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《四川大学》 2002年
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农杆菌介导水稻转化系统的优化及水稻T-DNA插入突变体库的初步建立

唐京生  
【摘要】: 利用水稻T-DNA插入突变库,通过正向和反向遗传学的方法来研究基因的功能是现在功能基因组研究的有效方法,但首先是建立一个足够大、尽可能饱和的T-DNA突变群体。而要建立这样大的突变体库,高效且稳定的水稻基因转化技术平台至关重要。本论文试图通过对农杆菌介导的水稻转化过程中一些重要影响因素的研究来找到一套稳定的提高水稻转化频率的方法。从T-DNA长度、不同类型质粒,不同浸染方法、不同筛选剂、抑菌剂(Cef)对转化率和愈伤再生能力的影响等方面进行了研究。结果表明:10Kb以内的T-DNA长短与转化频率呈正相关性,T-DNA长的pCAS04较T-DNA短的pJFNPTII转化率更高;CAS系列的质粒较CAMBIA系列质粒对愈伤的转化率更高;Hyg对愈伤的伤害比G-418大,造成转化率偏低;不同的浸染方法对转化和再生频率均有一定影响(其中浸纸法最为简单和有效);分化培养基中加入抑菌剂Cef会抑 制愈伤再生。初步建立起了一个相对稳定和高效的农杆菌介导水稻转化体系。 在此基础上开始了T-DNA插入突变体库的建立,并获得独立来源的水稻 TAINA插入突变体 258个,对其中 151个拟转基因植株进行了 PCR检测表明 146个为转基因阳性植株。目前正在对获得T-DNA插入突变体进行下游工作, 包括SOuhem杂交检测插入T-DNA的拷贝数,通过TailPCR获得插入侧翼序 列、建立侧翼序列数据库。
【学位授予单位】:四川大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:S511

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【参考文献】
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