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《广西医科大学》 2010年
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siRNA干扰LOX基因对乳腺癌细胞MDA-MB-231生物学特性影响的研究

耿莹  
【摘要】: 目的:扩增低侵袭性乳腺癌细胞MCF-7和高侵袭/转移性乳腺癌细胞MDA-MB-231的LOX基因并检测LOX在两种细胞中表达差异,并通过siRNA干扰高侵袭/转移性乳腺癌细胞MDA-MB-231的LOX基因表达后细胞侵袭和增殖性变化,探讨LOX基因对乳腺癌细胞生物学行为的影响。 方法:通过RT-PCR扩增低侵袭性乳腺癌细胞MCF-7和高侵袭/转移性乳腺癌细胞MDA-MB-231 LOX基因,经测序确认后,通过荧光定量RT-PCR的SYBR Green I荧光嵌合法相对定量两种细胞的LOX基因表达。设计合成LOX基因siRNA干扰片段,瞬转高表达LOX基因的乳腺癌细胞,通过半定量RT-PCR,RealtimePCR,细胞免疫荧光检测干扰效率,筛选出干扰效果最明显的一对siRNA,设空白对照组(未转染组,Con),阴性对照组(转染无效用dsRNA组,Mock)和实验组(RNAi干扰组)每组设两个平行孔,并于转然后24小时、48小时、72小时进行Transwell侵袭实验、划痕实验和CCK-8细胞增殖实验,观察干扰LOX基因表达后对乳腺癌细胞侵袭和增殖的生物学行为的影响。 结果:扩增出LOX基因,测序结果与目的基因序列相符,荧光定量2-△△CT方法统计分析MCF-7和MDA-MB-231细胞的LOX基因相对表达差异,MDA-MB-231高表达LOX基因。瞬时转染化学合成的LOX siRNA后,MDA-MB-231细胞中LOX的mRNA在转染48h表达下降明显。干扰LOX表达后,体外运动实验(Transwell)结果显示RNAi组、Mock组和Con组中MDA-MB-231细胞穿过微孔滤膜到达下室面的细胞数分别为50±2、48±4和30±1;转染48h后的划痕实验0h、6h、12h和24h图片和迁移距离显示RNAi组较Mock组和Con组迁徙运动能力明显减弱,差异有统计学意义。CCK-8细胞增殖实验,RNAi组在转染后24h、48h、72h和96h的生长抑制率分别为30.5%、40.8%、50.4%和36.95%,阴性对照组和空白对照组细胞生长未受到明显抑制,RNAi组较Mock组和未转染组(Con)细胞增殖明显抑制,p0.05有统计学意义。 结论:①高侵袭/转移性乳腺癌细胞MDA-MB-231高表达LOX基因;②干扰MDA-MB-231细胞LOX基因表达后细胞的侵袭运动能力明显减弱;LOX参与乳腺癌细胞增殖,干扰MDA-MB-231细胞LOX基因表达后,细胞生长增殖受到明显抑制。
【学位授予单位】:广西医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R737.9

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【参考文献】
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