收藏本站
《广西医科大学》 2000年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

蝮蛇毒纤溶酶的分离纯化和性质研究

蓝秀万  
【摘要】: 目的:从江浙蝮蛇毒中分离纯化无出血作用的纤溶酶, 研究其理化性质,分析末端氨基酸序列,为进一步获得cDNA及全 序列分析、基因克隆与表达及临床应用研究奠定基础。方法:应 用Sephadex G-75,DEAE Sepharose Cl-6B柱层析分离纯化蝮蛇毒 纤溶酶,用纤维蛋白平板测纤溶活性、pH对酶活性的影响、抑制 剂对酶活性的影响。用PAGE结合纤维蛋白覆盖法定位纤溶组分电 泳迁移率。SDS-PAGE测定分子量,IEF测定等电点,SDS-PAGE 分析纤溶酶对纤维蛋白(原)肽链水解特异性。用浊度法研究其对 人富血小板血浆由ADP诱导的血小板聚集的影响。发色底物法测 其对底物S-2238、S-2251的Km值。结果:用PAGE结合纤维蛋 白覆盖法定位测定江浙蝮蛇毒中至少有电泳迁移率为0.159、0.27、 0.508、0.841的四个纤溶组分。从江浙蝮蛇毒中分离纯化到一个电 泳迁移率为0.841,分子量为23.8ku,等电点为4.875,无出血毒 性,对热稳定的纤溶酶。EDTA和β-巯基乙醇能抑制其活性并改 变其空间结构,Cu~(2+)、Co~(2+)也抑制其活性,PMSF、PABA、Mg~(2+)、 Zn~(2+)、Ca~(2+)、K~+对其活性无影响,说明它是一种单链金属蛋白酶, 二硫键对维持其结构有重要作用,与纤维蛋白原或纤维蛋白保温5 分钟能迅速水解Aα(α)链,随后缓慢水解Bβ(β)链,对γ (γ-γ)链无影响,证明其属α-纤溶酶。该纤溶酶可抑制ADP诱 导的血小板聚集。对S-2251Km为1.72×10~(-4)mol/L,对S-2238Km 为1.88×10~(-4)mol/L。N末端氨基酸序列为:QRFPTRYIEL。
【学位授予单位】:广西医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2000
【分类号】:Q55

手机知网App
【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 宗国升;蝮蛇毒蛋白C激活组份的分离提纯及其性质的研究[D];吉林大学;2007年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 毛建平,孙志贤;蛇毒纤维蛋白原水解酶[J];动物学杂志;1997年02期
2 叶智彰,于力,涂光俦,冉永禄,阮长耿,陈重坤,程大卫,严菊英,陈悦书;浙江产蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)蛇毒纤溶组份对凝血系统的作用[J];动物学研究;1981年01期
3 黎肇炎;黄玉;万丽玲;汤圣希;;蝮蛇蛇毒类纤溶酶对动物血栓形成的影响[J];广西医学院学报;1984年04期
4 黎肇炎;黄玉;万丽玲;汤圣希;;蝮蛇毒抗血小板组分对血小板聚集功能的影响[J];广西医学院学报;1985年04期
5 舒雨雁;洪息君;储开疆;李曼玲;班建东;汤圣希;;蝮蛇蛇毒类纤溶酶的分离纯化及一些特性的研究[J];广西医学院学报;1987年01期
6 韦世秀;汤圣希;;短尾蝮蛇毒柱层析分离及酶活性和生理活性的测定[J];广西医学院学报;1991年01期
7 雷丹青;尖吻蝮蛇毒纤溶酶的柱层析分离[J];中国生化药物杂志;1996年04期
8 朱正光,吴曙光;眼镜蛇毒纤维蛋白原溶解因子的纯化及理化性质的研究[J];中国生物化学与分子生物学报;1999年05期
9 陈家树,俞励平,梁秀霞,梁陆光;五步蛇毒纤溶组分Ⅱ对大鼠颈动脉血栓的溶栓作用[J];中国药理学通报;1998年05期
10 唐绍庆 ,韦世秀 ,汤圣希;蛇毒纤维蛋白溶解酶活力的试管定量测定法[J];中国药理学与毒理学杂志;1987年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 武廷章;徐晋麟;马飞;郭勇;;黄鳝雌雄个体间LDH和EST同工酶的比较研究[J];安徽大学学报(自然科学版);1992年04期
2 施媚;何执中;;以壳聚糖为基质对蚯蚓纤溶酶进行亲和层析[J];安徽师范大学学报(自然科学版);2007年01期
3 刘恒烈,战广琴,文汉;油菜籽萌发初期酯酶同工酶特性分析[J];安徽农学院学报;1990年03期
4 张智,谢中稳,李瑶;安徽绞股蓝属植物资源分布及其过氧化物酶同工酶的研究[J];安徽农业大学学报;1993年04期
5 凌尔军,杨胜广,付吉涛;不同添食条件及发育阶段的家蚕血液蛋白电泳图谱分析[J];安徽农业大学学报;1998年01期
6 刘如笋,钦俊德;鸭属中几种鸭卵蛋白质的比较——对北京鸭起源的探讨[J];动物学报;1979年03期
7 赵尔宓,吴贯夫,武祥福,陈远聪,江明恃,张景康,徐科;我国蝮属蛇毒的聚丙烯酰胺凝胶电泳比较——兼论蛇毒电泳在毒蛇分类上的应用价值[J];动物学报;1981年03期
8 周宗汉,林金榜;血清乳酸脱氢酶同功酶圆盘电泳分离法在鱼类分类工作中的应用[J];动物学杂志;1983年05期
9 郭亮霞;羚牛、同羊及黄牛血清蛋白电泳的比较研究[J];动物学杂志;1989年02期
10 卢宝泉,王蕴玲,王俊莉;斑海豹组织LDH同工酶的初步研究[J];动物学杂志;1999年02期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 丁有学;刘兰;;纳豆激酶研究进展[A];2007年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陈政强;不同条件下九孔鲍免疫防御因子的差异性[D];中国海洋大学;2009年
2 徐成;牙鲆雌核发育分析鉴定与性别决定机制研究[D];中国科学院海洋研究所;2000年
3 尤锋;牙鲆群体遗传多样性及鲽形目鱼类分子系统学初步研究[D];中国科学院海洋研究所;2001年
4 赵会英;电致孔与离子导入促进蛇毒降纤酶经皮转运的研究[D];沈阳药科大学;2001年
5 杨青;两种蝮蛇毒类凝血酶基因的克隆表达与分离纯化[D];大连理工大学;2002年
6 叶勇;江浙蝮蛇毒镇痛C4组分提取纯化及其对内阿片肽调控机理研究[D];浙江中医学院;2003年
7 刘晓兰;根霉纤溶酶发酵、纯化和酶学性质研究[D];天津科技大学;2004年
8 常国斌;两种野生鹌鹑与家鹑进化趋异水平的研究[D];扬州大学;2004年
9 巩宁;牡蛎非整倍体的制备及其生物学特性研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2003年
10 齐祥明;加压CO_2-乙醇-水体系等电沉淀蛋白质过程的研究[D];浙江大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郭妍妍;纤溶酶基因在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达[D];河北农业大学;2011年
2 李肖肖;方格星虫纤溶酶的分离纯化及其性质研究[D];广西医科大学;2011年
3 冬黎黎;中介蝮蛇毒纤溶酶基因表达的研究[D];哈尔滨师范大学;2011年
4 唐娅;加热对尖吻蝮蛇蛇毒及其组分免疫原性及生物毒性的影响[D];广州医学院;2010年
5 唐双意;五步蛇无出血活性纤溶酶的药效学研究[D];广西医科大学;2001年
6 金长江;He-He激光对野桑蚕天蚕生物学效应研究[D];安徽农业大学;2001年
7 薛明;淮河鲤同工酶及其对形态学遗传效应的研究[D];安徽农业大学;2001年
8 高雪;中国驴种来源的遗传学研究[D];西北农林科技大学;2001年
9 易晓华;南疆扁桃营养评价及遗传分析研究[D];西北农林科技大学;2001年
10 杨海波;桂北五步蛇金属蛋白酶基因的克隆和序列分析[D];广西医科大学;2002年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前7条
1 黄文瑶;白中华;;Protac——一种新的蛋白C活化剂[J];国外医学.输血及血液学分册;1991年04期
2 顾敏祥,邵慧珍,徐也鲁,王振义;人血浆蛋白C的纯化及其抗血清制备[J];上海第二医科大学学报;1987年02期
3 郑文波,瞿国伟,黄美华;天然蛇毒蛋白C激活剂的氨基酸序列及其比较[J];蛇志;1999年01期
4 刘萍,徐建民,金茜,王益清,朱洪,周元聪;江浙蝮蛇毒抗血小板聚集组分的分离纯化及活性分析[J];中国实验血液学杂志;2004年02期
5 王钦红,王鸿利,邵慧珍;抗活化的蛋白C是引起静脉血栓形成的一个重要原因[J];中华血液学杂志;1996年09期
6 郑艳珍,朱定尔,周伯通;蛋白C基因新突变His134Asn所致Ⅰ型蛋白C缺乏症[J];中华血液学杂志;1998年03期
7 庄俊华,鄢盛恺,林其燧;活化蛋白C抵抗现象及其实验室检测[J];中华医学检验杂志;1998年03期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 叶智彰,于力,涂光俦,冉永禄,阮长耿,陈重坤,程大卫,严菊英,陈悦书;浙江产蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)蛇毒纤溶组份对凝血系统的作用[J];动物学研究;1981年01期
2 阮长耿,陈重坤,陈悦书,于力,涂光俦,许金菊,冉永禄;蝮蛇Agkistrodon halys Pallas蛇毒纤溶酶对纤维蛋白质的作用[J];动物学研究;1981年02期
3 黎肇炎;黄玉;万丽玲;汤圣希;;蝮蛇蛇毒类纤溶酶对动物血栓形成的影响[J];广西医学院学报;1984年04期
4 韦世秀;汤圣希;;短尾蝮蛇毒柱层析分离及酶活性和生理活性的测定[J];广西医学院学报;1991年01期
5 冯莹,谭获,刘泽霖,余清声,管锦霞;眼镜蛇毒抗血栓形成的实验研究[J];广州医学院学报;1996年02期
6 舒雨雁;洪息君;班建东;储开疆;汤圣希;;应用电泳滴定曲线预测离子交换层析法的最佳pH条件[J];生物化学与生物物理进展;1985年06期
7 ;蝮蛇毒的神经毒成分的研究——Ⅰ.蝮蛇毒对神经系统的作用[J];Acta Biochimica et Biophysica Sinica;1976年04期
8 涂光俦,冉永禄,武天爱,于力;蛇毒的研究与利用——Ⅳ.浙江产蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)蛇毒的柱层析分离及磷酸二酯酶的大规模纯化[J];Acta Biochimica et Biophysica Sinica;1979年02期
9 张世玲;肖义海;梁绪国;郭明才;赵海玲;黄文兴;吴葆杰;;蚯蚓纤溶酶对溶栓,纤溶和抗凝作用的影响[J];生化药物杂志;1987年03期
10 卢晓风,程惊秋,裴炎;麻蝇幼虫肠道蛋白酶BGP的分离纯化及性质[J];中国生物化学与分子生物学报;1998年04期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 ;蝮蛇毒硷性纤溶酶的性质研究[J];东南大学学报(医学版);1988年04期
2 刘晨光,魏香,刘万顺;血纤维蛋白水解酶的研究进展[J];生物工程进展;2001年02期
3 于德涵;刘玉芬;赵文阁;;中介蝮蛇毒纤溶酶基因克隆及生物信息学分析[J];中国农学通报;2009年06期
4 王骏,王敏,王以光;链霉菌产生的新型纤溶酶的纯化和性质的研究[J];生物工程学报;1999年02期
5 孙兆军,袁桂枝,梁国栋;蚯蚓纤溶酶分子生物学进展[J];生物工程进展;2001年06期
6 刘常金,赵彦丽,曹卫忠;产纤溶酶枯草杆菌液体发酵工艺优化研究[J];生物技术;2004年06期
7 赵君秋;纤溶酶与盐酸丁咯地尔联合治疗椎-基底动脉供血不足的临床研究[J];蛇志;2005年02期
8 刘晨光,魏香,刘万顺;海洋假单胞菌纤溶酶的酶学性质的研究[J];青岛海洋大学学报(自然科学版);2001年05期
9 蔡超靖;王泽建;张华;;光敏试剂诱变选育纤溶酶高产菌株[J];科技信息(学术研究);2007年03期
10 翁郁华;杨晓彤;杨明俊;杨庆尧;;微生物纤溶酶的多样性及应用前景[J];现代生物医学进展;2010年08期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张雪琴;康冀川;文庭池;雷帮星;何劲;;蚯蚓体内外微生物产纤溶酶菌株的分离筛选[A];2010年中国菌物学会学术年会论文摘要集[C];2010年
2 周汉明;夏敬胜;;纤溶酶辅助治疗2型糖尿病62例[A];2011年全国医药学术论坛交流会暨临床药学与药学服务研究进展培训班论文集[C];2011年
3 王倩;金玫;黄丽娟;;三参通脉合剂对冠心病患者纤溶酶纤维蛋白原影响的临床研究[A];第六次全国中西医结合心血管会学术会议论文汇编[C];2002年
4 蒋仲青;刘万顺;韩宝芹;朱琦;;一种新型纤溶酶的溶栓作用及其机制的研究[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
5 邢桃红;张军;汪文翠;;纤溶酶治疗下肢深静脉血栓形成的临床观察与护理[A];外科重症监护专科知识培训暨学术交流会论文集[C];2008年
6 郑颖;沈居仁;范泉水;王双印;邱薇;李作生;张富强;;尖吻蝮蛇毒中纤溶酶的分离纯化及其氨基酸序列测定[A];第八届中国生物毒素学术研讨会论文摘要集[C];2007年
7 张箴波;张学荣;舒雨雁;;江浙蝮蛇毒纤溶酶的分离纯化及生物性质[A];中国毒理学会第四届全国学术会议论文(摘要)集[C];2005年
8 周涛;孙大庆;吴鹏;杨燕菲;孙强;;中药配合纤溶酶治疗下肢深静脉血栓形成临床研究[A];中华中医药学会周围血管病分会第四届学术大会暨中华中医药学会周围血管病分会25年会庆论文集[C];2011年
9 张治国;连桂芳;陈洪;;蚯蚓抗肿瘤成分的分离与研究(第一阶段小结)[A];中国生物化学与分子生物学会农业生物化学与分子生物学分会第八次学术研讨会论文集[C];2008年
10 郑颖;沈居仁;范泉水;王双印;邱薇;李作生;张富强;;尖吻蝮蛇毒中纤溶酶的分离纯化及其氨基酸序列测定[A];第八届中国生物毒素学术研讨会论文摘要[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 金伟秋 译;微纤溶酶有望用于治疗眼后部疾病[N];中国医药报;2009年
2 叶勇;姚广涛;阮叶萍;蝮蛇毒镇痛作用与亮氨酸脑啡肽有关[N];中国医药报;2005年
3 王丹 孙书博;赛生药业:审慎面对市场[N];医药经济报;2004年
4 王晓民 杨冬梅 赵江 王玉春 刑立举;缩短病程 提高治愈率[N];医药经济报;2003年
5 晓艳;金属蛋白酶促使细胞凋亡[N];医药经济报;2002年
6 徐蜀远;溶栓药物的研究进展(下)[N];中国医药报;2001年
7 沈书杰;来自人体的药物[N];民族医药报;2003年
8 钟惟德;疗效相当 成本参差[N];医药经济报;2001年
9 常怡勇;不宜与丹参合用的西药[N];上海中医药报;2002年
10 常怡勇;不宜与丹参合用的西药[N];中国医药报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘晓兰;根霉纤溶酶发酵、纯化和酶学性质研究[D];天津科技大学;2004年
2 马晓莉;组织型纤溶酶原激活物及其抑制剂对血管平滑肌细胞增生迁移的作用及其有关机制[D];中国协和医科大学;1997年
3 刘东;根霉纤溶酶发酵过程优化及其溶栓作用的试验研究[D];天津科技大学;2005年
4 杨青;两种蝮蛇毒类凝血酶基因的克隆表达与分离纯化[D];大连理工大学;2002年
5 常实;同种异体肝细胞移植对大鼠肝脏纤维化的影响[D];中南大学;2007年
6 高柱虎;两种新型多功能纤溶酶的鉴定及其分子生物学特性研究[D];武汉大学;2004年
7 孔德升;组织因子途径抑制物-2及其结构域1的基因克隆、表达和功能研究[D];复旦大学;2006年
8 王建秋;重组人Bikunin的制备及其抑制肿瘤浸润和转移的研究[D];吉林大学;2008年
9 王欣;CD36短发夹RNA干扰重组慢病毒抑制大鼠肺泡巨噬细胞L-TGF-β1活化及其阻抑矽肺纤维化的研究[D];中国医科大学;2009年
10 王常观;金属蛋白酶在外伤性视网膜脱离中的表达[D];中国人民解放军军医进修学院;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 蓝秀万;蝮蛇毒纤溶酶的分离纯化和性质研究[D];广西医科大学;2000年
2 严萍;一种新型纤溶酶的研究[D];广西大学;2004年
3 冯志华;产纤溶酶地衣芽孢杆菌与中药红花相辅相成作用的研究[D];四川大学;2004年
4 罗刚;蝮蛇毒介导的小鼠急性心肌损伤及心肌组织中TNF-α表达的研究[D];南华大学;2010年
5 钟哲峰;蝮蛇毒介导的小鼠急性肝损伤及血清P-选择素水平的研究[D];南华大学;2010年
6 阿拉达日吐;超高压处理对乳中纤溶酶和脂肪酶的钝化效应研究[D];内蒙古农业大学;2003年
7 张勇;离子诱变选育纤溶酶(Plasmin)高产菌以及部分酶学性质研究[D];四川大学;2002年
8 邓敏;白唇竹叶青(Trimeresurus albolabris)蛇毒纤溶组分的分离纯化及性质研究[D];重庆师范大学;2008年
9 胡细连;蝮蛇毒金属蛋白酶的cDNA克隆及表达[D];广西医科大学;2001年
10 王光利;芽孢杆菌纤溶酶的纯化、性质及其发酵条件的研究[D];西南农业大学;2001年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026