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《广西师范大学》 2007年
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动植物蛋白酶等酶活力的共振散射光谱测定

黄国霞  
【摘要】: 第一部分:绪论 介绍了共振散射技术理论及其在生化分析研究中的应用。介绍了木瓜蛋白酶、糜蛋白酶等五种蛋白酶活力测定的方法。综述了溶菌酶、辣根过氧化物酶的分析进展。 第二部分:酪蛋白缔合微粒的共振散射光谱研究及其在木瓜蛋白酶活力测定中的应用 在最佳实验条件下,木瓜蛋白酶催化水解酪蛋白(casein),剩余底物casein分别与三氯乙酸(TCA)、十二烷基苯磺酸钠(SDBS)、十二烷基硫酸钠(SDS)结合形成缔合微粒。该微粒在360 nm、400 nm、420 nm、470 nm、520 nm处产生5个共振散射峰,其中最强峰均位于470 nm。对于TCA-Casein-Papain、SDBS-Casein-Papain、SDS-Casein-Papain三个体系,Papain的酶活力分别在0.024~4.8、0.048~4.8、0.096~7.2 USP/mL范围内与△I470nm之间呈现良好线性关系。检测限分别为0.00832、0.04068、0.0814 USP/mL。TCA共振散射光谱法(RSS)应用于嫩肉粉中木瓜蛋白酶活力测定,结果满意。 第三部分:四种动物蛋白酶活力的催化共振散射光谱测定 在所选实验条件下,糜蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胃蛋白酶均能催化水解酪蛋白生成小分子产物。加入三氯乙酸可与剩余的酪蛋白结合形成缔合微粒并中止酶催化反应。该微粒在360 nm、400 nm、420 nm、470 nm、520 nm处产生5个共振散射峰,其中最强峰位于470 nm处。糜蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胃蛋白酶的酶活力分别在0.0012~0.06 U/mL、0.00024-0.04 U/mL、0.0002~0.006 U/mL、0.0006-0.024 U/mL范围内与470 nm处的散射光强度降低值△I470nm之间呈良好线性关系,其检出限分别为0.001148 U/mL、0.000839 U/mL、0.000156 U/mL、0.000557 U/mL。该法应用于实际样品中糜蛋白酶活力测定,结果比较满意。 第四部分:溶壁微球菌的共振散射光谱研究及其在溶菌酶活力测定中的应用 溶壁微球菌在360 nm、400 nm、420 nm、470 nm和520 nm处产生5个共振散射峰,菌浓度在2.0×106~9.3×108个/mL范围内与共振散射光强度I470nm有良好的线性关系。基于溶菌酶对溶壁微球菌的催化水解作用导致体系I470nm降低,建立了一个检测0.24~40 U/mL(即0.012~2μg/mL)溶菌酶的共振散射光谱新方法,其检出限(3σ)为0.014 U/mL(即0.0007μg/mL)。该法测定唾液样品的分析结果与比浊法结果一致,两种方法结果的线性回归方程的斜率、相关系数和截距分别为0.9665、0.9973和-87.50。 第五部分:辣根过氧化物酶活力的催化共振散射光谱测定 在所选实验条件下,辣根过氧化物酶催化H2O2氧化KI生成I2,过量的I-与I2可结合形成I3-,而I3-分别与罗丹明S(RhS),罗丹明G(Rh6G),罗丹明B(RhB),丁基罗丹明B(b-RhB)结合形成(Rh+ -I3-)缔合微粒,在320 nm、424 nm、508 nm、和610 nm处产生较强的共振散射效应。但四体系在610 nm处的共振散射均分别受RhS 556 nm、Rh6G 556 nm、RhB 580 nm、b-RhB 580 nm处同步荧光峰的影响。对于RhS、Rh6G、RhB、b-RhB四体系,辣根过氧化物酶的浓度分别在3.2×10-12g~4.8×10-9g /mL、2×10-11g~3.2×10-9g /mL、1.6×10-11g~3.2×10-9 /mL、1.6×10-11g~4×10-9 g /mL范围内与其在424 nm处的共振散射强度成线性关系,其检出限分别为2.2×10-12g /mL、2.5×10-12g /mL、4.4×10-12g /mL、2.6×10-12g /mL。该法应用于酶联免疫乙肝试剂盒中辣根过氧化物酶活力的测定,结果比较满意。
【学位授予单位】:广西师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:Q55-3

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【参考文献】
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1 吴毅,肖瑞卿,林武存;9160例患者D抗原检测及配血分析[J];第三军医大学学报;1998年03期
2 许红,徐奇友,刁新平;绿色添加剂溶菌酶及其应用[J];饲料工业;2005年02期
3 江千雍;木瓜酶提取技术及其应用前景[J];福建热作科技;2004年04期
4 廖祖荷,罗杨合,蒋治良,谢济运;大肠杆菌的共振散射光谱研究[J];分析测试技术与仪器;2003年02期
5 达毛拉·杰力里,黄承志;酚藏花红与DNA作用的共振光散射特征及微量DNA的光散射测定[J];分析化学;1999年10期
6 黄承志,李原芳,李念兵,罗红群,黄新华;耐尔蓝硫酸盐在核酸分子表面的长距组装及核酸的三波长共振光散射测定[J];分析化学;1999年11期
7 魏永锋,闫宏涛;催化荧光光度法测定辣根过氧化物酶及甲胎蛋白[J];分析化学;2000年01期
8 黄新华,李原芳,奉萍,黄承志;小牛胸腺脱氧核糖核酸诱导中性红聚集的机理及其影响因素[J];分析化学;2000年06期
9 向海艳,陈小明,李松青,夏殊,刘安喜;亚甲基蓝共振光谱散射法测定脱氧核糖核酸[J];分析化学;2000年11期
10 朱昌青,李东辉,郑洪,朱庆枝,许金钩;核酸对氯化银胶体溶液共振光散射的猝灭作用及其应用[J];分析化学;2000年12期
【共引文献】
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1 王红艳,张胜义,郜洪文;DNA-夜蓝结合光谱研究[J];安徽大学学报(自然科学版);2003年03期
2 魏娟;蔺佳良;张冠军;朱明;冯丽丹;;果胶酶对早酥梨汁的澄清试验研究[J];安徽农学通报(上半月刊);2011年17期
3 刘斌,蔡敬民,吴茜茜,张洁,吴克,潘仁瑞;根霉产脂肪酶液态发酵条件及部分酶学性质研究[J];安徽农业科学;2003年06期
4 张向前,陈国梁,刘玉峰,曹建文,陈宗礼;木枣组培苗叶片中主要化学物质含量的变化[J];安徽农业科学;2005年01期
5 何晓宁;彭树英;杨瑞锋;刘凤军;郑月茂;张涌;;人溶菌酶基因cDNA的克隆和序列分析[J];安徽农业科学;2006年11期
6 王慧杰;叶传林;马爱民;;土壤细菌YR-07溶菌酶饲喂仔猪效果的研究[J];安徽农业科学;2007年25期
7 姚福荣;罗乐;向乾;;蛋壳中提取溶菌酶的研究[J];安徽农业科学;2007年34期
8 陈燕;;不同pH值对DNA提取率的影响[J];安徽农业科学;2008年05期
9 陈荣昌;杜泓璇;马尧;羊芹;唐云明;;青鱼胰蛋白酶的分离纯化及部分性质研究[J];安徽农业科学;2008年11期
10 张士康;孙晓明;周惠明;;高汤中木瓜蛋白酶酶解条件的研究[J];安徽农业科学;2008年17期
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1 张明江;郭伟;孙敏杰;;添加溶菌酶的婴幼儿配方奶粉的研究[A];中国奶业协会年会论文集2009(下册)[C];2009年
2 徐培智;解开治;张发宝;杨少海;陈建生;唐栓虎;黄旭;;养蛆产物对苦瓜枯萎病抑菌抗病的效果初探[A];广东省土壤学会第九次会员代表大会暨学术交流年会论文集[C];2006年
3 冯春晖;王娜;张金鸿;王连生;;微生物去除活性污泥中重金属的试验研究[A];第二届全国恶臭污染测试及控制技术研讨会论文集[C];2005年
4 蒋治良;邹彩霞;刘绍璞;;PMo-RDG缔合物纳米微粒体系的荧光猝灭和减色机理研究[A];中国化学会第八届多元络合物会议论文[C];2002年
5 邹节明;王力生;蒋治良;尹文清;覃爱苗;;环丙沙星-荧光桃红n-π荷移络合物纳米微粒体系的光谱特性研究[A];中国化学会第八届多元络合物会议论文[C];2002年
6 王力生;尹文清;蒋治良;邹节明;;DBS-BRDB缔合物有机复合纳米微粒体系的共振散射与荧光猝灭机理研究[A];中国化学会第八届多元络合物会议论文[C];2002年
7 施传信;江芸;夏新成;张卫辉;高峰;周光宏;;五种单体酶配伍对肉仔鸡小麦日粮非淀粉多糖消化率的影响[A];饲料酶制剂的研究与应用[C];2009年
8 杨晶凡;韩茹;;酶反应技术在中药提取中的应用综述[A];第一届全国中药商品学术大会论文集[C];2008年
9 邓凡政;郭东方;朱陈银;;离子液中AT与BSA作用研究[A];中国化学会第26届学术年会分析化学分会场论文集[C];2008年
10 李燕;徐媛媛;孙舒婷;张诺;吴丹;魏琴;;若丹宁瑞利散射光谱探针测定蛋白质的研究[A];第十五届全国分子光谱学术报告会论文集[C];2008年
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1 李彧娜;微孢根霉华根霉变种CICIM F0088生淀粉酶系的研究[D];江南大学;2010年
2 蒋雪松;用于有机磷农药残留检测的免疫生物传感器的研究[D];浙江大学;2008年
3 孔玲;蛋白质、多肽与DNA相互作用的共振瑞利散射和共振非线性散射光谱及其分析应用研究[D];西南大学;2011年
4 孙宇涵;秋水仙素诱导银杏2n雄配子低得率的机理研究[D];北京林业大学;2011年
5 程青芳;水相中的Knoevenagel缩合和无溶剂下的Biginelli缩合反应研究[D];南京理工大学;2011年
6 刘凯;改性壳聚糖微球固定化生物酶及其控制造纸白水中DCS物质的研究[D];华南理工大学;2011年
7 钟蕾;三角帆蚌细菌性瘟病病原学研究与LasB基因的克隆及表达[D];湖南农业大学;2011年
8 王强;蛋氨酸类希夫碱配合物的合成、表征与生物活性研究[D];中国海洋大学;2011年
9 蔡昌群;共振光散射光谱探针在DNA杂交及多态性检测中的研究与应用[D];湘潭大学;2011年
10 徐学涛;二苯烯酮类化合物的合成及其荧光性能研究[D];广东工业大学;2011年
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1 程时军;溶菌酶在肉鸡中的应用及作用机制研究[D];华中农业大学;2010年
2 陈玉红;生物活性预混料对断奶仔猪免疫功能影响的研究[D];华中农业大学;2010年
3 余海芬;蛋清中溶菌酶的高效提取及其定量测定方法研究[D];华中农业大学;2010年
4 孙伟杰;介孔分子筛的制备及对木瓜蛋白酶固定化研究[D];辽宁师范大学;2010年
5 陈晓英;喜树碱与生物大分子相互作用的光谱研究[D];郑州大学;2010年
6 张伟;分子光谱法研究蛋白质与小分子的相互作用及其分析方法研究[D];郑州大学;2010年
7 刘亮亮;羊胰酶提取工艺及水解酪蛋白动力学研究[D];甘肃农业大学;2010年
8 翁超;Ru(Ⅱ)多吡啶配合物与DNA作用的共振光散射研究及应用[D];湘潭大学;2010年
9 仇月红;共振瑞利散射法测定维生素B_1、B_2、B_(12)[D];湘潭大学;2010年
10 刘秋连;共振瑞利散射法、荧光光谱法测定美罗培南、陈皮甙的研究[D];湘潭大学;2010年
【二级参考文献】
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1 崔晓江,黄文晋,刘枝俏,彭学贤,莽克强;噬菌体T7溶菌酶及其融合蛋白在大肠杆菌中的表达[J];病毒学报;1994年02期
2 杜国华,姚国清,李兴建;分光光度法测定重油中铁的含量[J];北京石油化工学院学报;2001年01期
3 林妈利,萧明;关于台湾免去产前检查和输血前配合试验中Rh血型筛检的报告[J];中国输血杂志;1995年02期
4 程铁明,方肇霞,崔季巧;白内障缓解药——晶明眼药的合成[J];北京医学院学报;1980年04期
5 郭永芳,林武存,肖瑞卿,田英;重庆市汉族5226人Rh血型调查报告[J];第三军医大学学报;1991年06期
6 方肇伦;微流控分析芯片发展与展望[J];大学化学;2001年02期
7 龙彦辉,代兴隆;离子交换—丁基罗丹明B光度法测定铅锌矿中微量镓[J];重庆大学学报(自然科学版);2002年09期
8 蔡晓雯,江千雍,韩陆奇,林德寿;番木瓜及其果酱的研究[J];福建热作科技;2000年01期
9 蔡晓雯,韩陆奇,江千雍,黄若琴;番木瓜果脯的研究[J];福建热作科技;2002年04期
10 黄传敬,郑小军;溴酚红光度法测定微量阳离子表面活性剂[J];淮北煤师院学报(自然科学版);2000年02期
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1 徐敬宜;徐永平;刘姝;金礼吉;王宇;;溶菌酶及其在食品工业中的应用[J];食品与机械;2006年01期
2 诸葛健;周立平;王萍;汤斌;;蛋白酶产生菌种间原生质体融合的研究[J];微生物学报;1984年01期
3 焦越坎,万众华,林克椿;溶菌酶的扫描隧道显微镜研究[J];生物物理学报;1994年02期
4 柳晓冰!100081,俞光岩!100081,高岩!100081,庞淑珍!100081;健康人腮腺α-淀粉酶、溶菌酶的增龄性改变[J];中华口腔医学杂志;2001年01期
5 洪潇,余若黔;溶菌酶的活性测定方法[J];生物技术通报;2004年05期
6 凤权;汤斌;;溶菌酶分离纯化方法的研究进展[J];生物学杂志;2006年01期
7 刘耀文;;生物方法提取溶菌酶的简单生产方案[J];科技风;2009年06期
8 徐万祥;;调节酶活性的二硫键[J];医学分子生物学杂志;1990年04期
9 陶凤云;张新妙;马润宇;;溶菌酶结晶的研究进展[J];北京联合大学学报(自然科学版);2006年03期
10 陈启凡;孙世安;王岩;张福辰;;金纳米探针瑞利共振散射法测定溶菌酶[J];激光生物学报;2008年05期
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1 杨芳;项瑾;杜芬;梁毅;;pH诱导溶菌酶及其同源蛋白去折叠研究[A];湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会论文摘要汇编[C];2004年
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3 渠琛玲;张寒琦;白雨萍;孙颖;王璐;;电喷雾质谱法研究人参皂苷Rd与生物分子的相互作用[A];第十届中国化学会分析化学年会暨第十届全国原子光谱学术会议论文摘要集[C];2009年
4 谢韵;周健;;溶菌酶在带电表面的吸附取向的计算机模拟[A];中国化学会第十二届胶体与界面化学会议论文摘要集[C];2009年
5 乐知;袁琳;陈红;;C6磺化壳聚糖的溶菌酶高特异性结合[A];2009年全国高分子学术论文报告会论文摘要集(下册)[C];2009年
6 吉邢虎;何治柯;;微流控芯片化学发光检测辣根过氧化物酶[A];第三届全国微全分析系统学术会议论文集[C];2005年
7 封宾;滕枫;唐爱伟;王琰;候延冰;王永生;;以CdSe纳米晶标记溶菌酶后有关能量传递的研究及应用[A];第11届全国发光学学术会议论文摘要集[C];2007年
8 陈慷;王印其;田小丽;;正常眼和眼表疾病泪液溶菌酶测定[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年
9 郭绍芬;郭晓珊;陆天虹;周青;黄晓华;;稀土离子与辣根过氧化物酶相互作用机理[A];中国化学会第二十五届学术年会论文摘要集(上册)[C];2006年
10 武云丽;何锡文;李文友;;CdTe纳米粒子与溶菌酶相互作用的研究[A];中国化学会第26届学术年会分析化学分会场论文集[C];2008年
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1 ;解读“溶菌酶”[N];江苏科技报;2001年
2 姚云昕;新型保健添加剂——溶菌酶[N];中国食品报;2009年
3 温红;美国CLiPS技术加快蛋白酶药研发速度[N];医药经济报;2006年
4 丁亮;怎样从蛋清中提取溶菌酶[N];山西科技报;2002年
5 上海蓝岛加华食品有限公司 严进;溶菌酶应用探讨[N];中国食品质量报;2004年
6 纹姚;丙肝病毒NS2-3蛋白酶的活性位点被确定[N];医药经济报;2006年
7 何屹;剑蛋白酶对调节细胞运动至关重要[N];科技日报;2011年
8 仇逸闵建颖;我国科学家发现类泛素蛋白酶调控机制[N];医药经济报;2007年
9 江舸;美发明蛋白酶无线遥控法[N];科技日报;2002年
10 叶成光王立涛;大岭“绿丰源”蛋白酶增胶试验取得成效[N];海南农垦报;2007年
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1 王君;表面活性剂辅助蛋白质复性过程机理研究[D];清华大学;2004年
2 杨万根;蛋清蛋白水解物的制备、结构及其生物活性的研究[D];江南大学;2008年
3 李奇;沙蚕蛋白酶及同工酶的分离纯化、性质及药用生物活性研究[D];吉林大学;2008年
4 董晓燕;辅助因子促进蛋白质复性的研究[D];天津大学;2005年
5 张琇;海洋芽孢杆菌S-12-86溶菌酶的发酵、纯化与生物活性的研究[D];中国海洋大学;2007年
6 刘丽君;多层膜的组装及新型含硫化合物电化学传感器的构筑[D];浙江大学;2009年
7 王彦;液-固界面的吸附及溶菌酶在液相色谱中复性的应用研究[D];西北大学;2002年
8 栾广忠;碱性蛋白酶Alcalase凝固豆浆机理的研究[D];中国农业大学;2005年
9 费砚群;突环嫁接产生“双功能”酶和“双中心”酶[D];吉林大学;2008年
10 庄苏;纤维水解酶对牧草青贮品质及体外瘤胃发酵特性的研究[D];南京农业大学;2011年
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1 黄国霞;动植物蛋白酶等酶活力的共振散射光谱测定[D];广西师范大学;2007年
2 刘红妮;弱阳离子交换色谱固定相对还原变性溶菌酶的折叠贡献[D];西北大学;2004年
3 郝杰;蜡状芽孢杆菌S-12-86产海洋溶菌酶的研究[D];中国海洋大学;2004年
4 姜馗;蛋清溶菌酶提取技术的研究[D];中国农业大学;2005年
5 权宇彤;溶菌酶的制备与活性检测[D];吉林大学;2006年
6 卜兴江;中国对虾组织蛋白酶L和溶菌酶的重组表达及性质研究[D];山东大学;2006年
7 周翔;重组大鼠溶菌酶N端多肽的原核表达及其与AGEs的结合作用[D];暨南大学;2006年
8 郁章琦;染料木素含磷衍生物的合成及性质研究[D];郑州大学;2007年
9 郭醉元;溶菌酶与中药治疗奶牛子宫内膜炎的比较研究[D];东北农业大学;2008年
10 贾长虹;人工伴侣与小分子添加剂协同辅助变性溶菌酶复性的研究[D];天津大学;2007年
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