收藏本站
《广西中医药大学》 2017年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

余甘子叶总黄酮的抗肿瘤作用及其机制研究

陈文雅  
【摘要】:目的:探讨余甘子叶总黄酮的抗肿瘤作用及其机制。方法:采用乙醇冷浸渗漉法提取余甘子叶总黄酮粗提物,利用D101大孔树脂柱层析法分离纯化余甘子叶总黄酮粗提物。采用SRB法比较余甘子总黄酮对7种不同肿瘤细胞株(即人肝癌细胞株Bel-7404及HepG-2、人宫颈癌细胞株Hela、人胃癌细胞株SGC7901、人鼻咽癌细胞株CNE-2、人肺癌细胞株H460和人卵巢癌细胞株A2780)增殖情况;采用IF FM HCS法检测Bel-7404细胞的DNA损伤情况,酶联免疫法检测Caspase-3活性含量;Hoechst 33258试剂盒检测细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期;建立Bel-7404裸鼠皮下移植瘤模型,观察余甘子叶总黄酮对Bel-7404裸鼠瘤的抑瘤率;免疫组化法和Western blot检测瘤块组织Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果:余甘子叶经提取、分离纯化得到的余甘子叶总黄酮,得率为4.90%;SRB法实验结果表明,与正常组相比,余甘子叶总黄酮对7种肿瘤细胞均具有明显的抑制作用,其中对Bel-7404细胞、H460细胞和CNE-2细胞的抑制作用最为显著,IC_(50)分别为453.46±40.06μg/mL、471.36±50.66μg/mL和463.26±40.75μg/mL,余甘子叶总黄酮高剂量组抑制效果与阳性药5-Fu相当。总黄酮高(500μg/mL)、中(250μg/mL)、低剂量(125μg/mL)作用于Bel-7404细胞24h、36h和48h后,IC_(50)分别为453.46±40.06μg/mL、253.75±41.25μg/mL、152.73±40.55μg/mL,提示余甘子叶总黄酮对细胞的抑制率呈现出量效与时效关系。IF FM HCS法结果表明余甘子叶总黄酮高、中剂量组对Bel-7404细胞的DNA具有显著的损伤作用(**p0.01),而低剂量组损伤作用不显著。Hoechst 33258染色后,可观察到余甘子叶总黄酮高、中、低剂量诱导的Bel-7404细胞出现不同程度的核固缩,细胞膜变薄等凋亡特征,高剂量组诱导凋亡的现象与5-Fu组相当。流式细胞术检测检测细胞周期的结果表明,余甘子叶总黄酮各剂量组可通过阻滞Bel-7404细胞的G0/G1期,且随着剂量浓度增加阻滞结果愈加明显。FITC-Annexin V/PI双标记法实验结果表明,细胞凋亡随总黄酮作用剂量的增加而提高。酶联免疫法检测Caspase-3的结果表明,总黄酮可以提高Bel-7404细胞裂解液中Caspase-3的含量。体内的实验结果表明,余甘子叶总黄酮高(495.55 mg/kg)、中(247.48mg/kg)、低剂量(123.89mg/kg)组对Bel-7404癌裸鼠异体移植瘤的抑制率分别为66.77%、29.03%、20.56%,表现出较好的抗肿瘤效果,且可以降低动物的肝脏指数和脾脏指数。免疫组化检测结果表明,与模型对比,余甘子叶总黄酮高、中组瘤块Bax的免疫阳性的面积显著增加,高剂量组Bcl-2免疫阳性面积显著减少。western blot检查结果表示,与模型组对比,余甘子叶总黄酮各剂量组的Bax蛋白的表达显著性增加,高剂量总黄酮可显著降低Bcl-2表达。结论:1、余甘子叶总黄酮具有显著的抗肿瘤活性。2、余甘子叶总黄酮通过提高Bax表达,抑制Bcl-2表达而诱导细胞凋亡,并抑制Bel-7404细胞的增殖。3、余甘子叶总黄酮可显著抑制Bel-7404裸鼠移植瘤的生长。
【学位授予单位】:广西中医药大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R285

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 姜建萍;梁臣艳;佟晓乐;甄汉深;钟振国;钟益宁;;广西余甘子叶导数光谱鉴别的研究[J];广西中医学院学报;2008年01期
2 梁臣艳;甄汉深;佟晓乐;张婷;钟益宁;刘振杰;;广西余甘子叶醋酸乙酯部位化学成分的研究[J];中成药;2009年05期
3 梁臣艳;甄汉深;佟晓乐;张婷;钟益宁;刘振杰;;广西余甘子叶挥发油化学成分的气相色谱-质谱联用分析[J];时珍国医国药;2009年04期
4 李舒;钟振国;赖进科;;余甘子叶提取物总黄酮的含量测定[J];辽宁中医药大学学报;2011年07期
5 钟振国;李学坚;董明姣;刘布鸣;陈明生;林霄;韦燕飞;韦勇汉;陆盛胜;黄金兰;罗雪菲;钟益宁;;余甘子叶中槲皮素的定性定量分析研究[J];时珍国医国药;2010年10期
6 钟振国;李学坚;董明姣;刘布鸣;陈明生;韦勇汉;陆盛胜;钟益宁;黄金兰;韦小清;;余甘子叶中的没食子酸的定性定量分析研究[J];时珍国医国药;2009年06期
7 曾春兰;钟振国;;余甘子叶提取物体外抗肿瘤作用研究[J];时珍国医国药;2008年03期
8 钟振国;曾春兰;;余甘子叶提取物体外抗菌实验研究[J];中药材;2008年03期
9 张杰;;余甘子叶提取物的抗炎活性[J];国外医药(植物药分册);1998年06期
10 钟振国;罗雪菲;黄金兰;崔雯;黄丹;冯颖琴;李彩萍;李曼莉;黄志其;;余甘子叶提取物对小鼠免疫功能的影响研究[J];中药材;2013年03期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 钟振国;梁红;钟益宁;李曼莉;;余甘子叶提取物没食子酸和没食子酸乙酯的体外抗肿瘤实验研究[A];现代化中药制剂发展与中药药理学研究交流会论文集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 钟益宁;余甘子叶有效化学成分及其抗肿瘤作用的研究[D];成都中医药大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 陈文雅;余甘子叶总黄酮的抗肿瘤作用及其机制研究[D];广西中医药大学;2017年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026