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《广西医科大学》 2009年
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中药注射剂致敏性研究

闫位娟  
【摘要】: 目的: 通过小鼠、豚鼠、Beagle犬的类过敏(anaphylactoid reaction)反应试验,筛选一个敏感度、准确率高的类过敏反应试验方法,通过吐温80 ( Tween 80)的定性定量检测,调查中药注射剂(traditional Chinese medicine injection)中吐温80的情况,选择含有吐温80的品种进行类过敏试验,探讨吐温80对中药注射剂致敏性(sensitization)的影响,从辅料方面寻找一个解决某些中药注射剂致敏性的方法。 方法: 1、小鼠类过敏试验:小鼠一次性尾静脉注射给药致敏,给药剂量采用成人日用量的15倍(公斤体重),给药容积0.5ml/只,给药后观察小鼠的行为学取血检测血浆中组胺(Histamine)含量,以行为学评分(behavioral score)和组胺含量变化综合判定类过敏反应结果。 2、豚鼠类过敏试验:豚鼠一次性静脉推注,给药容积2ml/只,给药剂量采用人临床用量的6倍,给药后观察豚鼠的行为学变化,15min后股动脉取血检测血浆组胺含量,以行为学评分和组胺含量变化综合判定类过敏反应结果。 3、Beagle犬类过敏、过敏试验:实验开始第1、3、5及14天分别给予各组犬相应药液,前3次为致敏阶段,给药体积均为5.0ml.kg-1,给药剂量相当于临床成人用药的等效剂量,第4次为激发阶段,给药体积为第一次的2倍,前肢静脉恒速注射。连续观察给药前及后3h内每组犬的行为学变化,记录症状出现及消失时间,并根据症状的轻重进行行为学评分;首次给药前后及末次药后10min抽取4ml静脉血检测组胺、IgE、IgG和IgM。 4、吐温80的定性定量测定方法 4.1吐温80的定性测定 4.1.1硫氰酸钴铵显色法(Cobalt thiocyanate ammonium color-developing method):供试液加硫氰酸钴铵溶液2ml,摇匀,加1ml氯仿摇匀,静置1.5h,观察氯仿层颜色。结果判断:氯仿层出现蓝色为阳性(++),浅蓝色为弱阳(+),绿色为可疑(±),其他颜色均记为阴性(-)。 4.1.2薄层层析法(Silicon thin-layer chromatography method): 4.1.2.1样品分析薄层条件:以甲醇-水-甲酸为展开剂,8:5:1的比例混合,能明显分开各供试品,效果理想。 4.1.2.2点样与展开:吸取各组供试品适量,点于距离下端约0.5cm处,点样结束,吹干,将板放入展开剂饱和的碘缸中,展开8cm将板取出,吹干溶剂,约15min左右,检识各注射液中含有吐温80的情况。结果判断:在与阳性对照色谱在相应位置上有清晰的棕黄色斑点记为阳性(++),不清晰者记为弱阳(+),没有棕黄色斑点者记为阴性(-)。 4.2吐温80定量测定:比色法,进行方法学考察并测定样品。 结果: 1、一次性给药后,以行为异常和组胺含量变化综合判断临床过敏性休克排名较前的5种中药注射剂对小鼠的类过敏反应,双黄连和脉络宁判定为阳性,鱼腥草、黄芪、参麦为可疑,与临床报道不全相符。 2、一次性给药后,以行为异常和组胺含量变化综合判断临床过敏性休克排名较前的10种中药注射剂对豚鼠类过敏反应,双黄连判定为可疑,其他均为阴性,与临床报道不相符。 3、一次性给药后,临床报道过敏性休克排名较前的10位中药注射剂对Beagle犬进行类过敏试验,综合行为异常,组胺含量变化为主要判定指标,结果显示10种中药注射剂均出现了类过敏反应阳性或强阳性结果,未发现假阴性结果,与临床报道相符。 4、通过对43种中药注射剂中吐温80的检测,肝炎宁、醒脑静、鱼腥草、正清风痛宁、参麦、生脉、复方苦参、脉络宁、消癌平、胆木、血必净、复方丹参、鸡矢藤、得力生及康艾注射液都含有吐温80,含量从0.72±0.00~6.85±0.02 mg.ml-1不等,其他注射剂未检出吐温80。 5、说明书上标示的执行标准不含吐温80的中药注射剂而查出吐温80的有生脉、复方苦参和正清风痛宁。 6、含有吐温80的5种中药注射液首次静脉给药后出现严重的行为异常;通过对血浆中组胺检测,参麦、肝炎宁和醒脑静组组胺明显升高,综合行为异常和组胺含量变化为主要判定指标综合判断,5种中药注射剂均达到类过敏反应强阳性或阳性。 7、激发给药后的过敏试验,含有吐温80的5种注射剂出现严重的行为异常;血浆组胺检测发现,参麦、生脉、正清风痛宁和肝炎宁组明显升高,综合行为异常,组胺含量变化为主要判定指标综合判断,5种注射剂过敏试验达到阳性或强阳性。 结论: 1、类过敏反应以Beagle犬为最佳实验动物,以行为异常和组胺含量变化为主要判定指标,IgE作为辅助指标,结果准确可靠,得到结果与临床报告相符,未发现假阴性。 2、本研究采用硫氰酸钴铵显色法和薄层层析法两种方法进行中药注射剂中吐温80的鉴定,结果较为准确。 3、中药注射剂中吐温80的添加有待加强监督与规范。中药注射剂中辅料应加强检测及安全性评价,特别对部颁标准中没有标明或标明不含有吐温80的注射剂,进行吐温80的定性定量检测,为进一步研究、评价、增强中药注射剂的安全性以及临床用药提供可靠的依据。 4、含吐温80的5个中药注射剂品种发生严重不良反应与吐温80相关,今后应谨慎使用,并逐步禁用于中药注射剂,积极寻找安全、合理的适用于中药注射剂的药用辅料,全面取代吐温80。 5、大量研究及临床应用表明,134种中药注射剂有的品种存在不同程度的安全隐患,特别是排序在前的品种,问题更为严重,应尽快组织力量进行一次更新换代的全面系统研究,从根本上、源头上解决问题,提高产品质量,安全性及有效性。
【学位授予单位】:广西医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R286

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5 刘晓毅;大豆食源性致敏蛋白的识别、去除及脱敏后加工特性研究[D];中国农业大学;2005年
6 黄海;川芎嗪干预慢性充血性心力衰竭心室重构的实验研究[D];福建中医学院;2005年
7 刘广存;犬梗阻性脑积水模型的特征及其病理生理学改变的实验研究[D];山东大学;2005年
8 吴嘉瑞;基于文献数据库和传统药物警戒思想的中药注射剂安全性研究[D];北京中医药大学;2007年
9 林春水;异丙酚单次剂量和恒速静脉注射在犬脑的摄取和分布[D];南方医科大学;2008年
10 陆军;骨水泥掺入~(153)Sm-EDTMP后PVP治疗脊柱转移瘤实验与临床研究[D];第四军医大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 汪怀山;类过敏反应检测模型的建立及在中药注射剂类过敏反应检测中的应用[D];山东大学;2011年
2 仇士东;类过敏反应检测模型的优化及其在中药注射剂中的应用[D];山东大学;2012年
3 刘善宽;脱氢野百合碱诱发肺动脉高压犬的循环内皮祖细胞数量和功能变化[D];浙江大学;2007年
4 卢刚;异丙酚单次剂量静脉注射在犬脑的摄取和分布[D];第一军医大学;2007年
5 苏威;犬攻击行为性状及其相关基因研究[D];扬州大学;2008年
6 邵景涛;犬气腹与非气腹腹腔镜卵巢子宫切除术的研究[D];东北农业大学;2008年
7 刘长涛;异丙酚不同麻醉深度下犬脑的摄取和分布[D];南方医科大学;2008年
8 李猛;实验性脑积水脑室周围组织病理学改变及多巴胺能神经元数量变化的研究[D];山东大学;2005年
9 陈晖;犬前列腺增生与诱导型一氧化氮合酶关系的实验研究[D];武汉大学;2005年
10 马琳;建立犬颈总动脉—颈外动脉高流量血管搭桥模型的实验研究[D];天津医科大学;2006年
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