收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

口腔癌微环境对中性粒细胞氧化线粒体DNA的影响

陈蕾  
【摘要】:目的:1.本研究体外培养正常黏膜角化细胞(Human oral keratiocytes,HOK)和人舌鳞状细胞癌细胞(squamous cell carcinomas,SCC-9),分别与提取的人外周血中性粒细胞共培养。对比观测在口腔癌微环境中中性粒细胞氧化线粒体DNA(ox-mt DNA)是否升高及探究其升高原因。2.我们通过观察裸鼠注射SCC-9细胞后组织及外周血中性粒细胞ox-mtDNA的水平,并与注射人正常组织细胞作比较,初步探讨采用检测外周血ox-mtDNA水平的方式,临床诊断早期口腔癌的可能性。方法:1.采用transwell小室,人中性粒细胞分别与HOK细胞、SCC-9细胞体外共培养,并采用分别加入细胞因子白细胞介素-8(IL-8)和IL-8抑制剂姜黄素(curcumin)共培养,采用免疫荧光检测8-hydroxyl deoxyguanosine(8-OHdG)、Anti-Histone H3(citrulline R2+R8+R17)(H3cit)和DNA复合物检测ox-mt DNA,以及采用提取中性粒细胞外诱捕网(neutronphil extracellular traps,NET)上的ox-mt DNA,采用8-OHdG抗体,Elisa法检测ox-mt DNA在不同微环境的表达。2.构建SCC-9裸鼠舌体移植瘤模型,同时在小鼠舌部注射人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGF)及(culture medium,DMEM)培养基作为正常对照组以及空白对照组。在48h以及72h收集各组舌部组织和72h收集外周血;采用HE染色观察中性粒细胞在组织中的浸润情况,并采用免疫荧光法检测中性粒细胞特异性抗体Ly6G,观测中性粒细胞在组织中的表达。此外,通过免疫荧光检测8-OHdG、H3cit和DNA复合物观测组织标本中ox-mt DNA的表达水平。进一步,通过提取各组裸鼠外周血中中性粒细胞mtDNA;采用8-OHdG Elisa法比较各组外周血中的ox-mtDNA的水平。结果:1.免疫荧光分析发现中性粒细胞与SCC-9共培养比中性粒细胞与HOK细胞共培养ox-mtDNA表达升高。进一步通过在同样的共培养体系加入IL-8刺激后,ox-mtDNA的表达较无IL-8刺激组显著增加。另一方面,采用IL-8抑制剂curcumin预处理SCC-9细胞后,与中性粒细胞共培养,Elisa结果显示中性粒细胞释放的ox-mt DNA减少(P0.05);而IL-8抑制剂curcumin预处理HOK细胞后,与中性粒细胞共培养,Elisa结果显示中性粒细胞释放的ox-mt DNA未见明显变化(P0.05)。2.在裸鼠注射SCC-9组,72h后其舌部注射区组织HE染色可以见到瘤块样改变,横纹肌排列紊乱,中性粒细胞浸润增多,浸润在SCC-9细胞微环境周围及中央;而注射HGF组的组织中可见横纹肌紊乱,少量中性粒细胞浸润;而注射DMEM组的组织中横纹肌排列有序,未见明显中性粒细胞浸润。3.检测组织中的免疫荧光中性粒细胞特异性抗体Ly6G发现,在裸鼠注射SCC-9组中的中性粒细胞比裸鼠注射HGF组和裸鼠注射DMEM组增多。4.免疫荧光检测8-OHdG、H3cit和DNA复合物检测发现在裸鼠注射SCC-9组的组织中可见中性粒细胞ox-mtDNA的表达明显高于对照组。进一步采用手术去除裸鼠SCC-9早期移植瘤72h后,组织中ox-mtDNA明显下降。而裸鼠注射HGF组和裸鼠注射DMEM组未见明显变化。5.采用8-OHdG抗体Elisa结果显示ox-mtDNA在裸鼠注射SCC-9组的表达水平明显高于2个对照组(P0.01;P0.001),而裸鼠注射DMEM组其ox-mtDNA水平小于裸鼠注射HGF组(P0.05);进一步去除裸鼠SCC-9早期移植瘤72h后ox-mt DNA水平明显低于术前(P0.001)。结论:SCC-9释放的IL-8可诱导中性粒细胞释放ox-mt DNA增多;早期口腔癌微环境的存在,可使癌组织及其外周血中中性粒细胞ox-mtDNA表达升高。提示临床可采用检测外周血ox-mt DNA早期诊断口腔癌。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前18条
1 李震;曾庆娟;崔学庆;黄琛;张海斌;刘威洁;邹潇睿;李勇;张君;;中性粒细胞凋亡与肺部疾病探讨[J];家庭医药.就医选药;2017年07期
2 ;中性粒细胞抑制人单个核细胞释放TNF-α及其机制的研究[J];中国病理生理杂志;2001年08期
3 赵修竹;;在体外由脂多糖、白细胞间介素-1及肿瘤坏死因子-α诱导的内皮细胞表面因子可以加强由CDw18—依赖机制引起的中性粒细胞粘连作用[J];国外医学(分子生物学分册);1987年04期
4 潘安丽;;严重中性粒细胞减少病人的成人呼吸窘迫综合征(ARDS)[J];国外医学(内科学分册);1987年06期
5 陈祥银,严仪昭,西品香,张宏,张宝玲;山莨菪碱(654-2)对中性粒细胞功能的影响[J];中国医学科学院学报;1988年04期
6 兰志勋,闵龙秋;麻醉药物对人体中性粒细胞功能的影响[J];国外医学.麻醉学与复苏分册;1988年05期
7 何凤慈,唐汝愚;钙与中性粒细胞功能的关系[J];中国药理学通报;1989年02期
8 贾纲政;用玻片分离单层细胞法检测山羊中性粒细胞的吞噬功能[J];中国兽医科技;1989年01期
9 孙黎明;糖尿病人中性粒细胞的抗感染功能[J];国外医学.内分泌学分册;1989年04期
10 何健;陈玉林;;中性粒细胞的杀菌机理[J];国外医学.创伤与外科基本问题分册;1989年01期
11 张圣明;崔为发;李建华;白林;王树庆;李锋杰;胡匡祜;李子孝;;慢性再生碍障性贫血治疗前后与正常人骨髓中性粒细胞糖原定量分析[J];潍坊医学院学报;1989年04期
12 李亭亭;柯越海;程洪强;;中性粒细胞在哮喘中作用的研究进展[J];浙江大学学报(医学版);2016年05期
13 谢丽花;赖铭裕;;中性粒细胞与胃癌关系的研究进展[J];内科;2016年03期
14 张亚;吴云红;郎凤娇;朱亮;;中性粒细胞的功能及其与器官移植关系的研究进展[J];中国免疫学杂志;2014年12期
15 张卫平;张蕾;柳喜洋;;化疗对恶性肿瘤患者的疗效和对中性粒细胞减少的分析[J];医药论坛杂志;2012年06期
16 刘志君,许川山,薛国文;~(60)Co辐照后小鼠中性粒细胞功能的观察[J];激光杂志;2000年04期
17 尚东;杨岚;党晓敏;;吸烟对中性粒细胞功能影响的研究[J];陕西医学杂志;2013年06期
18 谢东北;郝选明;;新发现的中性粒细胞杀菌途径NETs[J];中国免疫学杂志;2008年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 钱申贤;;获得性中性粒细胞减少的新认识[A];2007年浙江省血液病学术年会论文汇编[C];2007年
2 董炜;谢挺;董叫云;金曙雯;花兰女;宋菲;青春;陆树良;;晚期糖基化终末产物对中性粒细胞生物学行为的影响[A];第六届全国烧伤救治专题研讨会论文汇编[C];2009年
3 李洪照;王化泉;邵宗鸿;;MDS患者反向迁移中性粒细胞的变化研究[A];第十三届全国免疫学学术大会摘要汇编[C];2018年
4 谢东北;郝选明;孙焱;雒小恩;;NETs—新发现的中性粒细胞杀菌途径[A];中国生理学会2007年消化内分泌生殖学术研讨会论文摘要汇编[C];2007年
5 齐妍;吕欣冉;崔雪玲;柳忠辉;;激活素应答中性粒细胞亚群特征鉴定及其功能研究[A];第十三届全国免疫学学术大会摘要汇编[C];2018年
6 余霞;姚志荣;;中性粒细胞在慢性皮肤粘膜念珠菌病发病中的作用[A];中华医学会第14次全国皮肤性病学术年会论文汇编[C];2008年
7 卢明友;;白细胞、中性粒细胞百分比率及血小板与机体感染的相关性[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年
8 任利成;黄晓元;龙剑虹;;琥珀酸对中性粒细胞的抑制作用[A];全国烧伤早期处理专题研讨会论文集[C];2002年
9 邓新立;黄文荣;丛玉隆;邹德勇;;重组人粒细胞集落刺激因子对中性粒细胞及其表面分子表达的影响[A];第十届全军检验医学学术会议论文汇编[C];2005年
10 尹晓雪;刘彦虹;;中性粒细胞胞外诱捕网的产生及其作用的研究[A];第九届全国免疫学学术大会论文集[C];2014年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王美佳;支气管哮喘患者中性粒细胞激素反应性和血浆CC10水平与临床表型关系的研究[D];华中科技大学;2017年
2 李敏;CCL3通过趋化并激活中性粒细胞加重EV71感染脑损伤的机制研究[D];吉林大学;2018年
3 胡国昌;抑制中性粒细胞激活:吸入麻醉药心肌保护的新机制[D];中国医科大学;2004年
4 张银中;细胞因子及异丙酚对中性粒细胞凋亡的影响[D];中国协和医科大学;2003年
5 李文鹏;单个中性粒细胞中过氧化物酶、过氧化氢、活性氧的测定[D];山东大学;2006年
6 袁春华;fMLP诱导中性粒细胞极性及其机制研究[D];南方医科大学;2007年
7 胡慧媛;Survivin在GM-CSF/G-CSF诱导的抗中性粒细胞凋亡中的作用[D];中国医科大学;2007年
8 赵东亮;钙信号参与中性粒细胞极性化过程的研究[D];南方医科大学;2009年
9 郭宇超;中性粒细胞激活在冠状动脉扩张发病机制中的作用研究[D];北京协和医学院;2017年
10 黄伟;MFG-E8调控系统性红斑狼疮内中性粒细胞免疫反应及组织损伤的作用机制研究[D];华中科技大学;2017年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 金子凡;中性粒细胞淋巴细胞比、淋巴细胞单核细胞比与脑出血短期转归的关系[D];中国医科大学;2018年
2 陈嘉韡;B7-H4对中性粒细胞的免疫调节作用[D];苏州大学;2018年
3 苟静;Mac-1在SLE患者中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)形成中的作用[D];川北医学院;2018年
4 陈蕾;口腔癌微环境对中性粒细胞氧化线粒体DNA的影响[D];广西医科大学;2018年
5 陆姗姗;Pam3CSK4增强GM-CSF诱导的中性粒细胞对MRSA的杀菌功能及机制研究[D];南昌大学;2018年
6 胡挺;氧糖剥夺后CD99介导中性粒细胞穿过脑血管内皮参与缺血性脑损伤炎性机制的研究[D];南京大学;2018年
7 连艳珍;中性粒细胞相关生物物理参数在细菌性感染疾病中的变化及其临床价值[D];郑州大学;2018年
8 张艺森;脂多糖对中性粒细胞吞噬功能的调控作用及分子机制[D];江苏大学;2017年
9 宋娟丽;122例小细胞肺癌患者化疗后中性粒细胞减少与疗效相关性分析[D];大连医科大学;2014年
10 顾晔;妊娠滋养细胞肿瘤化疗后中性粒细胞减少危险因素分析[D];广西医科大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前2条
1 通讯员 吴奕 张明平 记者 夏文燕;谁在乱挥中性粒细胞的指挥棒?[N];江苏科技报;2017年
2 张中桥;中性粒细胞引起皮瓣损伤的机制[N];中国医药报;2004年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978