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《广西医科大学》 2010年
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早期激素性股骨头坏死差异蛋白质组学分析及相关蛋白表达验证

胡峰  
【摘要】: 随着激素在临床上广泛应用,激素性股骨头缺血性坏死(steroid-induced avascular necrosis of femoral head,SANFH)已居非创伤性股骨头坏死的首位。目前SANFH的发病机制尚不明确,众多发病学说往往仅从单一的分子或基因水平上对SANFH发病机理进行研究,无法整体、动态、多层次地了解SANFH发生过程中相关调控基因和相关功能基因蛋白产物的种类、数量及峰值变化规律。随着后基因组时代的来临,蛋白质组学研究的兴起,为我们研究SANFH的发病机制提供了新的思路及技术手段。 目的:(1)通过反复大剂量注射地塞米松联合增加股骨头负重的方法建立兔早期SANFH模型,为后续比较蛋白质组学研究提供较为理想的动物模型。(2)优化兔股骨头蛋白质组双向电泳(2-DE)技术。(3)创建早期SANFH不同时点(注射激素后3w、6w、9w、12w )与正常股骨头的蛋白质表达图谱,经图像分析及质谱鉴定后筛选出差异蛋白并观察其变化规律。(4)对差异表达蛋白Annexin A1进行表达验证,以证实2-DE结果的可靠性。 方法:(1)健康成年新西兰大白兔48只,随机分为模型组和对照组。模型组臀肌注射地塞米松针(10mg/kg),每次间隔48h,通过迫使兔子站立进食水增加股骨头负重,对照组相同时点注射等量生理盐水。分别于给药后3w,6w,9w,12w处死兔子,每次模型组和对照组各6只。观察动物一般状态、股骨头外观、病理学改变(包括骨髓腔内脂肪细胞、骨小梁及骨细胞)及骨细胞Caspase-3活性变化情况。(2)用健康成年新西兰大白兔股骨头作为样本,改进2-DE程序中的几个关键环节,对样品制备(骨组织破碎、细胞裂解、除盐)、等电聚焦程序、固相胶条的选择和凝胶染色方法进行一系列比较和优化。(3)获取SANFH早期病理变化过程的不同时间点(注射激素后3w、6w、9w、12w)及正常股骨头坏死标本,利用2-DE技术创建早期SANFH不同时点与正常股骨头的蛋白表达图谱,运用基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对差异点进行鉴定。(4)应用免疫印迹(Western Blot)技术检测Annexin A1在各组的表达水平,并与2-DE结果进行比较。 结果:(1)模型组给药3w后可见骨髓腔内脂肪细胞体积增大,数量增多,并且随给药时间的延长脂肪细胞肥大更为明显,甚至发生融合,骨髓干细胞相对减少,脂肪细胞面积百分比大于对照组(P0.05);模型组6w后空骨陷凹率大于对照组(P 0.05);模型组9w后可见骨小梁稀疏变细、结构紊乱、断裂,骨小梁面积百分比小于对照组(P0.05);电镜下骨细胞形态发生异常改变;模型组给药6w后骨细胞Caspase-3活性高于对照组(P 0.05)。(2)采用组织匀浆法破碎骨组织,改良细胞裂解液进行蛋白质提取,丙酮沉淀法除盐,选择24cmPH3-10NL的固相胶条上样,调整后的等电聚焦(IEF)程序进行电泳,胶体考马斯亮兰染色法进行凝胶染色可以得到较为理想的蛋白表达图谱。(3)获得分辨率和重复性较好的早期SANFH不同时间点及正常股骨头的蛋白表达图谱。通过比较后发现24个差异蛋白点(差异大于2倍),经质谱成功鉴定出20个,其中7种蛋白质在早期SANFH中呈现表达上升,另外13种蛋白呈现表达下降。(4)Western blot显示早期SANFH中Annexin A1的表达水平低于对照组,其表达趋势与2-DE结果相一致。 结论:(1)反复大剂量注射地塞米松联合增加股骨头负重的方法可以诱导出兔早期SANFH模型。(2)建立并优化了兔股骨头蛋白质2-DE技术,得到了比较理想的2-DE图谱,为进一步开展疾病差异蛋白质组学研究提供了良好的技术条件。(3)经过优化后的2-DE技术,获得了早期SANFH不同时点及正常股骨头蛋白质表达图谱。发现了20种差异表达的蛋白,丰富了疾病相关的差异蛋白质组学的数据,初步筛选出潜在的与疾病早期发病机制相关的重要蛋白质。(4)Western blot结果与2-DE结果相一致,验证了之前实验获得Annexin A1表达变化趋势的正确性,Annexin A1可以成为进一步研究疾病早期发病机制的候选蛋白分子。
【学位授予单位】:广西医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R681.8

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张义福;刘建;孟国林;袁志;吕荣;袁鹏;;兔激素性股骨头坏死病程中肝脂肪酶改变的意义[J];第四军医大学学报;2006年08期
2 刘元林;于晓妉;刘晓丹;李秀森;毛宁;;间充质干细胞定向成骨细胞分化的蛋白质组学分析[J];第四军医大学学报;2006年17期
3 李鸿帅;张长青;;股骨头坏死动物模型研究进展[J];国际骨科学杂志;2006年03期
4 蒋兰兰;姜惠;张克勤;;大鼠成骨细胞分泌组双向电泳样品制备方法的建立[J];南京医科大学学报(自然科学版);2007年07期
5 樊粤光,袁浩,何伟,蔡振基,何振辉;692例股骨头缺血性坏死病因调查分析[J];广州中医学院学报;1994年01期
6 马信龙;孙智超;马剑雄;张华峰;王志钢;张园;王晨光;;改良型大鼠激素性股骨头坏死模型建立和相关评价[J];实用骨科杂志;2009年10期
7 崔杰峰;刘银坤;代智;周海君;宋海燕;张丽君;张予;孙瑞霞;陈洁;汤钊猷;;转移潜能不同人肝癌细胞系差异蛋白Annexin1的功能解析[J];生物化学与生物物理进展;2005年12期
8 刘懿,凌诒萍,钟慈声;annexin钙依赖磷脂结合蛋白在细胞分泌中的作用[J];生理科学进展;1997年04期
9 谢海柱,王滨,孙西河,王亦进,李联中;股骨头缺血坏死的MRI评价[J];实用放射学杂志;2002年06期
10 胡长根;刘强;陈君长;贺西京;王坤正;;激素性股骨头坏死的细胞学变化[J];中国临床康复;2006年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 谢秀丽;刘健;;类风湿关节炎蛋白质代谢的研究进展[J];安徽医药;2010年02期
2 周正新,李保林,杨荣建,王海彬,袁浩;股骨头缺血性坏死软骨细胞凋亡调控基因的临床研究[J];安徽中医学院学报;2004年05期
3 吕维宝;刘安平;王峰;;股骨头缺血性坏死的中医药治疗现状[J];安徽中医学院学报;2006年06期
4 沈俊杰;李华灿;乐宇民;;股骨头缺血性坏死数字减影血管造影及介入治疗效果观察[J];蚌埠医学院学报;2009年01期
5 袁牧;张阳;石士奎;杨培培;谢波;汪红梅;华元人;;介入法治疗股骨头缺血坏死20例[J];蚌埠医学院学报;2009年05期
6 王海彬,赵咏芳,石印玉,袁浩;中药对早期激素性股骨头坏死血管的影响[J];浙江中医学院学报;2000年06期
7 王海彬,何伟,刘少军,赵咏芳,袁浩,石印玉;早期激素性股骨头缺血坏死病理及超微结构[J];浙江中医学院学报;2001年05期
8 邱夏桑;高祖华;王迪迪;;股骨头坏死治疗前后血液流变学指标变化[J];浙江中医药大学学报;2006年06期
9 潘泽,邵会师,张兴志,王晓璐;复方健骨胶囊对兔股骨头缺血性坏死的修复[J];白求恩医科大学学报;1998年01期
10 王建设;庞明珍;吴逸明;;肺癌组织蛋白质组双向凝胶电泳方法的建立和优化[J];重庆医学;2011年34期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 史爱敏;刘峰卫;田金玲;绳景亚;李跃京;;39例经动脉介入治疗股骨头缺血性坏死的护理[A];河南省中医、中西医结合护理暨中西医骨伤护理研讨观摩交流会议论文集[C];2009年
2 姜金凯;;成人股骨头缺血坏死与供血动脉发育变异的相关研究[A];河南省第二届肿瘤微创治疗学术大会暨新乡抗癌协会肿瘤微创治疗专业委员会成立大会、河南省胸部疾病影像诊断与治疗新进展研讨会暨新乡市影像诊断新进展与新技术研讨会论文汇编[C];2007年
3 张雄军;王永志;邓志春;何云峰;柏魏;穆凤仙;;系统性红斑狼疮并发股骨头坏死的介入治疗初探[A];玉溪市第三届二次骨科学术研讨会论文汇编[C];2009年
4 张彦彩;印建国;;股骨头缺血坏死的影像学进展[A];第11届全国中西医结合骨伤科学术研讨会论文汇编[C];2003年
5 姚正凯;李盛华;;股骨头缺血坏死动物模型创建及中药治疗的实验研究进展[A];第11届全国中西医结合骨伤科学术研讨会论文汇编[C];2003年
6 庞智晖;何伟;张庆文;方斌;王海彬;李献成;陈镇秋;李可大;;打压植骨结合游离腓骨移植内稳定术治疗围塌陷期激素性股骨头坏死[A];中华中医药学会骨伤分会第四届第三次学术年会暨国家中医药管理局“十一五”重点专科(专病)建设骨伤协作组经验交流会论文汇编[C];2008年
7 刘铁钢;陈卫衡;何海军;谢文光;周宇;金智勇;王琪;;非创伤性股骨头坏死的流行病学研究[A];中华中医药学会骨伤分会第四届第三次学术年会暨国家中医药管理局“十一五”重点专科(专病)建设骨伤协作组经验交流会论文汇编[C];2008年
8 王荣田;陈卫衡;何海军;;股骨头坏死的发病特征分析[A];中华中医药学会骨伤分会第四届第三次学术年会暨国家中医药管理局“十一五”重点专科(专病)建设骨伤协作组经验交流会论文汇编[C];2008年
9 庞智晖;何伟;张庆文;方斌;王海彬;李献成;陈镇秋;李可大;;中药辅助改良减压植骨内稳定术治疗围塌陷期激素性股骨头坏死[A];中华中医药学会骨伤分会第四届第三次学术年会暨国家中医药管理局“十一五”重点专科(专病)建设骨伤协作组经验交流会论文汇编[C];2008年
10 唐芳根;李刚;袁浩;;激素性与酒精性股骨头坏死发病机制研究进展[A];浙江省中西医结合学会骨伤科专业委员会第十一次学术年会暨省级继续教育学习班论文汇编[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘文刚;CYP3A酶在激素性股骨头坏死发病中的作用及健骨方对其影响的实验研究[D];广州中医药大学;2011年
2 刘洪江;骨康含药血清对骨质疏松大鼠MSCs成脂分化调控因子PPARγ的影响[D];广州中医药大学;2011年
3 洪玉;骨髓间充质干细胞体外诱导分化为光感受器样细胞的蛋白质组学研究[D];福建医科大学;2011年
4 谭兴国;胆囊癌差异表达基因分析及AXL、Prostasin在胆囊癌侵袭转移中的作用研究[D];中南大学;2011年
5 仲卫红;土鳖虫含药血清对激素诱导骨髓间充质干细胞成脂和成骨分化差异蛋白组学的影响[D];福建中医药大学;2011年
6 师彬;仙鹿活骨丸的研制及其治疗股骨头坏死的机制研究[D];天津大学;2009年
7 冷燕奎;非创伤性股骨头坏死患者股骨头骨组织的差异蛋白组学研究[D];南方医科大学;2011年
8 刘鸣;siRNA阻断PPARγ基因表达预防激素性股骨头坏死的实验研究[D];郑州大学;2012年
9 徐传毅;生脉成骨胶囊治疗激素性股骨头坏死的骨修复机理研究[D];广州中医药大学;2001年
10 郭坤亮;内源性糖皮质激素在酒精性股骨头缺血坏死发病机制中的作用[D];重庆医科大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张林锋;siRNA干扰预防酒精性股骨头坏死的动物实验研究[D];郑州大学;2010年
2 郑大利;股骨头钻孔减压植骨术后活骨注射液关节腔注射治疗股骨头缺血性坏死的临床观察[D];黑龙江中医药大学;2010年
3 高强;冠心宁注射液关节腔注射配合中药蒸汽熏蒸治疗股骨头缺血性坏死的临床观察[D];黑龙江中医药大学;2010年
4 朱小明;脱氧雪腐镰刀菌烯醇致小鼠骨骼畸形模型建立及差异蛋白的筛选[D];泰山医学院;2010年
5 郝琦;钻孔减压配合海桐皮汤加味治疗股骨头坏死的临床观察[D];成都中医药大学;2010年
6 张彬;不同诱导时间下大鼠脂肪间充质干细胞成骨的差异[D];山西医科大学;2011年
7 孟春阳;锌促进骨髓间充质干细胞修复大鼠脊髓缺血再灌注损伤的研究[D];吉林大学;2011年
8 宋旸;SREBP-2、IGFBP3基因多态性与ANFH发病风险的研究[D];吉林大学;2011年
9 沈需;ADSCs对人胆管瘢痕成纤维细胞TGF-β/smad信号通路的作用及机制[D];昆明医学院;2011年
10 关舒元;长骨创伤性骨坏死早期骨髓缺血动物模型磁共振T_2mapping成像初探[D];暨南大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 谢嵘;朱剑虹;刘杭;樊惠芝;吴惺;姚鋆;陈露萍;沈亦雯;杨芃原;;中枢神经系统血管母细胞瘤的蛋白质组学分析[J];中国神经肿瘤杂志;2006年03期
2 王建华,尹庆水,黄清春,吴岳嵩;血管内皮生长因子促血管形成作用及其调控[J];第二军医大学学报;2004年02期
3 陈磊,齐振熙;血管内皮生长因子与股骨头缺血性坏死[J];福建中医学院学报;2005年01期
4 李雄,袁浩,何伟,方斌,贝美莲;大剂量激素冲击应用与长期应用对股骨头坏死影响的动物实验[J];骨与关节损伤杂志;1999年04期
5 何天源,陈诗书;血管内皮生长因子与血管生成[J];国外医学(分子生物学分册);1997年05期
6 夏书华;蛋白质组学中的双相电泳技术[J];国外医学.遗传学分册;2001年06期
7 陈光辉 ,王燕,李天德,邵建华;自成人脂肪组织分离与培养间充质干细胞的实验研究[J];解放军医学杂志;2004年06期
8 刘懿,凌诒萍,钟慈声;annexin钙依赖磷脂结合蛋白在细胞分泌中的作用[J];生理科学进展;1997年04期
9 李良;李冬菊;吴江;吴文超;陈槐卿;毛咏秋;;骨髓间充质干细胞在去卵巢大鼠骨质疏松发病机理中潜在的作用[J];生物医学工程学杂志;2006年01期
10 谢玲,应万涛,张开泰,项小琼,钱小红,王玉芝,吴德昌;双向电泳和肽质量指纹谱技术鉴定支气管上皮细胞恶性转化相关蛋白质ANX1-human[J];中国生物化学与分子生物学报;2000年05期
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中国期刊全文数据库 前10条
1 李倩,廖尚英;差异蛋白质组学在筛选肿瘤标记中的应用[J];生物学通报;2004年11期
2 武影;束蓉;;差异蛋白质组学常用技术及其在牙周炎研究中的应用[J];国际口腔医学杂志;2006年04期
3 常锐;刘畅;乔文涛;;蛋白质组学技术在病毒学研究中的应用[J];病毒学报;2008年03期
4 侯振江;侯建章;;血清差异蛋白质组学在肝癌研究中的进展[J];医学与哲学(临床决策论坛版);2009年02期
5 王伟;艾虹;;蛋白质组学在牙周组织研究中的应用[J];中华口腔医学研究杂志(电子版);2010年06期
6 孙正华;阳小燕;贺翔;孙雪松;;应用差异蛋白质组学的方法分析左氧氟沙星对肺炎链球菌D39的作用[J];微生物学通报;2011年05期
7 闫婷;王文礼;;后基因组时代的肝细胞性肝癌研究进展[J];内蒙古医学院学报;2006年S1期
8 达瑞;刘永琦;;差异蛋白组学分析与鉴定方法的研究进展[J];吉林医学;2010年33期
9 黄振烈;杨杏芬;越飞;黄建勋;李来玉;;差异蛋白质组学技术及其在免疫相关疾病中应用的研究进展[J];中国职业医学;2007年03期
10 王静;刘大海;;线粒体差异蛋白质组学在神经系统疾病中的研究进展[J];中国社区医师(医学专业);2010年23期
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1 唐仕波;郑钦象;许立帅;李文生;;差异蛋白质组学在增生性玻璃体视网膜病的应用[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年
2 詹怿婕;黄河清;;三种软体动物大脑神经节的蛋白质组学的研究[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
3 平飞云;王国云;;蛋白质组学在口腔鳞癌中的研究进展[A];浙江省抗癌协会头颈肿瘤外科专业委员会成立大会暨第一届学术会议论文汇编[C];2006年
4 丁莺;吕宾;沈雁;孟丽娜;陈硕;;肠易激综合征大鼠差异蛋白质组学研究[A];第二届浙江省消化病学术大会论文汇编[C];2009年
5 孙言伟;姜颖;贺福初;;大鼠肝脏2/3体积切除诱导肝再生过程中差异蛋白质组学研究[A];中国蛋白质组学第三届学术大会论文摘要[C];2005年
6 ;大会报告时间表[A];第二届全国植物蛋白质组学学术研讨会论文集[C];2007年
7 段晓明;卢清君;薛鹏;董喆;杨福全;王宁利;;高度近视患者的房水差异蛋白质组学研究[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年
8 李颖;陈长征;邢怡桥;贺涛;杜磊;李猛;;光损伤视网膜色素上皮细胞差异蛋白质组学分析[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年
9 陈清宇;;胰腺癌和慢性胰腺炎患者胰液差异蛋白质组学研究[A];2007年浙江省消化系疾病学术会议论文汇编[C];2007年
10 甄艳;苏静;王思思;戚金亮;田大成;杨永华;;铝毒胁迫下大豆差异蛋白质组学的研究[A];江苏省遗传学会第七届代表大会暨学术研讨会论文摘要汇编[C];2006年
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1 安杰;ACC细胞肿瘤肺转移及P19细胞神经元分化有关的差异蛋白质组学[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2004年
2 游向荣;龙眼成花转变与成花逆转的差异蛋白质组学研究[D];福建农林大学;2009年
3 林建峰;基于凝胶蛋白质组学技术在前列腺癌研究中的应用[D];厦门大学;2008年
4 赵飞;小菊锌指蛋白基因的表达分析及耐盐差异蛋白的分离鉴定[D];东北林业大学;2007年
5 张萃;中药对LPS诱导单核巨噬细胞增殖的抑制作用及其差异蛋白质分析[D];广州中医药大学;2006年
6 刘斌;帕金森氏病动物模型脑组织及病人血清差异蛋白质组学研究[D];中国协和医科大学;2008年
7 赵超;乙型肝炎病毒表面抗原转基因鼠肝脏差异蛋白质组学研究及其意义[D];复旦大学;2007年
8 熊君;氮素营养调控水稻化感抑草作用的分子生态学研究[D];福建农林大学;2008年
9 张颖;颈椎后纵韧带骨化症发病机制的比较蛋白质组学研究[D];第二军医大学;2008年
10 盖英萍;棉花、烟草响应低温胁迫的差异蛋白质组学研究[D];山东农业大学;2008年
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1 那宏坤;在镉盐和甲基对硫磷的胁迫下牙鲆肝脏和脑组织差异蛋白质组的研究[D];厦门大学;2008年
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3 赵振坤;钝顶螺旋藻两种不同形态藻丝体的生理和差异蛋白质组分析[D];厦门大学;2008年
4 庄景栋;不同氮源和2-OG浓度对铜绿微囊藻NirA的表达调控及差异蛋白组分析[D];厦门大学;2008年
5 耿昊;电针对急性脊髓损伤大鼠一氧化氮及差异蛋白质组学的机理研究[D];北京中医药大学;2007年
6 黄磊;化感水稻抑草作用对干旱胁迫响应的差异蛋白质组学研究[D];福建农林大学;2009年
7 向桢;采用DIGE方法对人类不育和高生育能力精子的差异蛋白质组学研究[D];中南大学;2009年
8 李小荟;PP_(333)处理黄瓜子叶节花芽分化、内源激素及差异蛋白组的研究[D];福建师范大学;2007年
9 李振方;怀牛膝连作促进效应及其分子机理研究[D];福建农林大学;2008年
10 苑晓晨;电针对急性脊髓损伤大鼠24h差异蛋白质组学及SOD含量变化的机理研究[D];北京中医药大学;2008年
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