;弥漫增殖性狼疮肾炎的临床和病理研究[D];北京协和医学院;2009年
2 王娟;狼疮肾炎伴血栓性微血管病变的临床病理研究[D];北京协和医学院;2009年
3 刘志纯;TWEAK-P38 MAPK信号通路在狼疮肾炎发病机制中的作用研究[D];中南大学;2011年
4 方明;中医药治疗狼疮肾炎的证候与疗效相关研究[D];成都中医药大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 高雁;难治性狼疮性肾炎病例分析及文献复习[D];浙江大学;2015年
2 陈雪雯;狼疮肾炎患者临床检测指标的诊断价值分析[D];天津医科大学;2015年
3 黄俊;雌激素上调TWEAK表达在狼疮肾炎发病机制中作用的研究[D];苏州大学;2016年
4 荣成智;狼疮肾炎患者血清定量蛋白质组学研究[D];广西医科大学;2016年
5 林秋萍;趋化因子CXCL9/10/11在人肾小球系膜细胞上的表达及在狼疮肾炎诊断中的意义[D];福建中医药大学;2016年
6 陈春;血清renalase、IL-34及IL-33水平与狼疮肾炎活动性关系及发病机制研究[D];大连医科大学;2016年
7 韦颖;内质网应激在小鼠狼疮肾炎中的发病机制研究[D];广西医科大学;2017年
8 马东锋;狼疮肾炎治疗的系统评价[D];泸州医学院;2009年
9 陈慧;血、尿白介素-6的检测在重症狼疮肾炎患者中的临床价值[D];川北医学院;2010年
10 赵永利;狼疮肾炎病理分型与临床特征的相关性探讨[D];吉林大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026