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《广西医科大学》 2010年
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硫胺素、叶酸对柯萨奇B_3病毒感染的心肌细胞保护作用的研究

邓莹莹  
【摘要】: 【目的】 在细胞水平上探讨硫胺素、叶酸及其合剂对柯萨奇B3(CVB3)病毒感染的心肌细胞是否具有保护作用。 【方法】 1.用胰酶-差速贴壁法后,将心肌细胞分为两组进行体外培养,其中一组细胞加入抑制剂5-溴脱氧尿苷(5-BrdU)作为对照。每天观察记录两组心肌细胞的大小、形态和搏动频率,计算1、3、5、7天心肌细胞的阳性率,并用MTT法绘制心肌细胞体外生长曲线。两组心肌细胞的搏动频率比较用t检验与单因素方差分析,心肌细胞α-横纹肌肌动蛋白(α-SA)抗体阳性率的比较采用χ2检验。 2.明确心肌细胞的最佳干预时间后,用柯萨奇B3(CVB3)病毒致心肌细胞损伤,使用最大无毒剂量(TC0)的硫胺素、叶酸及其合剂,分别用4类方式处理心肌细胞,即药物在病毒前(I)、后(II)加及药物与病毒同时(III)、在药物与病毒作用后(IV)加入,待CVB3感染的心肌细胞病变程度达“++++”时,采用MTT比色法测定心肌细胞OD值,并结合心肌细胞病变程度(CPE)、搏动频率及心肌酶等多项指标,观察两种维生素及其合剂对心肌细胞的保护作用。配伍组比较用单因素方差分析。 【结果】 1.使用浓度为0.08%的胰酶可成功培养乳鼠心肌细胞,5-BrdU组和非抑制剂组的细胞在形态学及搏动性上差异不大。72h后心肌细胞同步性搏动。经α-横纹肌肌动蛋白(α-SA)鉴定,除第1天外,第3、5、7天抑制剂组的心肌细胞阳性率均高于非抑制组,差别有统计学意义(P0.05)。在1-7天培养期间,第3天为指数生长期的中期,细胞生长最旺盛,在第4天后,细胞生长缓慢进入平台期,细胞增殖速度明显降低。 2.硫胺素、叶酸及其合剂按照四种方式处理后发现,在Ⅰ、Ⅱ种方式中,药物组OD值与病毒对照组OD值比较差异有显著性(P0.05),在Ⅲ、Ⅳ类作用方式中,药物组OD值与病毒对照组OD值比较差异无显著性(P0.05)。药物组心肌细胞搏动频率较病毒组心肌细胞搏动频率高,有显著差异(P0.05),CPE减轻,心肌酶显著降低(P0.05),但药物组与正常组比较仍较高(P0.05)。 【结论】 1.使用胰酶消化-差速贴壁以及5-Brdu法进行乳鼠心肌细胞的培养,单细胞收获率高,细胞存活率高,心肌细胞和非心肌细胞分离较彻底,心肌细胞纯度较高,此方法建立的心肌细胞体外模型可以满足后继干预实验的要求。心肌细胞培养的第3天,即72h时点,是对心肌细胞进行干预并观察处理效应的最佳时间。 2.体外使用柯萨奇B3(CVB3)病毒可损伤心肌细胞。硫胺素、叶酸及其合剂可提高心肌细胞的存活率,明显提高搏动的心肌细胞数量及心肌细胞的搏动频率,降低CPE及心肌酶产生,对心肌细胞具有一定的保护作用。
【学位授予单位】:广西医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R965

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