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《四川大学》 2004年
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版纳微型猪近交系骨髓间充质干细胞永生细胞系的构建和免疫调节研究

刘瑾  
【摘要】:除了探索生命奥秘的科学价值外,干细胞的研究将在人工器官、组织工程、创伤修复和人体功能重建的临床医学中有着极为广阔的应用前景。作为人体干细胞研究的外延,各种动物、特别是医学相关动物干细胞的研究也已悄然兴起。 间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)不仅具有自我更新和多向分化潜能,而且是造血系统的主要支持细胞,被认为是临床干细胞治疗的理想细胞来源和基因治疗的理想细胞载体。免疫排斥和器官的获得是当今移植的两大障碍,干细胞移植的核心问题仍是免疫学问题。 降低移植物免疫原性和抑制受体免疫系统功能是当前同种异体临床和实验模型中常用的的避免和延迟排斥的方法。MSCs在同种异体临床和实验模型中移植后,能被宿主“接受”,并且在宿主体内长期存活(Horwitz et al.,2002)。不仅如此,将MSCs与同种异体皮肤共同移植后,皮肤存活时间明显延长(Bartholomew et al.,2002);与造血干细胞共同移植后,HSC“存活”率提高(Koc et al.,2000),以上资料提示,MSCs可能具有低免疫原和免疫调节特性。最近,对MSCs抑制同种异体T淋巴细胞增殖活性的免疫调节研究也取得较大进展,在干细胞研究领域掀起了新 四川大学博士学位论文 一轮热潮(Tse et al.,2003;Di Nieola et al.,2002;Krampera et al.,2002)。 供器官来源严重不足的问题已严重阻碍了器官移植术的推广和应用, 无论怎样开发,人体器官总是有限的。面对这样严峻的考验,异种移植 己被考虑为同种异体移植可能的有效替代途径之一。免疫排斥仍然是异 种移植的第一障碍,Saito等(1999)的研究极大突破了以往人们对异种移 植免疫排斥的认识,为异种成体干细胞移植提供了新的契机,但迄今为 止,关于MSCs在异种移植中的免疫调节现象及其分子机制的研究少之 又少,不利于异种MSCs的开发和应用。 版纳微型猪近交系(banna mini一pig inbred一line,BMI)己近交繁育到第 20世代,为世界唯一育成的近交系大动物,是异种移植中很有希望的供 器官源。此近交系猪来源的MSCs在干细胞治疗的基础和临床研究中尤 有价值。然而,MSCs的衰老和有限的增殖能力限制了它在体外的大量 增殖及对其生物学特征的深入理解,从而阻碍了其在临床和实验体系中 的应用,建立成体MSCs永生细胞系迫在眉睫。有文献报道,表达猴病 毒40(simian virus 40,SV4o)大T抗原足以使某些体细胞和干细胞逃避衰 老而永生化,因此该研究旨在(1)通过转基因技术将SV40抗衰老基因导 入BMI一MSCs,构建永生细胞系,并鉴定永生化MSCs干细胞形态和生 长特性,特异抗原表达,多向分化潜能和致瘤性,探讨其在移植和材料 生物相容性评价中的应用前景。(2)应用单向淋巴细胞混合培养模型,系 统研究永生化BMI一MSCS对异种T淋巴细胞增殖的免疫原及免疫调节特 性,初步探讨了其免疫抑制的分子机制,展望其在免疫调节和创伤修复 中的应用前景。 材料与方法 永生化BMI一MSCs的构建:密度梯度离心和贴壁法从第18世代BMI 的骨髓中分离原代MSCs。将含有SV40大T抗原和新霉素抗性基因的 质粒pSV3neo导入第3代BMI一MSCs。细胞增殖,干细胞标一记物表达, 四川大学博卜学位论文 分化潜能,衰老和致瘤性等用常规方法检测。 1.2x1O4hPBLS分别与等比例丝裂霉素C处理的永生化BMI一MSCs, BMI一PBLs,人脐静脉内皮细胞株ECV-304或10林g/m 1 Co叭于96孔板 共培养6天,以确定永生化BMI一MSCS的免疫原性。调整BMI一MSCS的 剂量,加入时间和混合培养时间,评价BMI一MSCS对hLPBL作用的剂量 和时间依赖关系。用培养池隔离BMI一MSCs和hPBLS,混培后评价细胞 ·细胞接触对抑制效应的影响。TGF一pl、FasL和IL一10抗体加入混培体 系,观察它们是否能阻碍BMI一MSCs的抑制作用。用MTS法测定细胞 增殖。结果以刺激指数51(Stimulation Index)和抑制率表示。 结果 (l)原代BMI一MsCs持续增殖20代后,生长停滞,SA一p一Gal阳性率 高达85%,流式分析显示,第15代BMI一MSCs在DNA含量小于2n的 区域出现明显的“凋亡峰”,提示此细胞群体在传代过程中,细胞逐渐衰 老。 (2) sv40转基因BMI一MSCs连续传180代后仍保持旺盛的增殖能力, 而仅少量细胞SA一p一Gal表达阳性,细胞凋亡率极低,导入SV40的 BMI一MSCS‘。寿命,,明显延长,获得‘泳生”。 (3)sv40转基因BMI一MSCs保持了正常BMI一MSCs的细胞形态,克 隆生长特性、以及干细胞特异抗原的表达。明确了单克隆抗体SH一2、 SH一3、SH一4、SB一10、SB一20、SB一21对应抗原在BMI一MSCs的表达分布 规律。 (4)永生化BMI一MSCs保持了正常BMI一MSCs的成骨分化功能,能 够促进多孔陶瓷材料的体内成骨。 (5)永生化BM卜MSCs与正常BMI一MSCs一样,生长有锚着依赖性, 在裸鼠体内未表现致瘤性。 (6)永生化BMI一MSCs不引起hpBLs的增殖反应,而同为BMI来源 四川大学博上学位论文 的PBLs,ECV一304和ConA却能刺激hPBL增殖。结果提示BMI一MSCs 可逃避异种T细胞的识别,具有低免疫原性。 (7)永生化BMI一MSCs对抗原或非抗原刺激引起的异种T细胞增殖 均有抑制效应,且呈时间和剂量依赖关系。此结果提
【学位授予单位】:四川大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S852.4

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【共引文献】
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1 魏东;张乃生;;诺氟沙星多克隆抗体的制备[J];安徽农业科学;2007年04期
2 詹爱军;王新卫;王宪文;;抗H9亚型AIV血凝素单克隆抗体的制备及亚型鉴定[J];安徽农业科学;2008年03期
3 魏东;徐彤;赵月平;黄智鸿;李秀娟;;抗阿莫西林多克隆抗体的制备[J];安徽农业科学;2008年09期
4 胡晓苗;余为一;张丹俊;;犬血清IgG的纯化、抗体制备及其鉴定[J];安徽农业科学;2008年21期
5 周先韦;李伟莉;汪丹;万春艳;王金芳;吴海燕;;补肾安胎冲剂联合免疫疗法治疗反复自然流产40例[J];安徽中医学院学报;2011年01期
6 刘银星,范冬梅,熊冬生,许元富,邵晓枫,许元生,彭晖,杨铭,秦岚,朱祯平,杨纯正;单价抗CD20抗体诱导人B细胞淋巴瘤Raji细胞的凋亡[J];癌症;2003年12期
7 张海梅;张连生;;人骨髓间充质干细胞对慢性粒细胞白血病细胞增殖的影响及其机制探讨[J];癌症;2009年01期
8 张捷;;ELISA检测奶牛乳房炎疫苗效果方法的建立[J];氨基酸和生物资源;2009年03期
9 李华,俞建昆,洪超,龙润乡,翟友刚,徐琼芳,崔萍芳,丁雪凤,谢忠平;残余牛血清蛋白ELISA检测方法的建立及其初步应用[J];标记免疫分析与临床;2005年02期
10 李有田,许丹,赵莉,李宏林,董宇翔,洪英杰,张二力,张殿君,徐彩云,高文艳,霍毓萍,李秋波,李晓春;三参滋胃饮对慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜G细胞和D细胞的作用[J];吉林大学学报(医学版);2004年01期
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1 许道艳;刘仁沿;李伟;梁玉波;;酶联免疫吸附法分析失去记忆性贝毒ASP[A];有毒化学污染物监测与风险管理技术交流研讨会论文集[C];2008年
2 邱妍;董发明;杨自军;刘凤军;胡元亮;崔保安;;四种多糖对鸡脾脏淋巴细胞的增殖和一氧化氮分泌的影响[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
3 曾立波;陈连康;胡小龙;张玉荣;张润生;曹芳琦;骆华;;胶体金法吗啡-甲基苯丙胺二合一免疫层析试剂盒的研制[A];公共安全中的化学问题研究进展(第二卷)[C];2011年
4 才琳;张甄;钱丽丽;张园园;裴世春;;黄曲霉毒素B1检测ELISA条件的优化[A];2009年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会论文集[C];2009年
5 齐岩;柯艳坤;张贺楠;亓文宝;袁润余;赵丽荣;陈晓春;李小康;廖明;;禽流感病毒H5亚型HA抗原位点的表达及抗原性检测[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年
6 刘晔;张守峰;张菲;王颖;扈荣良;;动物狂犬病中和抗体竞争ELISA检测试剂盒的研制[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年
7 彭伏虎;王政;毕丁仁;;H9亚型禽流感病毒胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制及初步应用研究[A];首届中国兽药大会——兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛论文集(2008)[C];2008年
8 高丽;杜莹;张忠湛;杨松涛;夏咸柱;高玉伟;;犬细小病毒荧光抗体的制备及其鉴定[A];第十三次全国养犬学术研讨会论文集[C];2009年
9 张海燕;马卫明;杨宏军;王长法;何洪彬;曹永芝;;奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌基因工程蛋白α-溶血素的纯化及其活性检测[A];中国畜牧兽医学会小动物医学分会第四次学术研讨会、中国畜牧兽医学会兽医外科学分会第十六次学术研讨会论文集(2)[C];2009年
10 骆训国;栗绍文;周蕾蕾;赵苏红;皮远鹏;王倩;孟宪荣;毕丁仁;;夹心ELISA方法检测生肉混合物中的猪肉成分的研究[A];中国畜牧兽医学会食品卫生学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2010年
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2 徐娟;T-2毒素多克隆抗体的制备及其化学发光免疫检测的初步研究[D];华中农业大学;2010年
3 谭雯雯;猪β-防御素2多克隆和单克隆抗体的制备及初步应用[D];华中农业大学;2010年
4 孙鹏;骨髓间充质干细胞移植改善糖尿病小鼠结肠动力障碍[D];南京医科大学;2010年
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6 贾丽锋;A型流感病毒NP蛋白的原核表达及初步应用[D];郑州大学;2010年
7 赵秀新;牛消化道Ⅰ型肽载体(bPepTⅠ)部分序列的克隆、表达及多克隆抗体的制备[D];山东农业大学;2010年
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3 周光炎;;Ⅱ类反式激活因子、免疫调节和肿瘤免疫[A];第七届全国肿瘤生物治疗学术会议论文集[C];2001年
4 王维;王静;刘春红;ITALIANI,Paola;BORASCHI,Diana;马世平;瞿涤;;穿心莲内酯对小鼠巨噬细胞活化及特异性抗体应答的影响[A];第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议论文汇编[C];2009年
5 周海云;江丽君;;静注免疫球蛋白的协同免疫免疫调节研究进展[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
6 牛春;姜洪杰;黄松;;IL-2对旋毛虫不同虫株的免疫调节[A];中国动物科学研究——中国动物学会第十四届会员代表大会及中国动物学会65周年年会论文集[C];1999年
7 崔乃杰;崔乃强;崔华雷;付强;;SIRS-MODS-MOSF与免疫调节障碍(IRD)及免疫麻痹(IP)——(有关SIRS-MODS发病机理及对策的商榷)[A];第七届全国中西医结合普通外科临床及基础研究学术会议论文汇编[C];2001年
8 叶雪芳;季天荣;陈庄;;细菌CpG DNA免疫增强作用的研究进展[A];第三届第八次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集[C];2006年
9 陈立翠;谭艳;;采用中医脏腑辨证和免疫调节方法治疗小儿抽动-秽语综合征[A];第八届全国中西医结合实验医学研讨会论文汇编[C];2006年
10 邓为民;韩钦;李宏钊;赵春华;姚智;;异基因骨髓源间充质干细胞对BXSB小鼠T,B细胞的影响[A];节能环保 和谐发展——2007中国科协年会论文集(二)[C];2007年
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1 魏妍平;MSCs研究列入豫重大攻关计划[N];中国医药报;2004年
2 于建港 邢燕霞;R4网络接口和电路域容灾技术[N];人民邮电;2005年
3 李大庆;免疫调节及其在人类疾病中的临床应用国际会议在京召开[N];科技日报;2008年
4 黄显斌 何巍;急性乙肝免疫调节机制被揭示[N];健康报;2009年
5 张中桥;异体MSCs移植有利于梗死心肌功能修复[N];中国医药报;2004年
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1 靖雪妍;大豆复合物和大豆皂苷的免疫调节作用研究[D];吉林大学;2007年
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8 王丹;鳖甲煎丸化裁方对肝癌22荷瘤小鼠抗肿瘤作用及免疫调节功能的实验研究[D];辽宁中医药大学;2007年
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