沙田柚花柱S—糖蛋白的纯化及各器官特异蛋白的研究

【摘要】： 我们选取经过人工自花授粉3天后的沙田柚(Citrus grandis VarShatirtyu Hort)花柱为实验材料，切取1/2部位处花柱组织，研磨成匀浆后，进行抽提和硫酸铵盐析，得到35％级分的蛋白质粗提液，此液经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，显示出9条蛋白带，其中靠近正极端的两条蛋白带占较大优势。此液经CoA—Sepharose4B亲和柱层析，特异峰(S~#)仅显示一条蛋白带，恰好是35％级分中近正极端的两种蛋白中的一种最优势蛋白。对其部分生化性质测定定结果为：该蛋白为碱性糖蛋白，糖含量为92％,SDS—PAGE的实验结果表明它由两个亚基组成，分子量分别为38.0kD、32.0kD，等电点分别约为7.2、6.9。此外，作者还对其进行了生物学活性测定，该糖蛋白能抑制离体(in vitro)萌发白花花粉的花粉管的生长，并在一定范围内，加入的蛋白量越多，抑制作用也越强。以酵母rRNA为底物，测其核酸酶活性，酶活为118.3u／mg，这说明该糖蛋白有强烈降解RNA的能力。以上实验结果与目前国内外大量资料报道的控制自交不亲和相关蛋白(S—蛋白)的性质极为吻合，我们是在充分了解沙田柚配子体自交不亲和的结构基础和生化基础上着手此实验的。因此，我们可以准确的推测该糖蛋白为控制沙田柚自交不亲和的S—(糖)蛋白，根据此实验结果，作者还详细讨论了在沙田柚自交不亲和过程中S—蛋白的的重要作用机制。这极可能是：沙田柚自花授粉3天后，花柱S—蛋白大量被表达，此时，萌发花粉的花粉管正在不断向前伸长，但S—蛋白能选择地进入花粉管的内部降解其rRNA，从而使得管内蛋白质合成受阻而停止生长，最终导致不亲和反应。 另外，作者采用了SDS—PAGE技术对沙田柚的茎、叶、花萼、花瓣、花药、花柱和子房的可溶性蛋白进行比较分析，检测到茎中的31.0kD，叶中56.0kD，花药中的59.0kD、58.0kD、44.0kD、37.2kD、36.0kD、35.5kD、33.0kD、21.0kD、15.4kD，花柱中的43.0kD、38.5kD，子房中的33.5kD分别为各器官的特异蛋白质。对茎、叶、花药、花柱的全蛋白进行IEF—SDS—PAGE双向电泳分析结果也确定了相应于各自SDS—PAGE上特异蛋白带的特异斑点，而且，SDS—PAGE图谱上的一条蛋白带在IEF—SDS—PAGE双向图谱上呈现等电点不同而分子量相同的几个斑点，如花药的SDS—PAGE上的21.0kD和15.4kD蛋白带在IEF—SDS—PAGE分别为三个斑点、两个斑点。各器官的蛋白质含量以花药的最高，花萼的为最低。此实验结果，将为建立沙田柚特异蛋白的识别和鉴定体系，并进而对其特异蛋白基因的克隆和表达，提供较好的实验依据。

【学位授予单位】：广西师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2000
【分类号】：Q946