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《四川大学》 2004年
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微生物絮凝剂产生菌7-1的絮凝特性研究及其絮凝剂基因片断的克隆

张旭  
【摘要】:微生物絮凝剂是一类由微生物产生的、具有絮凝能力的生物物质。目前,微生物絮凝剂的研究受到人们的广泛关注,具有替代传统絮凝剂的趋势。虽然微生物絮凝剂具有无毒、高效、无二次污染及可生物降解的特点,但由于其生产成本比较高,还没有大规模的工业化生产。基因工程的发展,为微生物絮凝剂的深入开发和研究注入了新的活力。尽管有的菌株产生絮凝剂的能力有限,通过基因工程,可以找到控制菌株产絮凝剂的基因型,强化其絮凝剂的生产。目前增加絮凝剂产量的主要方法中,除了在环境中筛选出产量高的絮凝剂菌株外,就是通过原生质体诱变的方式,虽然能获得一定的满意效果,但是实验的随机性较大,不能人为进行控制,本课题研究旨在针对化工行废水和生活废水的特点,通过人工筛选得到微生物絮凝剂产生菌株,并从其发酵产物中提取出絮凝剂,初步分析其成分、特性,并探测其决定产絮凝剂性状的基因簇。 本实验从多处自然环境、人工环境中采集土(泥)样,从中分离、纯化得256支菌株。经过考察菌株发酵液对高岭土悬浮液的絮凝能力,从中最终选出一株絮凝剂高效产生菌7-1,初步鉴定为Klebiella planticala,并对该菌各项最适生长条件及絮凝反应影响因素进行了考察。经对生活污水和实际工业废水试验,该菌对去除水中悬浮物能力较强,且对高浓度染料废水的脱色能力较好,可应用于废水的絮凝处理。 通过沉淀、离心、透析和真空干燥等步骤,得到7-1的絮凝剂纯品,用紫外扫描和生化等成色反应判断其絮凝剂成份主要为多糖,且可能是由一种单糖聚合而成的高分子聚合物。其絮凝剂产量明显高于其它同类产品并有很好的热稳定性,100~0C,30min絮凝剂活性也不下降。具有很好的工业化潜力。 本实验还对絮凝剂菌株7-1做了遗传方面的研究,分别用4种实验证明该 菌株不含质粒,推断其产絮凝剂性状由染色体基因控制。由于合成细菌胞外多 糖的关键酶—引导糖基转移酶具有一定的同源性,根据其它几个种属的糖基 转移酶氨基酸序列的两个保守区域设计简并引物,通过PCR方法扩增出相应的 DNA片段。序列分析发现其蛋白序列与引导糖基转移酶的一部分具有比较高 的同源性。研究工作仍在进行当中。 关键词:生物絮凝剂胞外多糖糖基转移酶
【学位授予单位】:四川大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:Q939.9

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【参考文献】
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