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《广西医科大学》 2002年
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中国4株伯氏疏螺旋体5s-23srRNA基因间隔区的克隆、序列分析和外膜蛋白A的克隆及表达

曾霞  
【摘要】: 目的:对广西、贵州的4株伯氏疏螺旋体分离株进行基因种鉴定,进而克隆其外膜蛋白A(OSPA),测序分析其变异情况,体外表达OSPA基因,获取OSPA蛋白,为制备诊断试剂和疫苗研究作基础准备。方法:利用5s-23srRNA(rrf-rrl)基因间隔区引物进行PCR扩增,其产物插入质粒pGEM-T Easy中,构建重组质粒,经测序并与国外分离株进行同源性比较,鉴定4株伯氏疏螺旋体(GXLD-4、9、18和长14)的基因型。应用PCR技术、分子克隆、原核表达等方法从4株伯氏疏螺旋体全细胞DNA组中扩增得到OSPA基因,分别克隆到质粒pGEM-T Easy上,对阳性克隆进行测序和序列分析,与国外分离株进行同源性比较,并用限制性内切酶NdeI和XhoI从重组质粒pGEM-T Easy-OSPA上将OSPA基因切下,分别克隆到表达载体pET3oa中,在大肠杆菌BL_21中进行表达。结果:GXLD-4、9、18及长14株(贵州)均可扩增出242bp的5s-23srRNA间隔区基因,同源性达99%以上。与Borrelia valaisiana基因种的同源性均比其他基因种高,核苷酸同源性为97.1~97.9%。4株伯氏疏螺旋体所扩增出的OSPA基因均为774bP,编码258个氨基酸,4株间核苷酸同源性98.7~99.8%,氨基酸同源性98~99%,与国外分离株10MT株、Ya501 株的同源性较好。OSPA基因在大肠杆菌中高效表达,分子量为 3 IKD。 结论:4株伯氏疏螺旋体均属于 Borrelia valaisiana基因种,具有相同的 OSPA血清型,与 10MT株和 Ya501株属同一 OSPA血清型,此结果为 国内首次报告。重组OSPA在大肠杆菌上的成功表达为制备莱姆病诊断 试剂和疫苗研究奠定了基础。
【学位授予单位】:广西医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:R346

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