收藏本站
《广西医科大学》 2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

胚胎干细胞体外培养体系的初步探讨

刘琦  
【摘要】: 目的:在前期课题组研究的基础之上,优化饲养层体系,稳定培养条件,探索适合自身实验室条件的胚胎干细胞体外培养体系,对实验细胞的描述记录实行标准化和规范化。 方法:(1).使用胰酶消化法体外分离培养MEF,MTT法测定P3、P8和复苏P3 MEF生长活力,优化原代取材、传代、冻存和复苏细胞的条件,免疫组化检测MEF特异性标志——波形蛋白的表达,使用丝裂霉素C处理MEF,建立饲养层培养体系。(2).自然受孕法和超排卵法获取昆明小鼠3.5dpc胚胎,体外培养发育至囊胚,全胚培养法获取ICM,在饲养层上增殖,然后离散ICM种于新鲜的饲养层上,观察ESC集落的形成,探索ESC体外培养体系。(3).收集生殖中心IVF-ET后剩余无冷冻价值的胚胎,医院伦理委员会讨论通过,签署患者知情同意书后用于体外培养,探索其体外培养条件。(4).依据《实验细胞资源的描述标准与管理规范》,整理实验数据,对实验细胞的描述记录实行标准化和规范化。 结果:(1).使用胰酶消化法可从10~18dpc小鼠胚胎中获取MEF,倒置显微镜下观察,13~15dpc小鼠胚胎获得的MEF质量较佳;第五代之后MEF逐渐呈衰老相;MEF生长曲线显示:在第3天时三组细胞均进入对数增长期,P8组细胞的增殖速度明显低于其他两组(P0.05)。SABC免疫组化染色鉴定MEF,90%以上细胞中间丝波形蛋白呈棕色颗粒或棕色着染,即为阳性。丝裂霉素C处理MEF,终浓度为10μg/ml,作用时间2h,实验显示在抑制细胞有丝分裂的同时又不引起大量细胞死亡。(2).自然受孕法每只昆明小鼠可获取8~12个3.5dpc胚胎,质量较好的胚胎在饲养层体系中可逐渐发育至囊胚扩张期,自然从透明带孵出,ICM附着于饲养层上快速增殖。(3).整理了近三年课题组培养和冻存实验细胞数据,制定了规范化的实验细胞记录表格,标准化了实验细胞的描述。 结论:(1).优化稳定了饲养层培养体系并鉴定饲养层细胞。(2).初步探索了胚胎培养及ICM集落形成的条件。
【学位授予单位】:广西医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R329

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 秦茂林,蔡文琴,姚忠祥;昆明种系小鼠胚胎干细胞的分离培养及特性鉴定[J];第三军医大学学报;2001年09期
2 金洁;周金玲;史小林;;小鼠睾丸支持细胞对大脑皮质细胞的体外营养作用[J];基础医学与临床;2006年08期
3 蔡霞,高学军,张鹏,唐胜建,鞠晓燕;体外培养不同代次人皮肤成纤维细胞超微结构的研究[J];解剖科学进展;2005年03期
4 陈东玲;邵文钊;王秀琴;吴旻;;体外长期保存人二倍体成纤维细胞系的初步观察[J];解剖学报;1985年01期
5 盛利琴;叶荣;陈学进;韩甫;张焕相;;饲养层体系的建立与胚胎干细胞的培养[J];解剖学杂志;2007年03期
6 王国云,孔北华,李栋,张辉,白增亮;昆明鼠胚胎干细胞的分离培养与鉴定[J];山东大学学报(理学版);2004年03期
7 孟国良,汤富酬,尚克刚,薛友纺;高效建立129/ter、C57BL/6J小鼠胚胎干细胞系的方法学探讨[J];生物工程学报;2002年06期
8 李煜;梁琳;王振飞;贾瑞贞;戴宝贞;李瑶;;昆明白小鼠胚胎干细胞分离与体外培养[J];细胞生物学杂志;2007年06期
9 王锦绣;刘慧雯;鲍君红;;昆明小鼠3.5d囊胚分离培养胚胎干细胞并诱导分化为胰岛素前体细胞的实验[J];中国组织工程研究与临床康复;2007年15期
10 李卫东;张晓刚;常静;蒋芳萍;;昆明小鼠胚胎干细胞的分离培养方法[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年21期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杨澜;赵清;韩知峡;邱志群;常晓松;陈济安;许川;胡冉;舒为群;;转染抗辐射菌recO基因对紫外线所致皮肤成纤维细胞氧化及炎性损伤的保护作用[J];癌变.畸变.突变;2009年02期
2 杨丽芬;王清华;韩芬霞;项智锋;张晓建;;哺乳动物胚胎干细胞分离与培养的研究进展[J];安徽农业科学;2006年12期
3 张廷龙;董雅娟;柏学进;赵晶;岳福杰;史文升;龚宜超;;昆明小鼠ES细胞的分离培养及鉴定[J];安徽农业科学;2008年13期
4 吴庆侠;董海龙;芮亚培;;牦牛子宫内膜腺上皮细胞分离培养方法比较[J];安徽农业科学;2011年18期
5 彭常安;宋玉华;李春雨;;微波提取葛仙米多糖及其抑癌作用研究[J];安徽农业科学;2012年20期
6 王训;韩永升;韩咏竹;胡纪源;李凯;喻绪恩;杨任民;杨斌;;成肌细胞移植治疗DMD模型-mdx鼠骨骼肌Dystrophin表达的实验研究[J];安徽医学;2009年02期
7 赵斌;葛金芳;朱娟娟;黄晓晖;李俊;;小议在MTT法测细胞增殖抑制率中IC_(50)的计算方法[J];安徽医药;2007年09期
8 李笑春;戴敏;陈鹏;;丹皮酚对高脂血清诱导的大鼠主动脉内皮细胞损伤的保护作用及其黏附功能的影响[J];安徽中医学院学报;2010年01期
9 李彦博;孙静;李洁;;益气养阴方抗血管生成作用及对肿瘤细胞VEGF及MMP2表达的影响[J];安徽中医学院学报;2010年02期
10 方林森,余又新;表皮干细胞研究进展[J];蚌埠医学院学报;2005年02期
中国重要会议论文全文数据库 前9条
1 李炜宾;安全;李曙芳;李建国;李浩然;吴凯丽;;神经干细胞悬液安全性实验研究[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第三卷)[C];2010年
2 陈波;罗永芬;崔瑾;冯玲媚;杨孝芳;冯麟;;静态压力刺激对大鼠“足三里”穴区及穴旁区域成纤维细胞PGE_2和IL-6释放影响的比较研究[A];第二届贵州省自然科学优秀学术论文评选获奖论文集(2007年)[C];2007年
3 安立龙;效梅;张土保;董喜芳;许英梅;;不同浓度犊牛血清对三黄鸡原始生殖细胞生长、增殖的影响[A];中国畜牧兽医学会家畜生态学分会第七届全国代表大会暨学术研讨会论文集[C];2008年
4 效梅;安立龙;张土保;吴凌峰;郭鸿波;许英梅;;小鼠胰腺干细胞的分离与培养的研究[A];中国畜牧兽医学会家畜生态学分会第七届全国代表大会暨学术研讨会论文集[C];2008年
5 李华涛;任晓丽;张荣蓉;李响;李德文;陈萌;宋贤义;刘云;;紫杉醇诱导CHMm凋亡和细胞ROS、SOD失衡的研究[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(上册)[C];2010年
6 石娇;吴高峰;于维军;;骨髓基质干细胞的培养与鉴定[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十六次学术研讨会论文集[C];2010年
7 李荣亨;周小莉;;复元胶囊含药血清对软骨细胞增殖与合成代谢的影响[A];全国中西医结合强直性脊柱炎专题研讨会论文汇编[C];2007年
8 朱艳琴;刘粉霞;徐玉芳;;苦参素诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的体内外实验研究[A];中华中医药学会第二届中医方证基础研究与临床应用学术研讨会论文集[C];2008年
9 肖党生;俞玲娣;余国友;杨云梅;;干细胞与中医五行相生[A];浙江省中西医结合学会第二届老年病专业委员会第一次年会学术论文集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 郑景辉;心血瘀阻证心肌微环境变化及对骨髓间充质干细胞移植的影响[D];湖南中医药大学;2010年
2 姚小磊;基于TGF-β1与Bcl-2的抗干眼症中药高通量筛选体系的建立[D];湖南中医药大学;2010年
3 郑敏;急性白血病儿童维生素D受体基因多态性和表达及维生素D对白血病细胞的影响[D];广西医科大学;2011年
4 贺常亮;治疗鸡大肠杆菌病的中药方剂筛选及其作用机理研究[D];吉林大学;2011年
5 谭琦;加味丹参饮诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的研究[D];湖南中医药大学;2011年
6 丁国武;黄河兰州段环境激素污染水平及有机污染物的细胞毒性研究[D];兰州大学;2011年
7 赵丽;筋脉通对糖尿病大鼠坐骨神经及雪旺细胞DNA氧化损伤致细胞凋亡的影响[D];北京协和医学院;2011年
8 周玥;人参皂苷Rg1延缓造血干/祖细胞衰老的机理研究[D];重庆医科大学;2011年
9 刘平;三甲氧基二苯乙烯及其对非小细胞肺癌A549细胞的抗肿瘤作用及分子机制研究[D];中南大学;2010年
10 韦霄;饮用水中碘乙酸和碘仿的检测识别、遗传毒性和潜在致癌性研究[D];复旦大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 胡莎莎;急性心肌梗死后冠状动脉内移植骨髓间充质干细胞与单个核细胞对心脏结构及功能影响[D];南京医科大学;2010年
2 段超;靶向大鼠血管平滑肌细胞STAT3的慢病毒干扰载体的构建及其效果鉴定的研究[D];南京医科大学;2010年
3 刘子青;MGF对肌卫星细胞增殖及Akt蛋白表达的影响[D];上海体育学院;2010年
4 李程鹏;Mammosphere低表达蛋白GIPC1干扰对MCF-7乳腺癌细胞蛋白表达的影响[D];浙江理工大学;2010年
5 辛宁;PDX-1真核表达载体构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达[D];郑州大学;2010年
6 孙士强;人脐带间充质干细胞修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究[D];郑州大学;2010年
7 徐蕊;氟对大鼠睾丸支持细胞雄激素结合蛋白和抑制素B的影响[D];郑州大学;2010年
8 李铭花;三种传统配伍中药抗氧化特性的研究[D];山东农业大学;2010年
9 辛英豪;DHV-Ⅰ单克隆抗体的制备与胶体金试纸条的研制[D];山东农业大学;2010年
10 臧传宝;上皮细胞CFTR通道介导的阴离子转运机制[D];中国海洋大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 余树民;徐小明;华进联;窦忠英;;小鼠胚胎干细胞建系技术研究进展[J];动物学杂志;2006年01期
2 胡新立,尚克刚;6个小鼠ES细胞系的建立和鉴定[J];北京大学学报(自然科学版);1996年02期
3 童英,邹冀中,尚克刚;用大鼠心肌条件培养基建立来源于C57BL/6J小鼠的ES细胞系[J];北京大学学报(自然科学版);2000年04期
4 秦茂林,蔡文琴,姚忠祥;昆明种系小鼠胚胎干细胞的分离培养及特性鉴定[J];第三军医大学学报;2001年09期
5 黄锦桃,撒亚莲,项平,程树军,李海标;胚胎干细胞饲养层培养的改良法[J];解剖学研究;2003年01期
6 吴木潮;胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞的定向分化[J];国外医学(内分泌学分册);2003年03期
7 王颖;陈莉娜;张艳艳;关伟军;;饲养层细胞对胚胎干细胞的影响及其分离培养的影响因素[J];中国畜牧兽医;2007年11期
8 陈德英,王海燕,刘建军;利用内源性碱性磷酸酶显示胆小管[J];解剖科学进展;2000年04期
9 蔡霞,张鹏,唐胜建,牟少春,杨彪炳,梁晓琴;正常人成纤维细胞老化过程中β-半乳糖苷酶的变化[J];解剖科学进展;2004年01期
10 张肇英;王达珍;李昱;郭继彤;李雪峰;;用胚泡注射法产生小鼠嵌合体[J];内蒙古大学学报(自然科学版);1990年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王璐;王亚平;;小鼠胚胎干细胞饲养层制备条件的研究[J];重庆医科大学学报;2008年01期
2 董韬;纪红;秦逸人;金连弘;刘慧雯;;昆明小鼠胚胎成纤维细胞分离培养及应用[J];解剖科学进展;2008年01期
3 方驰华;胡海北;郝建志;陈霞;;ICR小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养及饲养层制备[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年23期
4 胡一新;黄王景;;小鼠胚胎干细胞饲养层的制备[J];吉林医学;2009年09期
5 黄林;莫曾南;覃敏;;昆明小鼠胚胎干细胞滋养层制备条件的实验研究[J];现代生物医学进展;2010年01期
6 刘民,李柏青;小鼠胚胎成纤维细胞的分离、扩增和抑制[J];中国实验动物学杂志;2002年04期
7 高舒平,王太一,时伟红,董婉为;用饲养层分离胚胎干细胞集落的实验初探[J];中国实验动物学报;2000年03期
8 刘峰;雷闽湘;陈慧玲;;小鼠饲养层细胞制备与小鼠胚胎干细胞SF1-G的培养[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年23期
9 蔡琳;李菲菲;;胚胎干细胞研究进展[J];大连医科大学学报;2007年03期
10 王志华;何志旭;米蔷;汪浩文;;人脐静脉内皮细胞饲养层促进胚胎干细胞的生长[J];基础医学与临床;2008年10期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 胡敏华;区颖蕾;李莉;郭欣政;张守全;;胚胎干细胞饲养层的优化及影响内细胞团贴壁率的探讨[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
2 陈胜锋;黄文静;王丙云;陈志胜;计慧琴;;不同饲养层对鸡胚胎干细胞培养效果的影响[A];全国动物生理生化第十次学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
3 徐小明;窦忠英;华进联;葛秀国;;免疫外科法分离克隆BALB/c小鼠胚胎干细胞[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
4 熊吉信;刘小春;刘兆轩;杨春江;;TGF-β1 VEGF体外诱导胚胎干细胞为血管内皮细胞[A];2009全国中西医结合周围血管疾病学术交流会论文集[C];2009年
5 王丙云;陈胜锋;陈志胜;计慧琴;;禽类胚胎干细胞的研究概况[A];全国动物生理生化第九次学术交流会论文摘要汇编[C];2006年
6 陈胜锋;王丙云;计慧琴;陈志胜;刘雪芬;;鸡胚胎干细胞的分离、培养与鉴定的初步研究[A];全国动物生理生化第九次学术交流会论文摘要汇编[C];2006年
7 秦茂林;蔡文琴;张吉强;李成仁;李巍;;雌二醇对胚胎干细胞神经定向分化诱导的影响[A];中国解剖学会第十一届全国组织学与胚胎学青年学术研讨会论文汇编[C];2009年
8 何志旭;黄璟;吴倩倩;肖林生;;胚胎干细胞诱导发育为树突状细胞及其生物学特性的研究[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年
9 张绪超;黄绍良;陈惠芹;吴北燕;黄永兰;蔡耘;;人AGM区基质细胞微环境诱导胚胎干细胞定向分化为造血干细胞[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年
10 王锦绣;;胚胎干细胞定向诱导分化为胰岛素前体细胞的实验[A];2007年中国解剖学会第十届全国组织学与胚胎学青年学术研讨会论文摘要汇编[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 张树庸 赵贵英;干细胞研究的突破[N];人民日报;2009年
2 记者 刘霞;英用胚胎干细胞制造出红血球[N];科技日报;2010年
3 孙国根;复旦大学成功提取首个大鼠胚胎干细胞[N];中国医药报;2009年
4 本报首席记者 任荃;第二颗“全能种子”会不会抢先“发芽”[N];文汇报;2009年
5 刘霞;美用胚胎干细胞制造出血小板[N];科技日报;2011年
6 记者 郑晓春;科学家发现胚胎干细胞分化机制[N];科技日报;2008年
7 记者 李大庆;“小小”入选《时代周刊》2009年十大医学突破[N];科技日报;2009年
8 曹淑芬;用胚胎干细胞生成骨骼[N];中国中医药报;2001年
9 闫洁;胚胎干细胞治疗:首次临床试验[N];新华每日电讯;2010年
10 记者 黄堃;利用人类卵细胞,成功培养出胚胎干细胞[N];新华每日电讯;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 谭舟;MK和GM-CSFRα在胚胎干细胞中的表达与功能研究[D];浙江大学;2010年
2 曲文玉;人胚胎干细胞的分离、培养及建系[D];中国医科大学;2006年
3 葛秀国;山羊胚胎干细胞的分离与培养[D];西北农林科技大学;2007年
4 李相运;小鼠胚胎干细胞多能性研究[D];西北农林科技大学;2001年
5 刘岚;胚胎干细胞的分离培养与定向分化研究[D];中国农业科学院;2008年
6 赵惠萍;骨髓内皮细胞条件培养液诱导胚胎干细胞向造血细胞分化[D];中南大学;2003年
7 马岚;猕猴胚胎干细胞的分离、鉴定、培养及应用研究[D];中国科学院研究生院(昆明动物研究所);2002年
8 朱敏洁;人参皂甙Rg1诱导胚胎干细胞分化为心肌样细胞和在胚胎干细胞迁移中的作用[D];华中科技大学;2008年
9 吴旋;基因工程化胚胎干细胞用于AD治疗的基础实验研究[D];第三军医大学;2001年
10 王瑞;牛胚胎干细胞培养条件以及差异表达基因的研究[D];内蒙古大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 韩晓芳;MEF和hLEF对小鼠ES细胞支持作用的比较性研究[D];华中科技大学;2009年
2 刘琦;胚胎干细胞体外培养体系的初步探讨[D];广西医科大学;2009年
3 廖素彬;饲养层对小鼠胚胎干细胞生长特性的影响[D];河北医科大学;2003年
4 李三华;昆白小鼠胚胎干细胞的分离、培养及鉴定[D];西北农林科技大学;2006年
5 赵晶;昆明小鼠胚胎干细胞的分离、培养及鉴定[D];西北农林科技大学;2008年
6 陈林君;小鼠卵母细胞的孤雌激活和胚胎干细胞的初步研究[D];南京师范大学;2005年
7 孙国杰;山羊类胚胎干细胞的分离、克隆[D];河北农业大学;2002年
8 周文平;小鼠三种胚胎干细胞表观相关基因的分析[D];河南大学;2011年
9 吕一帆;胚胎干细胞在内膜损伤小鼠宫腔内移植的实验研究[D];福建医科大学;2010年
10 刘小春;转化生长因子β_1联合血管内皮细胞生长因子体外诱导胚胎干细胞向内皮细胞分化[D];南昌大学;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026