亲磷脂酸磷脂酶A1基因沉默对胰岛素分泌影响的研究

左晓臣

【摘要】：目的：研究亲磷脂酸磷脂酶A1(phosphatidic acid-preferring phospholipase Al, PA-PLA1)基因沉默对小鼠胰岛p细胞株MIN6胰岛素分泌的影响。方法：采用invitrogen网站提供的在线RNAi设计软件设计、合成小鼠PA-PLA1靶向shRNA,以Lipofectamin2000为转染试剂转染小鼠胰岛素分泌细胞MIN6,用荧光显微镜检测干扰载体的转染效率,实时荧光定量PCR检测MIN6细胞中PA-PLA1mRNA的表达水平,Western Blotting检测PA-PLA1蛋白的表达水平,同时对MIN6细胞行葡萄糖刺激胰岛素分泌实验,放免法测定细胞上清液中胰岛素分泌量。结果：本实验设计、合成了小鼠PA-PLA1靶向shRNA1、2,测序结果证实shRNA编码序列与设计的片段完全一致。转染MIN6细胞48h后荧光显微镜检测其干扰载体的转染效率约为50%。实时荧光定量PCR和Western Blotting检测,干扰载体1、2PA-PLA1mRNA表达水平分别下降11%和53%,蛋白表达水平分别下降53%和59%。对经RNAi处理过的MIN6细胞行葡萄糖刺激胰岛素分泌实验,测得细胞胰岛素分泌水平下降30%。结论：本文设计、合成了小鼠PA-PLA1靶向shRNA。所构建的小鼠PA-PLA1靶向shRNA干扰载体能有效转染小鼠胰岛分泌细胞MIN6。PA-PL A1基因沉默后的MIN6细胞胰岛素的分泌水平明显下降,表明PA-PLA1基因表达与MIN6细胞胰岛素分泌存在相关性,提示该酶对胰岛β细胞胰岛素分泌可能发挥正调节作用。本研究结果为进一步研究胰岛β细胞信号转导和胰岛素分泌的分子机制提供了新的线索。

【关键词】：亲磷脂酸磷脂酶A1 基因表达 RNA干扰 基因沉默 胰岛素分泌
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R346
【目录】：

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