Y染色体STR复合扩增及法医学可行性研究

【摘要】： 目的 Y染色体STR(Y-STR)呈单倍型父系遗传特征，不仅在人类学、古生物学等方面意义重大，而且在法医学的个人识别及亲子鉴定中亦具有重要而独特的应用价值。本课题旨在通过研究复合扩增技术，构建四个Y-STR基因座的复合扩增银染检测体系和复合扩增荧光检测体系，并对其进行法医学可行性研究和群体遗传研究。以期为法医Y染色体分型提供新的技术手段。方法 选定四个Y染色体STR基因座，应用加尾序列引物设计策略设计的引物，构建四个基因座的Y-STR复合扩增体系，建立银染检测和荧光检测方法，依据DNA分析技术工作组(TWGDAM)指南进行法医学可行性研究和群体遗传研究。结果 构建了四个Y-STR基因座：A10(Y-GATA-A10)，DYS434，DYS438，DYS439复合扩增体系(Y-A489-plex)；建立了Y-STR复合扩增银染检测方法和荧光检测方法。法医学可行性研究结果显示，敏感度检验最低模板量Y-A489-plex银染体系为0.5ng，Y-A489-plex荧光体系为0.125ng；分型结果稳定，重复性好，对陈旧斑痕具有检测能力，能够对常见介质上的斑痕正确分型， 具有很好组织同一性、种属特异性，可以耐受女性成分的干扰， 用于混合斑分析独具优势;可以用于实际检案。在100个样本中 检出37个单倍型，单倍型变异度为0.9628，标准误为0.00429。 结论本研究在国内外第一次将加尾序列引物设计策略引入 Y一STR复合扩增体系。证明该引物设计策略在Y一STR复合扩增研 究中是切实可行的。加尾引物复合扩增策略还有很大的潜力，为 大规模Y一STR复合扩增的研究提供了一个行之有效的方法。 初步构建了四个Y一STR基因座的Y一A489一plex银染体系和 Y一A4Sg一plex荧光体系:并依据DNA分析技术工作组(TWGDAM) 指南进行了应用性研究。证明Y一A489一plex，适合于法医DNA分 析，有较高的应用价值，为法医Y染色体分型提供了新的技术手 段。 Y一A489一plex体系采用的是国产的Taq酶。经与美国生产的 金牌酶比较，无论是扩增效率还是特异性都无明显差异，为试剂 国产化进行了有效的探索。