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《四川大学》 2005年
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血小板反应素1活性cDNA片段的克隆与表达

王晓强  
【摘要】:血小板反应素1(Thrombospondin-1,TSP-1)是同源三聚体糖蛋白和血小板a颗粒的主要组成部分。在胎儿发育过程中或成人受伤时,TSP-1在上皮细胞和中胚层细胞中表达。TSP-1与凝血功能和细胞附着有关,在不同的细胞和不同的条件下,还可刺激或抑制细胞生长与迁移,并抑制血管新生。TSP-1抗血管新生的功能可以应用于肿瘤治疗。根据已有研究结果,TSP-1抑制血管新生的功能主要依靠Ⅰ型原胶原同源片段和3个备解素样(properdin)的Ⅰ型重复序列区。在本研究工作中首先设计了2对引物,分别用于RT-PCR扩增TSP-1-1(Ⅰ型原胶原同源片段和3个Ⅰ型重复序列区)和TSP-1-2(Ⅰ型重复序列区)片段,经测序验证后,再分别克隆到大肠杆菌和巴斯德毕赤酵母中进行表达,并对表达产物进行了纯化。主要结果如下: 1.利用2对引物,从人血细胞中克隆到TSP-1-1和TSP-1-2 cDNA片段,序列分析显示,它们分别长699和528bp。 2.将上述2个cDNA片段插入到大肠杆菌表达载体pET-29a中,获得重组子,经过IPTG诱导以包涵体的形式表达出相应的多肽片段,其分子量分别为30kD和20kD。用尿素对包涵体进行体外溶解,通过离子交换(CM-Sepharose)层析,获得了TSP-1-2多肽。 3.再将上述2个cDNA片段插入到巴斯德毕赤酵母分泌表达载体pICZ α A中,获得重组子,含有TSP-1-2的酵母经过甲醇诱导分泌表达出相应的多肽片段,其分子量为20kD。
【学位授予单位】:四川大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R346

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前7条
1 邹戈;肿瘤血管生成与抗血管生成研究进展[J];国外医学.泌尿系统分册;2003年01期
2 沈先荣,吉冬梅,胡幼卿,贾福星,邓新贤,王玲,储智勇,蒋定文,雷呈祥,黄建生,胡忻然,任大明;血管生成抑制因子TSF的设计、表达及其对血管生成的抑制效应[J];科学通报;2001年13期
3 李凌,徐萍,胡宏慧,刘文文,易苗英,李川源,黄倩;一种新的肿瘤血管生成模型[J];生物化学与生物物理学报;2002年01期
4 王晓莉;肿瘤血管新生的机制及研究方向[J];复旦学报(医学版);2004年02期
5 隋少飞,陈松林;巴氏毕赤酵母表达系统的特点及其研究进展[J];生物技术通报;2004年03期
6 宁云山,李妍,王小宁;包含体蛋白质的复性研究进展[J];生物技术通讯;2001年03期
7 贺修胜;肿瘤血管生成和抗血管生成治疗的研究进展[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);2002年06期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 徐峰,曹伟,寿楠海,姜希宏,徐克森;重氮乙酰丝氨酸诱导大鼠胰腺腺泡细胞癌癌前病变及其K-ras基因突变的实验研究[J];癌变.畸变.突变;1999年02期
2 吴丛梅,黄天华,吴德生,谢庆东,徐小虎;pEgr-P16重组质粒的构建及其在EC9706细胞中的辐射诱导表达[J];癌变.畸变.突变;2003年04期
3 阮烨,王晓云,谢庆东,黄天华;外源DNA转染精子的实验研究[J];癌变.畸变.突变;2004年03期
4 欧阳松应,徐寿水,沈文律,周传香,李春艳,欧阳红生;人PTEN基因表达载体的构建及其在U_(251)细胞中的表达[J];癌变.畸变.突变;2004年04期
5 谢永芳,舒坤贤,梁亦龙,袁帅,张继承;小鼠胚胎发育中期肠细胞增殖与凋亡的研究[J];癌变.畸变.突变;2005年01期
6 陈传德,吴中亮,陈家堃;乙酸镍诱导的人支气管上皮细胞系转化细胞基因组不稳定性分析[J];癌变.畸变.突变;2005年01期
7 王子良,许丽艳,李恩民;质粒制备和反应温度对嵌套缺失技术的影响[J];癌变.畸变.突变;2005年02期
8 熊小芳,黄天华,谢庆东,王晓梅,陈桂兰;精子携带的HBV DNA在小鼠早期胚胎中的复制与表达[J];癌变.畸变.突变;2005年03期
9 康振桥;季艳霞;杨志勇;苏光;崔彦芝;;血管内皮生长因子亚型在人乳腺癌细胞中的表达差异[J];癌变.畸变.突变;2006年03期
10 安刚;黄天华;谢庆东;王德刚;;pCXN2-mIZUMO对C57BL/6小鼠生育能力的影响[J];癌变.畸变.突变;2007年04期
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1 王在贵;何瑞国;钱世钧;刘朝良;;特异腐质霉纤维素酶的酶谱分析[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
2 张新妙;马润宇;;用膜结晶技术制备蛋白质晶体的研究[A];第二届全国膜分离技术在食品工业中应用研讨会论文集[C];2006年
3 高娟;唐明森;王艳玲;蒋再学;竺薇;罗满林;;重组猪α干扰素发酵工艺的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
4 邓利玲;胡小芳;卢明玥;钟耕;;冷榨南瓜子饼蛋白粉酶法水解工艺及其产物性质研究[A];管产学研助推食品安全重庆高峰论坛——2011年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨全国食品科学与工程博士生学术论坛论文集[C];2011年
5 李彦臻;杨利国;;奶牛Y精子膜蛋白的提取与分析[A];第三届中国奶牛发展大会论文集[C];2008年
6 王春花;成军;郎振为;吴煜;杨艳杰;张黎颖;刘妍;;基因表达谱芯片技术筛选XTP3蛋白反式调节基因[A];第一届全国人工肝及血液净化学术年会暨全国人工肝及血液净化攻关协作组成立大会论文集[C];2004年
7 唐南洪;王晓茜;李秀金;陈燕凌;;构建特异高表达人谷氨酰胺合成酶基因(hGS)的肝细胞[A];第三届全国重型肝病及人工肝血液净化学术年会论文集(上册)[C];2007年
8 徐冬云;江仲文;;红曲霉谷氨酸脱羧酶的性质研究[A];2007年学术年会论文集[C];2007年
9 单彩云;刘春燕;姜振峰;邱红梅;单大鹏;张大伟;胡国华;陈庆山;;温度对黑龙江大豆主栽品种球蛋白的影响[A];中国作物学会2007年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2007年
10 黄家强;卜夏;李卓娅;龚非力;;人TNFα分泌型、跨膜型和跨膜稳定型重组体的构建表达及杀瘤效应[A];生命科学与生物技术:中国科协第三届青年学术年会论文集[C];1998年
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1 张冬梅;牙龈卟啉单胞菌侵入血管内皮细胞后粘附分子表达及信号调控的研究[D];中国医科大学;2008年
2 彭莹;土星拟威尔酵母WC91-2菌株嗜杀因子和β-1,3-葡聚糖酶的研究[D];中国海洋大学;2010年
3 张曈;海洋季也蒙毕赤酵母重组菊粉酶及其在产乙醇中的应用[D];中国海洋大学;2010年
4 刘伟;怀头鲇Silurus soldatovi早期发育生理生态学研究[D];中国海洋大学;2010年
5 隋建新;单增李斯特菌鸡卵黄抗体的抑菌性能及其机理研究[D];中国海洋大学;2010年
6 李彧娜;微孢根霉华根霉变种CICIM F0088生淀粉酶系的研究[D];江南大学;2010年
7 郭金玲;酵母全细胞不对称还原法合成光学纯α-羟基酸及其脱氢酶特性的研究[D];江南大学;2010年
8 徐军;富苯丙氨酸碱性短肽的发现及其对蛋白质等电点和免疫交叉反应的影响[D];华南理工大学;2010年
9 黄曼;电子束辐照在线杀虫/菌效果及对小麦品质影响的研究[D];华南理工大学;2010年
10 梁勇;白念珠菌高铁还原酶基因表达调控及Aft2p转录因子的功能研究[D];南开大学;2010年
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1 于宾宾;表达猪β-防御素-2成熟肽重组酵母工程菌的构建[D];华中农业大学;2010年
2 李浩丽;Bacillus pumilus CN8菌株高效降解猪血Hb酶的分离纯化与降解机制探讨[D];华中农业大学;2010年
3 荣保华;藕带多酚氧化酶性质及藕带保鲜初步研究[D];华中农业大学;2010年
4 朱晓娟;重组免疫毒素抗c-Met/PE38KDEL的构建、表达、纯化及初步鉴定[D];南京医科大学;2009年
5 洪伟;酪蛋白中血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的研究[D];安徽工程大学;2010年
6 陈晓平;家蚕30kD载脂蛋白19G1的表达和功能的初步研究[D];浙江理工大学;2010年
7 钱静;携带Apoptin双调控溶瘤腺病毒治疗肝癌的研究[D];浙江理工大学;2010年
8 辛宁;PDX-1真核表达载体构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达[D];郑州大学;2010年
9 陆玉成;AMF基因在食管鳞癌细胞株中的表达及功能初步分析[D];郑州大学;2010年
10 吕文兵;杜氏盐藻异养转化藻株的鉴定及初步功能分析[D];郑州大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 肖扬,焦炳华,朱玉平,娄永华,王路;重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子的抗肿瘤活性[J];第二军医大学学报;2001年07期
2 邓永强,邱蔚六;TNP-470联合应用其它疗法抗肿瘤治疗的研究进展[J];国外医学.口腔医学分册;2001年06期
3 付生法,陆应麟,张朝山,陈坤;检测血管生长因子作用的鸡胚绒毛尿囊膜技术[J];军事医学科学院院刊;1993年04期
4 杨红,乌垠,李玉新,麻彤晖,黄百渠;血管抑素及其抑瘤作用的研究进展[J];科学通报;2000年21期
【相似文献】
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1 樊红 ,李钰 ,邓艳秋;人肺癌中OPB7-1 cDNA片段的克隆定位[J];哈尔滨医科大学学报;2003年05期
2 温进坤,姜玲玲,贾根深,魏素珍;内皮素cDNA片段的分离及测序[J];中国生物化学与分子生物学报;1993年01期
3 阮庆国;利用亲和捕获法筛选杂交体(SHAC):一种获得染色体特定区带富集的cDNA片段的方法[J];国外医学.分子生物学分册;1996年05期
4 鲍永利,杨贵贞,于永利;人IL-1βPCR-cDNA片段的克隆及鉴定[J];中国免疫学杂志;1994年04期
5 郭长青,王明荣,陈宝生,李继昌,徐昕,蔡岩,韩亚玲,刘国永,吴旻;D10-86cDNA片段在人食管癌中的表达[J];中国肿瘤临床;2002年01期
6 刘皓,刘秉文;编码人肝脂解激活受体跨膜域和配体结合域的基因cDNA片段的克隆及表达[J];中国病理生理杂志;2003年11期
7 李昆霖,吴国明,黄桂君,钱桂生,徐智,陈杰;肺腺癌多药耐药细胞株特异表达的新基因cDNA片段在肺癌组织中表达的研究[J];解放军医学杂志;2004年12期
8 夏英,杨梅英;用PCR-SSCP法鉴定差异显示中正确的阳性克隆cDNA片段[J];中国辐射卫生;2002年01期
9 刘桂中,刘芝华,Giovanni Levi,吴旻;受全反式维甲酸调节的人肺腺癌细胞系cDNA片段RAa7的克隆[J];自然科学进展;1999年11期
10 戴旭芳,连继勤,张玉静,胡仲明;人层粘连蛋白α4链LG3-4组件的克隆和表达[J];第三军医大学学报;2005年11期
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1 万涛;叶玲;倪彬;刘建伟;周宁新;;人胆管癌相关cDNA片段L2克隆测序研究[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
2 黄昀;闫承慧;杨硕;傅松滨;;一个cDNA片段在肺癌细胞系中转录水平的研究[A];中国的遗传学研究——中国遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编[C];2003年
3 陈晓红;黄勤妮;印莉萍;;小麦金属反应元件结合蛋白cDNA片段的克隆[A];全国植物分子生物学与生物技术学术研讨会论文集[C];2000年
4 黄烈健;陈祖旭;张卫华;;相思寒胁迫诱导的cDNA片段克隆的研究[A];第三届南方林木育种研讨会论文(摘要)集[C];2006年
5 王金富;魏红;;新疆绵羊β-防御素-1cDNA片段的克隆及在毕赤酵母中的表达[A];动物生理生化学分会第八次学术会议暨全国反刍动物营养生理生化第三次学术研讨会论文摘要汇编[C];2004年
6 于海芹;卢秀萍;白永富;;烟草诱导抗病与生长调控相关基因cDNA片段的克隆[A];中国烟草学会2006年学术年会论文集[C];2007年
7 蔺万煌;周清明;李栒;萧浪涛;黄璜;;商陆高亲和力K~+转运体相关基因cDNA片段的克隆[A];中国植物生理学会第九次全国会议论文摘要汇编[C];2004年
8 王建军;韩召军;王荫长;;抗性小菜蛾钠离子通道cDNA片段的克隆[A];走向21世纪的中国昆虫学——中国昆虫学会2000年学术年会论文集[C];2000年
9 江三多;杜亚松;钱伊萍;李飞;张野;汪栋祥;江开达;;cDNA代表差异分析应用—一对孤独症同卵双生儿的EST研究[A];中国神经科学学会精神神经专业委员会成立大会暨第一届学术会议论文集[C];2004年
10 于喜艳;赵双宜;何启伟;;甜瓜果实酸性转化酶基因cDNA片段的克隆、反义表达载体的构建和烟草的遗传转化[A];蔬菜分子育种研讨会论文集[C];2004年
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1 陆志城;你方唱罢我登场[N];医药经济报;2002年
2 记者 李水根;甲肝病毒研究又出新成果[N];健康报;2001年
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1 吴瑞英;极低频磁场影响细胞基因转录的研究[D];浙江医科大学;1998年
2 邱广斌;1.喉癌相关新基因MTLC的克隆及特性分析  2.hTERT cDNA片段的克隆、表达、单抗制备及应用研究[D];中国医科大学;2003年
3 袁莉刚;大鼠RSA14-44基因功能的初步研究[D];甘肃农业大学;2004年
4 李文凤;小麦抗条锈病相关基因cDNA片段及Yr10候选基因的克隆[D];中国农业科学院;2001年
5 张荣意;香蕉果实炭疽病病程和病理生理生化及病程相关cDNA片段的克隆[D];华南热带农业大学;2004年
6 韩壮;mRNA-DD法克隆、鉴定脊索瘤相关基因cDNA片段及FHIT基因与脊索瘤相关性的实验研究[D];中国医科大学;2003年
7 李尚伟;性逆转石斑鱼性腺差异表达基因的克隆鉴定及其表达研究[D];四川大学;2004年
8 谢华;杜氏盐藻(Dunaliella salina)硝酸盐还原酶基因的克隆、表达及功能鉴定[D];郑州大学;2004年
9 吴毓;核糖核酸酶抑制因子的基因修饰对其活性的影响[D];大连医科大学;2004年
10 谢晓东;小麦杂交当代和亲本自交种子发育早期的基因表达差异与杂种优势[D];中国农业大学;2003年
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1 刘宇飞;棉纤维起始相关基因的cDNA片段克隆及分析[D];中国农业大学;2004年
2 关丽英;缺铁相关3.3kb cDNA片段的结构分析和功能研究[D];首都师范大学;2002年
3 孙钢;Nm23-H1cDNA片段克隆及腺病毒载体的构建[D];昆明医学院;2003年
4 邱杨;小白菜耐盐性的遗传分析与耐盐相关基因的差异表达研究[D];中国农业科学院;2004年
5 舒伟;小麦抗条锈基因Yr4近等基因系苗期接种后差异表达的cDNA片段的分离[D];中国农业大学;2004年
6 李红梅;小麦光周期相关cDNA片段的克隆及鉴定[D];山东农业大学;2003年
7 李昆霖;两条新肺腺癌多药耐药相关基因cDNA片段在肿瘤组织中表达的研究[D];第三军医大学;2003年
8 王朝霞;茶树β-1,3-葡聚糖酶基因cDNA片段的克隆与序列分析[D];安徽农业大学;2001年
9 张海英;mRNA差异显示分离水稻抗稻瘟病基因的相关cDNA片段[D];四川农业大学;2003年
10 刘维仲;缺铁胁迫下小麦根基因表达的差异及差异cDNA片段的克隆[D];首都师范大学;2000年
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