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《四川大学》 2002年
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玉米弯孢菌叶斑病菌检测技术及遗传多样性研究

宁红  
【摘要】: 玉米弯孢菌叶斑病是近几年在我国发展起来的一种对玉米危害很大的新病害,关于病菌致病性分化及遗传方面的报道较少,目前还不清楚病菌的生理分化情况,也少有关于病原菌遗传背景分析的研究,更缺乏病原菌快速鉴定和带菌种子检测技术的研究,本研究以病菌孢子形态学和可溶蛋白质多样性比较为基础,建立了两种免疫学的鉴定技术,并将该技术用于带菌玉米种子和幼苗的检测和诊断;同时,在分子水平用AFLP标记技术对该菌的遗传多样性用进行了分析,同时与多种相似病菌的AFLP分子标记进行了比较研究,确定了代表Curvularia lunata的特异性分子标记,为下一步的克隆、测序和建立分子生物学鉴定方法提供了捷径,也为植物病原真菌鉴定的分子标记筛选提供了范例。 首先,搜集国内外和分离四川主要玉米产区的玉米弯孢菌叶斑病样品,共获得73个纯化的相关菌株,其中包括C. lunata菌株34个,Cochlibolus carbonum菌株3个,Co. heterostrophus菌株13个,Alternaria alternata菌株8个。对其中的12个C. lunata菌株和6个相似或分离过程中容易混淆的菌株在分生孢子形态、菌落型态和可溶性蛋白质电泳图谱进行了比较研究。结果表明分生孢子形态是病原菌形态鉴定的主要依据,但在C. lunata和C. inaequalis之间孢子形态并不易区分;菌落型态在不同种之间存在明显的差异,同种之间也存在一定差异,但不稳定和存在变异。18个菌株SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱在种间存在明显的差异,C. lunata种内蛋白带也存在多样性。图谱显示Curvularia在Rf值为0.177处有一条该属的特征蛋白带,C. lunata在Rf值为0.225处有一条该种的特征蛋白带。聚类分析将未能确定种的13号菌株确定为C. inaequalis。 在以上蛋白质分析的基础上建立了C. lunata菌株鉴定和种子的免疫检 四川大学博土学位论文 测方法。用于 I.ELISA、ABC-ELISA和 DOt-ELISA三种方法比较研究了不 同抗血清的检测灵敏度和特异世,结果IELISA方便快捷,首选使用; D。t-ELISA灵敏度稍低适用于基层检验。用 C 菌株混合的可溶性蛋白 质作为免疫抗原,获得一抗兔抗 C Iunata抗血清(PAhs);抗血清经近似菌 可溶性蛋白质吸附后获得对C lunata菌株可溶性蛋白质具有特异性的抗血 清(APAbs卜 可应用于 C lunata菌株的鉴定;用玉米种子可溶性蛋白质对 APAs进行进一步吸附纯化,获得了与玉米种子蛋白质无交叉反应的特异性 抗血清(DAPAbS人可用于对带菌玉米种子的检测鉴定,并制定了相应的应 用程序。几种抗血清分别用于间接ELISA和ABC*LISA兔疫分析,以比较 其检测灵敏度和特异性。 在免疫检测的基础上,为了从分子水平进一步了解新月弯抱菌的遗传背 景和多样性,以寻找能够作为 C Iunata种的分子标记,从而为建立该菌的分 子检测技术奠定基础,本研究首次用 AFLP指纹技术对C Iunata不同菌株及 相似菌株进行了遗传多样性研究。用改进的氯化书法获得了高质量的供试菌 株DNA,并优化了AFLP各步的试验条件。利用AFLP技术,分析了5个 C lunata菌株和5个不同种的近似菌株AFLP的DNA指纹特征,并进行了 不同引物的聚类分析。分别采用两对具有E.ZM.l 的选择性引物 EcoRJ-AC/Mel.A和EcoAI-AC/Mel.C,以及两对具有E-ZM-3的选择性引 物EcoXi叭 cTG和EcORI叭 (TC对供试菌进行选择性扩增。 结果供试菌株的AFLP指纹图谱具有很高的多态性,反映了菌株间存在丰富 的遗传多样性;四对引物共得到 11 69条扩增条带,其中多态性条带 778条, 占67%。根据不同引物的不同指纹图谱得到的聚类结果反映了 C lunata菌株 间以及近似菌株间种、属的遗传距离和亲缘关系;四对引物分别得到了 944hp、229hp、254hp、130hp、1129hp、296hp六条属于 C lunata的稳定的 特异性片段,这些特异性片段都有希望成为鉴定 C Iunata有效的分子标记, 为进一步确定用于鉴定c1U——的有效的分子标记奠定了基础。研究表明, 利用 AFLP不同的引物组合,不仅能稳定地检出 C Iunata和近似菌株丰富的 多态性,同时也是寻找特异性分子标记的理想方法。
【学位授予单位】:四川大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:S432.4

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 王惠哲;李淑菊;霍振荣;管炜;;黄瓜枯萎病菌AFLP分析体系的建立[J];华北农学报;2007年01期
2 张欣芳;苏前富;宋淑云;杜俊岐;刘影;张伟;李红;晋齐鸣;;东北地区玉米弯孢菌的致病性分化与RAPD分析[J];玉米科学;2010年06期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 赵辉;玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)生理分化和遗传多态性研究[D];沈阳农业大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 任智惠;吉林省玉米灰斑病菌的致病性分化与RAPD分析[D];吉林大学;2011年
2 刘艳梅;甘肃省曲霉菌的RAPD分析和ITS序列分析[D];甘肃农业大学;2006年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 徐德坤,王琪,殷秀东,刘向元,杜国锋;玉米弯孢菌叶斑病调查初报[J];山东农业科学;1995年06期
2 贾建航,李传友,金德敏,王斌;AFLP技术在玉米自交系类群分析研究中的应用[J];高技术通讯;1999年04期
3 张定法,徐瑞富,张希福,娄国强,甘淼;玉米弯孢霉叶斑病菌生物学特性的研究[J];河南职技师院学报;1998年01期
4 洪华珠,杨红,刘冬连,马春红,惠丰立,王立华;三株球孢白僵菌血清学性质的研究[J];真菌学报;1994年01期
5 窦坦德,沈崇尧;大豆疫霉菌的血清学研究[J];菌物系统;1997年02期
6 白元俊,陈彦,李柏宏,朱茂山,李小平;玉米弯孢霉叶斑病菌的生物学特性研究[J];辽宁农业科学;1998年05期
7 姜远良;化学分类法在细菌和真菌系统分类学中的应用和发展[J];辽宁师范大学学报(自然科学版);1995年02期
8 曹以勤,彭金火,陆家云;几种禾本科植物上的弯孢菌[J];南京农业大学学报;1990年S1期
9 傅俊范,白元俊,薛敏菊,牟连晓;玉米弯孢菌叶斑病流行动态及产量损失测定[J];沈阳农业大学学报;1999年03期
10 吕国忠;玉米弯孢菌叶斑病菌毒素的生物活性测定及对玉米叶片超微结构的影响[J];沈阳农业大学学报;1999年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 徐德坤,王琪,殷秀东,刘向元,杜国锋;玉米弯孢菌叶斑病调查初报[J];山东农业科学;1995年06期
2 赵祥吉,许兴华,徐爱清;鲁西南生产三眠茧的调查[J];山东农业科学;1995年06期
3 李能树,沈业寿,王建琴;安徽省野生食用菌、药用菌资源调查[J];安徽大学学报(自然科学版);2002年04期
4 叶明;菌物多相分类研究进展[J];安徽工程科技学院学报(自然科学版);2003年02期
5 叶明;粒毛盘菌属(Lachnum)物种多样性研究进展[J];安徽工程科技学院学报(自然科学版);2004年01期
6 王波;唐井亚;;两种杀菌剂不同配比对玉米弯孢叶斑菌杀菌效果的研究[J];安徽农学通报;2008年13期
7 余应建;;一株撑绿杂交竹内生菌的分离鉴定及主要培养特性研究[J];安徽农学通报;2008年17期
8 唐长波;李世超;;污染的丝绸织物中霉菌的分离与鉴定[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年17期
9 申磊;;细菌分类学方法研究概况[J];安徽农学通报(上半月刊);2011年23期
10 李宪;药剂浸种防治稻曲病和品种抗病性鉴定[J];安徽农业科学;1996年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨大荣;;我国虫草资源的合理利用与保护[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第二卷)[C];1991年
2 谈迎春;张永安;陈昌洁;A.K.M.EKRAMODDOULLAH;H.S.WHITNEY;;不同菌株白僵菌菌丝蛋白图谱的差异及其与毒力的关系研究[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第二卷)[C];1991年
3 丁珊;汤坚;丁贵银;孙继美;于宙;吴克;;球孢白僵菌血清学的初步研究[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第二卷)[C];1991年
4 谭树明;方焕谋;;广东两种蝉花的研究[A];中国虫生真菌研究与应用[C];1991年
5 杨大荣;李朝达;杨跃雄;舒畅;;云南高寒地区虫生真菌资源[A];中国虫生真菌研究与应用[C];1991年
6 武觐文;王德祥;;华北和东北地区的虫生真菌名录[A];中国虫生真菌研究与应用[C];1991年
7 谷桓生;梁曼逸;赵国莉;赵玉明;;吉林省虫草种类调查初报[A];中国虫生真菌研究与应用[C];1991年
8 农向群;金正俊;张泽华;;球孢白僵菌菌株的随机扩增多态DNA标记[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第五卷)[C];2003年
9 陈劲枫;娄群峰;陈龙正;耿红;罗向东;;黄瓜全雌性基因连锁的AFLP和SCAR分子标记[A];蔬菜分子育种研讨会论文集[C];2004年
10 杜金璞;黄冲;刘帆;潘娟娟;骆勇;马占鸿;;小麦条锈菌水源11致病类群的AFLP标记[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王勇;细基格孢属、匍柄霉属及其近似属的形态学与分子系统学研究[D];山东农业大学;2010年
2 张俊忠;东祁连山高寒草地土壤真菌多样性研究[D];甘肃农业大学;2010年
3 鄢小宁;利用黄瓜幼苗内生真菌种子处理防治南方根结线虫的研究[D];浙江大学;2010年
4 郑维列;西藏色季拉山长鞭红景天种群生态学特性研究[D];中南林业科技大学;2010年
5 刘卫东;湖南假俭草遗传多样性、生理学特性及护坡性能研究[D];中南林业科技大学;2010年
6 文亚峰;人心果品种资源亲缘关系及其授粉亲和性的研究[D];中南林业科技大学;2006年
7 刘凤楼;大麦成株叶锈病抗性基因的发掘、分子标记及遗传研究[D];西北农林科技大学;2010年
8 任红敏;大黄酚对黄瓜白粉病菌的抑制作用机制研究[D];河北农业大学;2011年
9 耿月华;中国土壤暗色丝孢菌五个疑难属的形态学和分子系统学分析[D];山东农业大学;2011年
10 杜萍;中国野生毛木耳遗传多样性研究[D];北京林业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 曲丽洁;用于动物性食品中莱克多巴胺快速检测的SPR技术研究[D];华中农业大学;2010年
2 刘敏;基于SSR、ISSR和RAPD对大豆疫霉菌的遗传多样性研究[D];华中农业大学;2010年
3 杨盖宇;近等基因系群体的Ghd7和Qph1上位性分析[D];华中农业大学;2010年
4 张庆路;利用重组自交系群体定位一般配合力相关性状QTL[D];华中农业大学;2010年
5 史婵娟;橘园座壳孢菌的生物学特性及对柑桔粉虱的致病力研究[D];华中农业大学;2010年
6 李悦;中国莴苣属及其近缘属植物系统学关系的初步研究[D];郑州大学;2010年
7 伊新华;鼠尾藻遗传多样性的AFLP分析[D];辽宁师范大学;2010年
8 张立付;安徽省大豆疫病菌的分离、鉴定及致病型研究[D];安徽农业大学;2010年
9 刘亚亚;掌叶大黄根腐病病原物研究[D];甘肃农业大学;2010年
10 朱蕾;蒙古黄芪根腐病病原菌的分离鉴定及药剂筛选防治研究[D];甘肃农业大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李林;玉米大斑病菌生理小种鉴定初报[J];山东农业科学;1995年02期
2 侯丽冰,贺伟,刘小勇,杨佐忠;我国几种松干锈菌亲缘关系的ITS序列分析[J];北京林业大学学报;2002年Z1期
3 宋学春;陈太安;刘晓华;;青岛农业大学玉米黄斑病研究取得新进展[J];北京农业;2009年19期
4 石洁,刘玉瑛,刘爱国,王连生;河北省玉米弯孢霉菌叶斑病发生调查[J];河北农业大学学报;1998年02期
5 张利辉,邢继红,董金皋;玉米大斑病菌2号小种毒素的生物测定与组分分析[J];河北农业大学学报;2001年01期
6 王连生,孔令晓,赵聚,罗畔池;玉米新种质资源对多种病害的抗病性鉴定[J];河北农业大学学报;2001年04期
7 高军,刘大群;AFLP技术在植物病原真菌种群遗传上的应用[J];河北农业大学学报;2002年S1期
8 赵来顺,田学军,李玉琴,张志铭;玉米黄斑病研究Ⅰ·病原菌鉴定[J];河北农业大学学报;1995年02期
9 文景芝,张晓玲,辛敏;用多克隆抗体检测纯培养和植物体内的大豆疫霉菌[J];东北农业大学学报;2002年03期
10 刘春来;文景芝;杨明秀;李永刚;;rDNA-ITS在植物病原真菌分子检测中的应用[J];东北农业大学学报;2007年01期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 王晓鸣;焦志亮;戴法超;朱振东;;玉米弯孢菌叶斑病病原菌遗传多样性研究[A];中国菌物学会第三届会员代表大会暨全国第六届菌物学学术讨论会论文集[C];2003年
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 王桂清;玉米灰斑病菌(Cercospora zeae-maydis)生物学多态性与生理分化机理研究[D];沈阳农业大学;2003年
2 鄢洪海;玉米弯孢叶斑病菌生理分化及分子生物学研究[D];沈阳农业大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 易克贤;柱花草炭疽病原菌的RAPD分析[D];华南热带农业大学;2001年
2 邹亚飞;棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)致病型AFLP分析与分子鉴定研究[D];西南农业大学;2001年
3 杨炜华;杏果实黑斑病病原鉴定及相关链格孢菌的RAPD分析[D];山东农业大学;2002年
4 罗琼;小麦白粉菌群体多样性RAPD分析及无毒性遗传分析[D];中国农业科学院;2002年
5 颜群;香蕉果实抗性潜伏炭疽菌的生物学特性与RAPD分析[D];华南热带农业大学;2002年
6 窦艳萍;玉米弯孢菌的硝酸盐营养缺陷型(Nit)突变体筛选及营养体亲和性研究[D];四川农业大学;2003年
7 侯晓强;玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)有性杂交后代的生理分化和遗传多态性[D];河北农业大学;2004年
8 甘丽萍;小麦白粉菌RAPD分析及不同白粉菌种间亲缘关系研究[D];甘肃农业大学;2004年
9 汤春梅;禾本科牧草根际促生菌适宜培养条件和定殖动态研究及其16SrDNA序列分析[D];甘肃农业大学;2005年
10 吴红;利用RAPD标记技术进行葡萄品种遗传多样性研究[D];甘肃农业大学;2005年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 宋晓飞;李晓丽;冯志红;闫立英;;黄瓜基因组DNA提取及AFLP体系优化研究[J];安徽农业科学;2009年29期
2 孟淑春;张海英;郑晓鹰;刘玉梅;王永健;;大白菜基因组DNA的提取及AFLP反应体系的建立[J];分子植物育种;2008年02期
3 单丽丽;肖敏;陆瑞菊;王亦菲;陆惠丽;黄剑华;褚云霞;刘忠;张慧;;古腊梅AFLP分子标记体系的建立及应用[J];上海农业学报;2008年03期
4 张丽丽;张娟;王远亮;;稻谷中产黄曲霉毒素菌株的筛选与鉴定[J];食品与机械;2012年03期
5 张圣平;顾兴芳;王烨;苗晗;;“十一五”我国黄瓜遗传育种研究进展[J];中国蔬菜;2010年22期
6 浦子钢;;黑龙江省西部地区先玉335与改良先玉335大斑病病情发展对比动态分析[J];玉米科学;2013年04期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 赵辉;玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)生理分化和遗传多态性研究[D];沈阳农业大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前7条
1 吴天姝;人参SSR及AFLP标记的开发[D];沈阳农业大学;2011年
2 谢荣;甘肃野生酵母菌遗传多样性研究[D];甘肃农业大学;2007年
3 黄少玲;春石斛兰品种的倍性鉴定及RAPD分子遗传图谱的构建[D];华中农业大学;2007年
4 黄跃才;几种镰刀菌的活性检测研究[D];贵州大学;2008年
5 郭志刚;甘肃野生酵母菌株发酵特性评价及产地葡萄酒酿造研究[D];甘肃农业大学;2008年
6 王秀元;外引美国玉米自交系抗性评价及遗传多样性分析[D];东北农业大学;2010年
7 张丽丽;稻谷中霉菌分析及aflR基因的SPR快速检测技术建立[D];湖南农业大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李济宸,苑凤瑞,李军阁,程起,周桂芬,李建民;玉米弯孢菌叶斑病的识别与防治[J];北京农业科学;1997年04期
2 赵来顺,臧少先,杨军玉,田学军,董金皋;玉米黄斑病研究──Ⅲ.病原菌Curvularia lunata致病毒素初探[J];河北农业大学学报;1997年02期
3 赵来顺,田学军,孔宪君,张义奇,王江柱,李玉琴;玉米黄斑病研究Ⅱ.症状类型[J];河北农业大学学报;1995年04期
4 刘学敏,李长友,张明厚;大豆灰斑病叶部病斑严重度的分级标准[J];大豆科学;1991年04期
5 马淑梅,李宝英;绥化地区大豆灰斑病菌生理小种消长变化的研究[J];大豆科学;1994年04期
6 陈受宜,张耕耘,单卫星,李振岐,吴立人;小麦条锈菌一个中度重复DNA序列家族的鉴定[J];中国科学C辑:生命科学;1997年03期
7 孙广宇,彭友良,张天宇,李振歧;新月弯孢不同分离物的RAPD及ITS区的PCR-RFLP分析[J];吉林农业大学学报;1998年S1期
8 窦坦德,沈崇尧;大豆疫霉菌的血清学研究[J];菌物系统;1997年02期
9 单卫星,陈受宜,惠东威,吴立人,李振岐;我国小麦条锈菌模式菌系的DNA指纹分析[J];科学通报;1996年15期
10 赵廷昌,王文生,徐秀德,刘继国,吕国忠,白金铠;辽宁省玉米发生弯孢菌叶斑病[J];辽宁农业科学;1996年06期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘卉秋;吴素文;曹远银;王玉坤;孙芳;;玉米弯孢菌叶斑病菌ELISA检测方法的建立[J];江苏农业科学;2008年03期
2 黄丽丽,王兰,康振生,赵杰,张管曲;玉米叶片受新月弯孢菌侵染后的细胞病理学变化[J];植物病理学报;2004年01期
3 王春;陈立梅;郭晓勤;吕宙明;高洁;;玉米弯孢菌叶斑病发生和防治若干问题研究[J];玉米科学;2006年02期
4 吴伟华;柳家友;闫海霞;付家锋;袁刘正;赵月强;;黄淮海区玉米叶斑病和南方锈病的发生与防治[J];种子科技;2010年05期
5 冷廷瑞;刘汉臣;潘颖慧;卜瑞;赵兵;乔亚民;;玉米品种资源对弯孢菌叶斑病抗性评价及筛选[J];现代农业科技;2010年17期
6 李贺年,齐巧丽,赵来顺,李济宸,苑凤瑞,李君阁,程起;玉米黄斑病研究Ⅳ.品种抗病性鉴定[J];河北农业大学学报;1998年04期
7 于中国,任雅斌,刘圣英;玉米尾孢菌、弯孢菌叶斑病发病规律初探[J];杂粮作物;2000年02期
8 王晓鸣;戴法超;焦志亮;朱振东;;玉米种质资源抗弯孢菌叶斑病特性研究[J];植物遗传资源科学;2001年03期
9 黎裕,戴法超,景蕊莲,王天宇,杜金友,贾继增;玉米弯孢菌叶斑病抗性的QTL分析[J];中国农业科学;2002年10期
10 林红;潘丽艳;文景芝;;吉林省部分玉米种质资源抗玉米弯孢菌叶斑病鉴定研究[J];植物遗传资源学报;2006年03期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 张永强;石洁;刘玉英;张老章;文丽萍;;玉米弯孢菌叶斑病为害后玉米冠层光谱变化和产量损失研究[A];粮食安全与植保科技创新[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 搏发;农大86玉米[N];山西经济日报;2002年
2 ;中玉9号玉米介绍[N];山西科技报;2004年
3 云立;2008年国审新品种·玉米[N];江苏农业科技报;2008年
4 记者 潘双清;夏玉米病虫草害防治要加强[N];石家庄日报;2010年
5 ;2008年国审农作物品种介绍——玉米(二)[N];农资导报;2009年
6 邯郸市植物保护站 李计勋;玉米田病虫害防治技术[N];河北科技报;2002年
7 昆明市种子管理站 李俊流;适合昆明市中低海拔种植的——玉米杂交种“雅玉889”[N];云南科技报;2010年
8 山东聊城市东昌府区植保站 赵保祥;注意玉米弯孢菌叶斑病的发生与防治[N];河北科技报(农村版);2001年
9 山东省种子管理总站 周新国;2009年我省夏玉米部分主导品种(中)[N];山东科技报;2009年
10 陶明星;“挑落”今年玉米病虫草害[N];中华合作时报;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 黎裕;玉米弯孢菌叶斑病抗性及其它农艺性状的QTL分析[D];中国农业科学院;2001年
2 黄秀丽;玉米弯孢菌叶斑病抗性相关蛋白质鉴定及功能研究[D];上海交通大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前5条
1 王兰;玉米与新月弯孢菌互作的组织病理学研究[D];西北农林科技大学;2002年
2 易成波;外源化学物质诱导玉米对弯孢菌叶斑病的抗性研究[D];四川农业大学;2005年
3 张永强;玉米受玉米弯孢菌叶斑病和亚洲玉米螟为害后的冠层光谱特征和产量损失研究[D];中国农业科学院;2007年
4 周舒扬;玉米弯孢菌叶斑病病理生理学特性及生物防治初步研究[D];东北林业大学;2010年
5 王庚;雅安地区玉米灰斑病时间、空间流行动态研究[D];四川农业大学;2012年
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